同時(shí)測(cè)定水環(huán)境中6種痕量酚類環(huán)境內(nèi)分泌干擾物的分析方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及環(huán)境分析化學(xué)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種同時(shí)測(cè)定水環(huán)境中6種痕量酪類環(huán) 境內(nèi)分泌干擾物的分析方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 環(huán)境內(nèi)分泌干擾物巧DCs)是指通過(guò)干擾生物體內(nèi)保持自身平衡和調(diào)節(jié)發(fā)育過(guò)程 中天然激素的合成、分泌、運(yùn)輸、代謝、結(jié)合、反應(yīng)、消除等生物過(guò)程的外源性化學(xué)物質(zhì)。該些 有機(jī)污染物具有毒性持久性、危害潛伏性和生物積累性，可通過(guò)人們的工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和生活 活動(dòng)進(jìn)入水環(huán)境，并經(jīng)食物鏈富集逐級(jí)放大，直接或間接地進(jìn)入人體并造成健康危害。水環(huán) 境中最具代表性的酪類?ài)s主要是辛基酪（4-t-OP)、枯締基酪（4-CP)、壬基酪（4-NP)、雙 酪A炬PA)、壬基酪二氧己締離（NP2EO)和壬基酪單氧己締離（NP1EO)。在已有的公開(kāi)發(fā)明 專利及科研論文中，并沒(méi)有形成統(tǒng)一的環(huán)境水樣品中酪類?ài)s的分析方法，尤其是同時(shí)分 析上述6種典型痕量酪類?ài)s的方法在我國(guó)水監(jiān)測(cè)規(guī)范、方法標(biāo)準(zhǔn)中至今仍為空白。本發(fā) 明方法旨在建立一種環(huán)境水樣品中典型邸Cs的分析方法。
[000引已公開(kāi)的申請(qǐng)專利"一種同時(shí)測(cè)定水環(huán)境中16種酪類化合物的分析（公開(kāi)號(hào)；CN104267129A)"特征為目標(biāo)物質(zhì)的檢測(cè)濃度范圍為5-1000yg/L、檢測(cè)限為0. 04-4. 0yg/L 和加標(biāo)回收率為77%~112%，其衍生化過(guò)程中采用五氣芐基漠作為衍生化試劑，而五氣 芐基漠刺激皮膚和粘膜，且對(duì)眼睛有催淚效果，造成腐蝕性影響，對(duì)研究人員的身體健康構(gòu) 成了潛在風(fēng)險(xiǎn)。與本發(fā)明專利方法相比，其它已公開(kāi)的申請(qǐng)專利"一種水中苯二酪類物質(zhì) 的檢測(cè)方法（公開(kāi)號(hào)；CN104280447A)"、"同時(shí)檢測(cè)對(duì)笨二酪和鄰苯二酪的方法及應(yīng)用的 氮滲雜石墨締修飾玻碳電極的制備方法（公開(kāi)號(hào)；CN103267787A)"、"環(huán)境廢水中酪類化 合物的檢測(cè)方法"（公開(kāi)號(hào)；CN104215696A)、"一種檢測(cè)痕量酪類環(huán)境雌激素的方法（公 開(kāi)號(hào)為CN103558305A)"和"一種測(cè)定水中痕量氯酪類內(nèi)分泌干擾物的方法（公開(kāi)號(hào)為 CN102768245A)"，所建立方法的目標(biāo)物質(zhì)不同，且種類單一、檢測(cè)范圍較窄，其采用的前處 理設(shè)備和分析儀器存在一定差異，極大的限制了其應(yīng)用價(jià)值。另外，該幾項(xiàng)已公開(kāi)方法的檢 測(cè)濃度范圍和檢測(cè)限遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于本方法，無(wú)法滿足環(huán)境水樣品中低濃度、痕量酪類?ài)s分析 的要求。