利用高效液相色譜法檢測白沙蒿黃酮成分的方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明設及一種白沙富中黃酬成分種類和含量的檢測方法，尤其設及利用高效液 相色譜法檢測白沙富黃酬成分的方法。
【背景技術】
[0002] 白沙富ylrtefflisia巧如Kraschen是菊科富屬植物，又名圓頭沙富，半 灌木，生于荒漠及半荒漠帶的流動沙丘及半固定沙丘。由于長期生活在氣候干燥、日照強 烈、晝夜溫差大和多風沙的惡劣環(huán)境中，白沙富形成了自身獨特的適應機制。有研究報道， 從白沙富中分離得到多種黃酬類化合物，具有明顯的抗氧化活性，能夠清除自由基，降低惡 劣環(huán)境對植物的損失。此外，白沙富所含的黃酬成分還具有調節(jié)屯、血管系統(tǒng)、保護神經系 統(tǒng)、抗過敏及治療皮炎、抗細菌及微生物、抗癌及基因毒性、提高其他藥物生物利用度等多 種功能與應用（李林蜜，2007.白沙富化學成分研究.碩±畢業(yè)論文，河南大學)。然而到目 前為止，關于白沙富成分的檢測方法未見報道。

【發(fā)明內容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于提供一種利用高效液相色譜法檢測白沙富黃酬成分的方法。
[0004] -、白沙富黃酬成分的檢測 1、試驗樣品的處理(提取白沙富有效成分）；采集新鮮白沙富植物樣品，陰干，粉碎，過 100目篩；稱取0. 1~0.8 g溶于5~30血己醇中，超聲提取20~80 min;采用1.5血離屯、管 離屯、3~5 min,上清液用0. 45 y m微孔濾膜濾過，為待測液。
[0005] 2、白沙富黃酬成分的檢測方法 高效液相色譜條件；采用Agilent-1100高效液相色譜儀，GraceSmart RP18反相色譜 柱；W質量百分數0. 2%醋酸水（A)和甲醇（B)為流動相，流動相總流速為0. 6 mL/min，檢測 波長為275皿。
[000引流動相的體積配比、檢測順序及保留時間依次為： 30%B、70%A，0-5 min ; 30-50%B、50-70%A，5-10 min; 50%B、50%A，10-20 min; 50-60% B、40-50%A，20-30 min ; 60%B、40%A，30-45 min ; 60-70%B、30-40%A，45-50 min; 70%B、30%A，50-60min0 [0007] 二、檢測方法的評價 1、線性考察 W購于試劑公司的藥品蘆了為對照品，溶解于80%甲醇溶液中，配置為1. 0 mg/mL濃 度，通過0.45 ym濾膜過濾，備用。分別取該對照品溶液加入不同體積的色譜純甲醇，稀釋 至0. 5、0. 2、0. 1、0. 05、0. 02、0. 01和0. 005 mg/mL。每種溶液各進樣20 uL。按上述色譜 條件測定峰面積積分值，W峰面積積分值為縱坐標，W對照品濃度為橫坐標，經線性回 歸處理得標準曲線，r〉0. 9993,線性范圍為0. 5-0. 005 mg/mL。結果表明，線性關系良好，符 合測定要求。
[000引 2、精密度的考察 精密吸取白沙富樣品溶液20 ^以連續(xù)進樣6次，測定峰面積積分值，RSD為0.76 %。 表明儀器精密度良好。
[0009] 3、重復性的考察 取同一地點同一時間段所采白沙富樣品5份，精密稱定同一質量，按同樣的方法超聲 提取，利用W上測定方法重復測定，計算得RSD為1.37 %。表明該方法的重復性良好。
[0010] 4、穩(wěn)定性的考察 精密吸取白沙富樣品溶液20 分別于配制后0、2、4、8、12、24h測定峰面積，計算 RSD為0.90 %，表明供試品溶液在24 h內穩(wěn)定。
[0011] 5、回收率試驗 精密稱取同一地點同一時間段所采白沙富樣品0. 1 g，加入10血無水己醇和0.1 mg/ 血蘆了標準對照液1. 0血，超聲提取30min，通過0. 45 y m微孔濾膜過濾，取溶液20 y L， 測定蘆了的峰面積，計算回收率。平行重復5次。結果見表1。該方法回收率〉98%，RSD為 1. 08 %，回收率高，能準確反映樣本中黃酬的實際含量。
【主權項】
1.利用高效液相色譜法檢測白沙蒿黃酮成分的方法，其工藝步驟如下： 試驗樣品的處理：采集新鮮白沙蒿植物樣品，陰干，粉碎，過100目篩；稱取〇.l~〇. 8 g 溶于5~30 mL乙醇中，超聲提取20~80 min;采用離心管離心3~5 min，上清液用0. 45 ym 微孔濾膜濾過，得待測液； 高效液相色譜條件：采用Agilent-1100高效液相色譜儀，反相硅膠色譜柱，以質量百 分數0. 2%醋酸水(A相）和甲醇（B相）為流動相，流動相總流速為0. 3~1. 5 mL/min，檢測波 長為275nm ; 流動相的體積配比、檢測順序及保留時間依次為： 30%B，70%A，0-5 min ; 30-50%B，50-70%A，5-10 min; 50%B，50%A，10-20 min ; 50-60% B,40-50%A,20-30 min ； 60%B,40%A,30-45 min ； 60-70%B，30-40%A，45-50 min; 70%B，30%A，50-60min。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種利用高效液相色譜法檢測白沙蒿中黃酮成分與含量的方法。以質量百分數0.2%醋酸水和甲醇為流動相，流動相總流速為0.3~1.5 mL/min，檢測波長為275 nm，可以對白沙蒿黃酮成分的種類和含量進行準確有效的分析和檢測。本發(fā)明樣品處理簡單，重復性好，檢測精度高，檢測成本低，對于深入研究白沙蒿抗逆性以及科學合理開發(fā)白沙蒿資源具有非常重要的意義。
【IPC分類】G01N30-02
【公開號】CN104749275
【申請?zhí)枴緾N201510115741
【發(fā)明人】劉權, 傅華, 南志標
【申請人】蘭州大學
【公開日】2015年7月1日
【申請日】2015年3月16日