動物源食品中兩對糖皮質(zhì)激素同分異構(gòu)體的同時(shí)檢測方法
【專利說明】動物源食品中兩對糖皮質(zhì)激轟同分異構(gòu)體的同時(shí)檢測方法 所屬技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于分析化學(xué)、食品安全檢測領(lǐng)域，涉及一種動物源食品中倍他米松和地 塞米松、氣米龍和去輕米松的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法，尤其是能將倍他米松和地塞 米松、氣米龍和去輕米松兩對同分異構(gòu)體色譜分離并確證分析。
【背景技術(shù)】
[0002]倍他米松炬etamethasone)和地塞米松值examethasone)、氣米龍 (Fluorometholone)和去輕米松值esoxinetasone)屬于糖皮質(zhì)激素類獸藥，在養(yǎng)殖業(yè)中 存在濫用、誤用的情況，使得一些動物源食品中會出現(xiàn)該類激素獸藥的殘留問題，長期食用 含有糖皮質(zhì)激素類獸藥的動物源食品會影響機(jī)體的激素平衡，對幼兒可造成發(fā)育異常的后 果，而且有致癌危險(xiǎn)。國內(nèi)外對其在食品中的最高殘留量均做了限制，而對食品中糖皮質(zhì)激 素進(jìn)行控制需要準(zhǔn)確的分析方法做支持。但由于倍他米松和地塞米松、氣米龍和去輕米松 是兩對差向異構(gòu)體，該種僅在碳原子構(gòu)型上不同的非對映異構(gòu)體在色譜行為上非常相似， 難W完全分離。通常該類異構(gòu)體的分離需要使用非常規(guī)的手性色譜分離柱，但成本較高，難 W廣泛應(yīng)用。目前的檢測分析方法均無法使用常規(guī)色譜柱對該兩對異構(gòu)體進(jìn)行色譜分離， 使得當(dāng)樣品顯示陽性時(shí)，無法判斷是含有混合物還是單一異構(gòu)體，也無法確證是哪一種異 構(gòu)體，給檢測結(jié)果的判定帶來困難，容易造成錯誤判斷。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 為降低檢測成本、提高檢測準(zhǔn)確性，本發(fā)明目的是提供一種能夠使用常規(guī)色譜柱 分離倍他米松和地塞米松、氣米龍和去輕米松是兩對異構(gòu)體的方法，可同時(shí)檢測動物源食 品中倍他米松、地塞米松、氣米龍、去輕米松的殘留量。
[0004] 本發(fā)明為實(shí)現(xiàn)上述目的所采用的技術(shù)方案是；一種能夠使用常規(guī)色譜柱檢測動物 源食品中倍他米松和地塞米松、氣米龍和去輕米松是兩對異構(gòu)體的方法，包括如下步驟：
[0005] (1)樣品提??；稱取2.5-5. Og樣品，加入20血甲醇，潤旋后振蕩15min，超聲 lOmin，1000化/min離也5min，上清液移出至旋蒸瓶，40°C W下旋蒸至近干。將旋蒸瓶內(nèi)液 體轉(zhuǎn)移至離也試管，用2ml甲醇洗涂旋蒸瓶，洗涂液轉(zhuǎn)入試管，用水定容至14ml，潤旋混勻 2min, lOOOOr/min離也5min,收集上清液待用。
[0006] (2)提取液凈化；將固相萃取柱裝好，用甲醇5ml，水5ml活化，將提取液上柱，控制 流速< 2ml/min，分別用淋洗液4ml，正己焼5ml淋洗，使用6ml甲醇洗脫。洗脫液40°C W下 氮?dú)獯蹈桑尤?ml定容液定容，超聲Imin，過0. 2 y m濾膜過濾。
[0007] (3)使用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定。
[0008] 高效液相色譜條件：
[0009]色譜柱；Acquity U化C 邸H C18,1. 7 y m, 2. 1 X 100mm ;
[0010]柱溫；3(TC;
[0011]進(jìn)樣量；5yl;
[001引流動相A;含甲醇的己膳，流動相B;含甲醇的水，梯度洗脫；
[0013]流速；0.3ml/min。
[0014] 質(zhì)譜條件：
[001引離子化模式；ESI+;
[001引 源電壓；2. 5kV;
[0017] 錐孔電壓；30V;