更為重要的是，它們不包括本方法研究的辛基酪（4-t-OP)、枯締基酪（4-CP)、壬基 酪（4-NP)、壬基酪二氧己締離（NP2EO)和壬基酪單氧己締離（NP1E0)6種典型的酪類?ài)s。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明提供了一種同時(shí)測(cè)定水環(huán)境中6種痕量酪類環(huán)境內(nèi)分泌干擾物的分析方 法，可W同時(shí)測(cè)定環(huán)境水樣中6種典型痕量酪類環(huán)境內(nèi)分泌干擾物（4-t-0P、4-CP、4-NP、BPA、NP1E0和NP2EO)的分析方法，其中，對(duì)4-t-辛基酪（4-t-OP)、4-枯締基酪（4-CP)、4-壬 基酪（4-N巧和雙酪A炬PA)的檢測(cè)線性范圍為0. 5-5(K)ng/L，壬基酪單氧己締離（NP1EO) 和壬基酪二氧己締離（NP2EO)的檢測(cè)線性范圍為5-5(K)ng/L;標(biāo)準(zhǔn)曲線線性系數(shù)（R2)大 于0.99,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差巧SD)小于5.02%;檢出限（LOD)、定量限（LO曲和回收率分別為 0. 10-2. 30ng/L、0. 20-11. 50ng/L和 84. 65% -101. 38%。
[0005] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：
[0006] 同時(shí)測(cè)定水環(huán)境中6種痕量酪類環(huán)境內(nèi)分泌干擾物的分析方法，其特征在于，包 括如下步驟：
[0007] S1、將1L環(huán)境水樣經(jīng)0. 45ym微孔濾膜過(guò)濾后，用鹽酸溶液調(diào)節(jié)抑至4. 5 ;
[000引 S2、用己酸己醋、甲醇和超純水活化Sep-PakC-18固相小柱；
[0009]S3、將步驟S1所得的水樣通過(guò)大體積進(jìn)樣器進(jìn)入步驟S2所得的固相小柱后，在負(fù) 壓條件下，W低于5mL/min的流速過(guò)柱，水樣富集后，用lOmL甲醇-水（1 ; 9，v/v)混合溶 液淋洗固相萃取小柱，W排除小柱上富集雜質(zhì)的干擾，真空干燥40min;
[0010]S4、加入10血二氯甲燒，緩慢打開(kāi)固相萃取儀閥口，使二氯甲燒完全浸沒(méi)小柱填 料后，迅速關(guān)閉閥口，待浸泡l-2min后，打開(kāi)閥n，W小于0. 5mL/min的洗脫速率將洗脫液 收集到12血的棟色試劑瓶中，并用溫和氮?dú)鉂饪s至約500yL;
[0011] S5、將濃縮后的洗脫液轉(zhuǎn)移至1. 5血GC小瓶中，用200uL二氯甲燒，在縱禍振蕩 器上潤(rùn)洗試劑瓶，重復(fù)S次，將潤(rùn)洗液一并轉(zhuǎn)移至1.5mLGC小瓶中；
[001引S6、將GC小瓶中的溶液用高純溫和氮?dú)獯蹈珊?，加?0yLBSTFA和30yL化晚， 蓋緊瓶蓋，振蕩混合均勻，在70°C條件下，衍生化反應(yīng)40min后，靜置至室溫；
[001引S7、加入20yL內(nèi)標(biāo)工作液，振蕩混合均勻，取1yL進(jìn)行GC-MS分析。
[0014] 優(yōu)選的，所述步驟S1中的微孔濾膜為GF/F玻璃纖維濾紙，水樣通過(guò)微孔濾膜流速 為 6mL/min。
[0015] 優(yōu)選的，所述步驟S2中固相小柱的活化過(guò)程為，先用5血己酸己醋去除Sep-Pak C-18固相萃取小柱填料中殘留的粘合劑，再用5mL甲醇低速過(guò)柱，速率為l-2mL/min，最后 加入3X5mL超純水，并保持液面W上約3mL的超純水。
[0016] 優(yōu)選的，所述步驟S3萃取過(guò)程中小柱的內(nèi)液層水樣體積始終大于ImL。
[0017] 優(yōu)選的，所述步驟S4洗脫過(guò)程中，為確保固相萃取小柱富集的目標(biāo)物被完全洗 脫，故二氯甲燒的流出速度應(yīng)小于〇.5mL/min，且當(dāng)二氯甲燒依靠重力作用流出后，應(yīng)緩慢 開(kāi)啟真空累，并使其處于低壓狀態(tài)，將柱內(nèi)液體全部抽出、并收集。
