一種阿茲海默病的生物標(biāo)記檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種阿茲海默病的生物標(biāo)記檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 老年癡呆大致可分為早老性癡呆（阿茲海默病，AD)和血管性癡呆（vascular dementia，VD)和二者混合型。AD更常見，也研宄得更多。該病可能是一組異質(zhì)性疾病，在 多種因素（包括生物和社會(huì)心理因素）的作用下才發(fā)病。從目前研宄來看，該病的可能因 素和假說多達(dá)30余種，如家族史、女性、頭部外傷、低教育水平、甲狀腺病、母育齡過高或過 低、病毒感染等。
[0003] 老年癡呆是目前世界性的醫(yī)療護(hù)理難題，其發(fā)病機(jī)理非常復(fù)雜，病因至今尚未清 楚，包括多種假說，如神經(jīng)遞質(zhì)缺陷、炎癥、自由基損傷、淀粉樣蛋白、神經(jīng)毒作用、激素缺 乏、細(xì)胞凋亡等。正是由于其發(fā)病機(jī)理的不確定性，所以到目前為止，對(duì)于老年癡呆的治療 尚沒有確實(shí)有效的方法。更多的時(shí)候，在患者確診為老年癡呆后，治療手段局限于穩(wěn)定病 情，減緩病情的惡化。
[0004] 顯然，對(duì)于阿茲海默病的檢測(cè)，有著非常重要的社會(huì)意義，越早檢查出病患，越早 介入治療，無論對(duì)于患者還是患者家屬，都起到了積極作用。傳統(tǒng)的阿茲海默病檢測(cè)一般為 腦電圖，腦CT以及軀體檢驗(yàn)，更多的需要醫(yī)生依靠經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行主觀判斷。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種定量檢測(cè)阿茲海默病的生物標(biāo)記檢測(cè)方法。
[0006] 實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的技術(shù)方案是一種阿茲海默病的生物標(biāo)記檢測(cè)方法，包括下列步 驟：（1)收集處理血清樣品；（2)通過基于DNA測(cè)序儀的熒光輔助糖電泳DSA-FACE技術(shù)熒光 標(biāo)記血清樣品中糖蛋白的寡糖鏈；(3)電泳分離測(cè)量樣本中已熒光標(biāo)記的寡糖鏈的含量并 獲取寡糖鏈指紋圖譜；(4)分析寡糖鏈指紋圖譜。
[0007] 優(yōu)選的步驟（1)中血清樣品來自48位阿茲海默患者、31位非阿茲海默癡呆患者去 唾液酸的血清及154位健康捐獻(xiàn)者的血清。
[0008] 優(yōu)選的步驟（3)中測(cè)量樣本劃分為年齡控制組即99位不大于60歲和55位大于 60歲，以及癡呆組79位即阿茲海默患者和非阿茲海默癡呆患者的總和，具體為24位男性和 24位女性的阿茲海默患者以及18位男性和13位女性的非阿茲海默癡呆患者。
[0009] 優(yōu)選的步驟（4)中寡糖鏈指紋對(duì)應(yīng)N糖鏈，血清樣品被檢測(cè)的N糖鏈以峰高顯示 為峰1-9,通過量化計(jì)算圖譜中的峰，在同年齡的癡呆組中，其寡糖鏈的含量值高于同齡的 健康組；寡糖鏈結(jié)構(gòu)相對(duì)濃度的峰的大小顯示阿茲海默患者和非阿茲海默癡呆患者峰值比 年齡控制組的顯著較高，在女性患者群中更顯著。
[0010] 本發(fā)明具有積極的效果：通過檢測(cè)血清樣品糖組中糖蛋白改變?yōu)榧夹g(shù)依據(jù)，檢測(cè) 寡糖圖譜在老年癡呆組血清中的變化，寡糖鏈指紋圖譜可作定量檢測(cè)阿茲海默病的指標(biāo)， 對(duì)其發(fā)病的程度進(jìn)行定量評(píng)估檢測(cè)；操作方便，適用于各種大小分析化學(xué)和生物實(shí)驗(yàn)室，也 適用于大通量大規(guī)模的測(cè)試。
【附圖說明】
[0011] 為了使本發(fā)明的內(nèi)容更容易被清楚地理解，下面根據(jù)具體實(shí)施例并結(jié)合附圖，對(duì) 本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，其中