[001引 源溫度；120 C;
[0019] 脫溶劑氣溫度；35(TC;
[0020] 脫溶劑氣流量；650L/H;
[0021] 錐孔氣流量；50L/H。
[002引在步驟似中所述固相萃取柱為ENVI-18固相萃取住或HLB固相萃取柱。
[0023] 在步驟（2)中所述淋洗液為丙麗+水（2+8, v/v)。
[0024] 在步驟似中所述定容液為己膳+水（3+7, v/v)。
[002引在步驟做中所述流動相A為己膳+甲醇（90+5，v/v)，流動相B為水+甲醇巧0+5， v/v)。
[0026] 在步驟（3)中所述梯度洗脫的梯度變化為：
[0027]0~7分鐘，流動相A30 %，流動相B70 %;
[002引 7~10分鐘，流動相A30~50 %，流動相B70~50 % ;
[0029]10~12分鐘，流動相A50~70%，流動相B50~30%;
[0030] 12~13分鐘，流動相A70~30 %，流動相B30~70 %;
[0031] 13~15分鐘，流動相A30 %，流動相B70 %;
[0032] 進(jìn)一步地，所述動物源食品選自豬肉、牛肉、羊肉、羊肝、雞蛋、牛奶、蜂蜜。
[0033] 進(jìn)一步地，所述糖皮質(zhì)激素包括倍他米松和地塞米松、氣米龍和去輕米松的至少 一種。
[0034] 本發(fā)明的有益效果是：
[0035]1本發(fā)明的檢測方法可W同時(shí)測定動物源食品中的倍他米松和地塞米松、氣米龍 和去輕米松。
[0036]2本發(fā)明能夠色譜分離倍他米松和地塞米松、氣米龍和去輕米松兩對異構(gòu)體，可W 判斷是含有混合物還是單一異構(gòu)體。
[0037] 3本發(fā)明使用串聯(lián)質(zhì)譜檢測可W對結(jié)果進(jìn)行確證。
[0038] 4本發(fā)明的檢測方法檢測限地塞米松0.2 yg/kg，倍他米松、氣米龍和去輕米松 0. 4 y g/kg，滿足國內(nèi)外殘留量法規(guī)限制要求。
【附圖說明】
[0039] 圖1是本發(fā)明倍他米松和地塞米松、氣米龍和去輕米松的TIC譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0040] 下面將通過實(shí)例對本發(fā)明做進(jìn)一步的描述，該些描述將有助于本領(lǐng)域的技術(shù)人員 進(jìn)一步理解本發(fā)明，但本發(fā)明并不局限于具體實(shí)施例。
[0041] 實(shí)施例1羊肉中倍他米松和地塞米松、氣米龍和去輕米松的測定。
[0042] (1)樣品提?。环Q取2. 5g混勻樣品，加入20血甲醇，潤旋后振蕩15min，超聲 lOmin，1000化/min離也5min，上清液移出至旋蒸瓶，40°C W下旋蒸至近干。將旋蒸瓶內(nèi)液 體轉(zhuǎn)移至離也試管，用2ml甲醇洗涂旋蒸瓶，洗涂液轉(zhuǎn)入試管，用水定容至14ml，潤旋混勻 2min, lOOOOr/min離也5min,收集上清液待用。
[0043] (2)提取液凈化；將固相萃取柱裝好，用甲醇5ml，水5ml活化，將提取液上柱，控制 流速< 2ml/min，分別用淋洗液4ml，正己焼5ml淋洗，使用6ml甲醇洗脫。洗脫液40°C W下 氮?dú)獯蹈?，加?ml定容液定容，超聲Imin，過0. 2 y m濾膜過濾。
[0044] (3)使用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定。
[0045] 高效液相色譜條件：
[0046] 色譜柱；AcquityU化CB邸C18,1. 7ym，2. 1X100mm;柱溫：3(TC;進(jìn)樣量；5y1 ; 流動相A;己膳+甲醇巧0+5,v/v)，流動相B;水+甲醇巧0+5,v/v);流速；0. 3ml/min梯度 洗條件見表1。
[0047] 質(zhì)譜條件：
[004引離子化模式；ESI+ ;源電壓；2. 5kV ;錐孔電壓；30V ;源溫度；12(TC ;脫溶劑氣溫 度；35(TC ;脫溶劑氣流量；650L/H ;錐孔氣流量；5化/H。W多反應(yīng)檢測模式實(shí)驗(yàn)，各化合物 離子對及其參數(shù)見表2.