[001引優(yōu)選的，所述步驟S7中的內(nèi)標(biāo)溶液采用正己燒溶解稀釋至5ng/yL的雄燒溶液 (S-D)
[0019] 優(yōu)選的，步驟S7中的GC-MS分析采用DB-5MS毛細(xì)色譜柱，W氮?dú)庾鳛檩d氣，其流 速為1血/min;柱溫箱起始溫度為60°C，W15°C/min的升溫速率升溫至150°C，再W8°C/ min的升溫速率升溫至220°C，保持Imin，最后W15°C/min的升溫速率升溫至290°C，保持 5min;離子源為EI源，溫度為250°C，電子轟擊能量為70eV;掃描方式為全掃面模式定性， 掃描范圍m/z50-600,并W選擇離子掃描模式（SIM)定量。
[0020] 優(yōu)選的，所述步驟S7中的GC-MS分析的進(jìn)樣方式為不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣口溫度為 260°C，進(jìn)樣體積為1yL傳輸線溫度為280°C。
[0021] 本發(fā)明具有W下有益效果：
[002引采用沁p-Pak-C18固相萃取小柱富集酪類?ài)s，并W甲醇-水溶液淋洗小柱，用 二氯甲燒洗脫富集的酪類?ài)s至試劑小瓶中，經(jīng)氮?dú)鉂饪s后，加入BSTFA和化晚進(jìn)行衍生 化反應(yīng)，最后利用GC-MS測(cè)定環(huán)境水樣中的痕量酪類?ài)s;通過(guò)衍生化反應(yīng)，能夠改善色譜 峰型，降低檢測(cè)限，提高GC-MS分析的靈敏度和準(zhǔn)確度；本發(fā)明簡(jiǎn)化了操作，具有分相時(shí)間 短、不易乳化、儀器精密度高、重現(xiàn)性好等優(yōu)勢(shì)，在水環(huán)境的相關(guān)研究中具有較大實(shí)際應(yīng)用 價(jià)值。
【附圖說(shuō)明】
[0023] 圖1為本發(fā)明實(shí)施例中環(huán)境水樣品中6種酪類?ài)s的選擇性離子色譜圖。
[0024] 圖中，橫坐標(biāo)表示時(shí)間，縱坐標(biāo)表示酪類?ài)s經(jīng)BSTFA衍生化后產(chǎn)物BST-4-t-OP、 BST-4-CP、BST-4-NP、BST-NP160、851'-8口4-(116、851'-8口4、851'-郵260和內(nèi)標(biāo)1.5.的響應(yīng)值。
【具體實(shí)施方式】
[0025] 為了使本發(fā)明的目的及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，W下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步 詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用W解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā) 明。
[0026] 本具體實(shí)施實(shí)施例中所有玻璃器皿均用純水沖洗后置于高溫程序烘箱中， 在450°C條件下，烘烤化，W去除粘著在器壁上的有機(jī)雜質(zhì)，防止污染；除特殊說(shuō)明外， 所有試劑純度等級(jí)均為色譜純級(jí)，實(shí)驗(yàn)用水為超純水；所用試劑包括4-t-辛基酪標(biāo)準(zhǔn) 品，純度大于99%，美國(guó)Sigma-Al化ich公司；4-枯締基酪標(biāo)準(zhǔn)品，純度大于99%，美國(guó) Sigma-Al化ich公司；4-壬基酪標(biāo)準(zhǔn)品，純度大于99 %，美國(guó)Sigma-Al化ich公司；雄燒 標(biāo)準(zhǔn)品，純度大于97 %，美國(guó)Sigma-Al化ich公司；雙酪A標(biāo)準(zhǔn)品，純度大于99 %，美國(guó) Sigma-Al化ich公司；雙酪A-die回收率指示物，純度大于98%，美國(guó)Sigma-Al化ich公司； 壬基酪單氧己締離標(biāo)準(zhǔn)品，純度大于99%，德國(guó)化.E虹enstorferGmbH公司；壬基酪二氧 己締離標(biāo)準(zhǔn)品，純度大于99%，德國(guó)化.E虹enstorferGmbH公司；N，〇-雙S甲基娃基S氣 己酷胺，美國(guó)Sigma-Al化ich公司；化晚；美國(guó)化uka公司；甲醇；德國(guó)Merck公司；二氯甲 燒；美國(guó)J.T.Baker公司；己酸己醋；德國(guó)Merck公司；正己燒；德國(guó)Merck公司。