[0012] 圖1為寡糖鏈指紋對(duì)應(yīng)N糖鏈結(jié)構(gòu)圖；
[0013] 圖2為年齡控制組和癡呆組的血清樣品總N鏈中被檢測(cè)的N糖鏈峰圖，垂直軸代 表總N糖鏈峰高百分比平均值的95%的置信區(qū)間；
[0014] 圖3為血清樣品9號(hào)總峰的N糖鏈，垂直軸代表總N糖鏈峰高百分比平均值的95% 的置信區(qū)間；
[0015]圖4為9號(hào)總峰在年齡控制組中識(shí)別出癡呆患者的特異性和靈敏度工作特性曲 線；
[0016] 圖5為血清樣品6號(hào)總峰的N糖鏈，垂直軸代表總N糖鏈峰高百分比平均值的95% 的置信區(qū)間；
[0017] 圖6為6號(hào)總峰在年齡控制組和非阿茲海默癡呆患者中識(shí)別出阿茲海默癡呆患者 的特異性和靈敏度工作特性曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 研宄對(duì)象的分類：
[0019] 病人的人口統(tǒng)計(jì)、主要臨床和神經(jīng)病理學(xué)數(shù)據(jù)總結(jié)在表1中。腦脊液臨床診斷取 樣于48位阿茲海默癥患者（24位男性，24位女性），還包括額顳葉癡呆、血管性癡呆、路易 體癡呆患者們組成一組（18位男性，13位女性）。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種阿茲海默病的生物標(biāo)記檢測(cè)方法，包括下列步驟：（1)收集處理血清樣品；（2) 通過基于DNA測(cè)序儀的熒光輔助糖電泳DSA-FACE技術(shù)熒光標(biāo)記血清樣品中糖蛋白的寡糖 鏈；（3)電泳分離測(cè)量樣本中已熒光標(biāo)記的寡糖鏈的含量并獲取寡糖鏈指紋圖譜；(4)分析 寡糖鏈指紋圖譜。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的阿茲海默病的生物標(biāo)記檢測(cè)方法，其特征在于：步驟（1)中 血清樣品來自48位阿茲海默患者、31位非阿茲海默癡呆患者去唾液酸的血清及154位健康 捐獻(xiàn)者的血清。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的阿茲海默病的生物標(biāo)記檢測(cè)方法，其特征在于：步驟（3)中 測(cè)量樣本劃分為年齡控制組即99位不大于60歲和55位大于60歲，以及癡呆組79位即阿 茲海默患者和非阿茲海默癡呆患者的總和，具體為24位男性和24位女性的阿茲海默患者 以及18位男性和13位女性的非阿茲海默癡呆患者。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的阿茲海默病的生物標(biāo)記檢測(cè)方法，其特征在于：步驟（4)中 寡糖鏈指紋對(duì)應(yīng)N糖鏈，血清樣品被檢測(cè)的N糖鏈以峰高顯示為峰1-9,通過量化計(jì)算圖譜 中的峰，在同年齡的癡呆組中，其寡糖鏈的含量值高于同齡的健康組；寡糖鏈結(jié)構(gòu)相對(duì)濃度 的峰的大小顯示阿茲海默患者和非阿茲海默癡呆患者峰值比年齡控制組的顯著較高，在女 性患者群中更顯著。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種阿茲海默病的生物標(biāo)記檢測(cè)方法，包括下列步驟：(1)收集處理血清樣品；(2)通過基于DNA測(cè)序儀的熒光輔助糖電泳DSA-FACE技術(shù)熒光標(biāo)記血清樣品中糖蛋白的寡糖鏈；(3)電泳分離測(cè)量樣本中已熒光標(biāo)記的寡糖鏈的含量并獲取寡糖鏈指紋圖譜；(4)分析寡糖鏈指紋圖譜；解決了阿茲海默病的檢測(cè)困難問題；可定量檢測(cè)阿茲海默病，并對(duì)發(fā)病的程度進(jìn)行定量評(píng)估。
【IPC分類】G01N33-68
【公開號(hào)】CN104849474
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510251224
【發(fā)明人】陳翠英
【申請(qǐng)人】先思達(dá)（南京）生物科技有限公司
【公開日】2015年8月19日
【申請(qǐng)日】2015年5月17日