[0049] 表1流動相梯度洗脫條件
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 動物源食品中兩對糖皮質(zhì)激素同分異構(gòu)體的同時(shí)檢測方法，其基本特征在于本方法 包括以下步驟： (1) 樣品提取：稱取2. 5-5. Og樣品，加入20mL甲醇，渦旋后振蕩15min，超聲lOmin， 10000r/min離心5min,上清液移出至旋蒸瓶,40°C以下旋蒸至近干。將旋蒸瓶內(nèi)液體轉(zhuǎn)移 至離心試管，用2ml甲醇洗滌旋蒸瓶，洗滌液轉(zhuǎn)入試管，用水定容至14ml，渦旋混勻2min， 10000r/min離心5min，收集上清液待用。 (2) 提取液凈化：將固相萃取柱裝好，用甲醇5ml，水5ml活化，將提取液上柱，控制流速 < 2ml/min，分別用淋洗液4ml，正己烷5ml淋洗，使用6ml甲醇洗脫。洗脫液40°C以下氮?dú)?吹干，加入1ml定容液定容，超聲Imin,過0. 2 ii m濾膜過濾。 (3) 使用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的動物源食品中兩對糖皮質(zhì)激素同分異構(gòu)體的同時(shí)檢測方法， 其特征在于步驟（1)中洗滌旋蒸瓶的溶劑為甲醇。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的動物源食品中兩對糖皮質(zhì)激素同分異構(gòu)體的同時(shí)檢測方法， 其特征在于步驟（1)中用水定容的體積為14ml。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的動物源食品中兩對糖皮質(zhì)激素同分異構(gòu)體的同時(shí)檢測方法， 其特征在于步驟（2)中所用固相萃取柱為ENVI-18固相萃取住或HLB固相萃取柱。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的動物源食品中兩對糖皮質(zhì)激素同分異構(gòu)體的同時(shí)檢測方法， 其特征在于步驟（2)中淋洗液為丙酮+水（2+8, v/v)。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的動物源食品中兩對糖皮質(zhì)激素同分異構(gòu)體的同時(shí)檢測方法， 其特征在于步驟（2)中定容液為乙腈+水（3+7, v/v)。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的動物源食品中兩對糖皮質(zhì)激素同分異構(gòu)體的同時(shí)檢測方法， 其特征在于步驟（3)中液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定條件為： 高效液相色譜條件： 色譜柱：Acquity UPLC BEH C18,1. 7 ii m，2. I X IOOmm ; 柱溫：30°C ; 進(jìn)樣量：5iU ; 流動相A :含甲醇的乙腈，流動相B :含甲醇的水，梯度洗脫； 流速：〇? 3ml/min。 質(zhì)譜條件： 離子化模式：ESI+ ; 源電壓：2. 5kV ; 錐孔電壓：30V ; 源溫度：120°C ; 脫溶劑氣溫度：350°C ; 脫溶劑氣流量：650L/H ; 錐孔氣流量：50L/H。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的動物源食品中兩對糖皮質(zhì)激素同分異構(gòu)體的同時(shí)檢測方法， 其特征在于所述流動相A為乙腈+甲醇（90+5, v/v)，流動相B為水+甲醇（90+5, v/v)。
9. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的動物源食品中兩對糖皮質(zhì)激素同分異構(gòu)體的同時(shí)檢測方法， 其特征在于所述梯度洗脫的梯度變化為： O~7分鐘，流動相A30 %，流動相B70 % ; 7~10分鐘，流動相A30~50%，流動相B70~50% ; 10~12分鐘，流動相A50~70%，流動相B50~30% ; 12~13分鐘，流動相A70~30%，流動相B30~70% ; 13~15分鐘，流動相A30 %，流動相B70 %。
10.根據(jù)權(quán)利要求1至9所述的動物源食品中兩對糖皮質(zhì)激素同分異構(gòu)體的同時(shí)檢測 方法，其特征在于所述兩對糖皮質(zhì)激素同分異構(gòu)體包括倍他米松和地塞米松、氟米龍和去 羥米松的至少一種。
【專利摘要】動物源食品中兩對糖皮質(zhì)激素同分異構(gòu)體的同時(shí)檢測方法。本發(fā)明采用常規(guī)色譜柱分離倍他米松和地塞米松、氟米龍和去羥米松兩對異構(gòu)體，可同時(shí)檢測動物源食品中倍他米松、地塞米松、氟米龍、去羥米松的殘留量并進(jìn)行確證。液相色譜使用C18色譜柱，流動相分別為含甲醇的乙腈和含甲醇的水，串聯(lián)質(zhì)譜檢測。倍他米松和地塞米松、氟米龍和去羥米松兩對異構(gòu)體能夠色譜分離，地塞米松檢測限為0.2μg/kg，倍他米松、氟米龍和去羥米松檢測限為0.4μg/kg，滿足國內(nèi)外殘留量法規(guī)限制要求，方法簡便準(zhǔn)確、靈敏可靠。
【IPC分類】G01N30-02
【公開號】CN104749270
【申請?zhí)枴緾N201310756777
【發(fā)明人】潘國卿, 鄭書展, 牟峻, 李剛, 張春艷, 白國濤
【申請人】內(nèi)蒙古出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心
【公開日】2015年7月1日
【申請日】2013年12月27日