[0027] 本發(fā)明方法的具體實(shí)施步驟如下：
[00測(cè) S1、配制標(biāo)準(zhǔn)溶液
[0029] S11、配制標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液S-A(如表1):
[0030]準(zhǔn)確稱取 4-t-0P、4-CP、4-NP、BPA-die、BPA、NP2E0 和NP1E0 各 40mg，分別溶于 40血 的甲醇中，配成lOOOng/yL的酪類?ài)s標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。
[0031]S12、配制標(biāo)準(zhǔn)工作液S-B(如表1):
[003引取10UL上述標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液S-A于12血玻璃瓶中，然后加入9990uL甲醇，稀釋成 含各類目標(biāo)物濃度為Ing/yL的標(biāo)準(zhǔn)工作液S-B。
[0033]S13、配制內(nèi)標(biāo)液儲(chǔ)備液S-C(如表1);
[0034] 準(zhǔn)確稱取40mg雄燒溶于40血正己燒中，配成lOOOng/yL的內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液S-C，放入 冰箱（-45°C)冷凍待用。
[0035]S14、配制內(nèi)標(biāo)工作液S-D(如表1);
[0036] 取50uL上述標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液S-C于12血玻璃瓶中，然后加入9950uL正己燒，稀釋 成含內(nèi)標(biāo)濃度為5ng/yL的標(biāo)準(zhǔn)工作液S-D。
[0037] 表1酪類?ài)s標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液
[00%]
[0039]S2、樣品準(zhǔn)備
[0040]S21、水樣濾過(guò)及其抑值調(diào)節(jié)；環(huán)境水樣通過(guò)Millipore微孔過(guò)濾系統(tǒng)，并將其抑 值用鹽酸溶液調(diào)節(jié)至4. 5;
[004US22、S陽(yáng)小柱選取及其活化；依次用5血己酸己醋、5血甲醇和3X5血超純水活化 S巧-PakC-18固相萃取小柱；
[0042]S23、萃?。粚⑺畼油ㄟ^(guò)Visiprep?大體積進(jìn)樣器進(jìn)入S陽(yáng)系統(tǒng)，在負(fù)壓條件下W低 于5mL/min的流速過(guò)柱。水樣富集后，用lOmL甲醇-水（1 ; 9,v/v)混合液淋洗小柱，真 空干燥40min。
[0043]S24、洗脫；加入10血二氯甲燒，使二氯甲燒完全浸沒(méi)S陽(yáng)小柱填料，待浸泡 l-2min后，再W小于0. 5mL/min的洗脫速率將洗脫液收集到12mL棟色試劑瓶中。
[0044] S3、衍生化過(guò)程
[0045] 酪類?ài)s的衍生化反應(yīng)可W降低其極性，W期達(dá)到GC-MS分析的最佳條件，改善 色譜峰型、降低雜質(zhì)干擾，提高儀器檢測(cè)靈敏度等。本方法采用=甲基硅烷化衍生化法，將 酪類?ài)s的哲基進(jìn)行S甲基硅烷化處理，具體步驟如下：
[0046] S31、將洗脫液在常溫條件下用溫和氮?dú)饩徛抵良s500yL。
[0047