一種在線固相萃取高效液相色譜測定無煙氣煙草制品中多環(huán)芳烴的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明屬于無煙氣煙草制品的理化檢驗(yàn)技術(shù)領(lǐng)域，具體說是涉及無煙氣煙草制品 中多環(huán)芳經(jīng)的測定技術(shù)。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著越加嚴(yán)格的控?zé)煷胧┑膶?shí)施，無煙氣煙草制品正在成為一種重要的煙草消費(fèi) 品。但對其中含有的有害成分的研究還較少。多環(huán)芳烴在卷煙煙氣研究中被廣泛關(guān)注，并 且被國際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC)認(rèn)為是人體致癌物質(zhì)（第1類）或?yàn)榭梢傻娜梭w致癌成分 (2B類），因此有必要對無煙氣煙草制品中的多環(huán)芳烴進(jìn)行分析研究。苯并[a]芘（BaP)是 多環(huán)芳烴（PAHs)中致癌活性最強(qiáng)的成分，準(zhǔn)確測定BaP對于卷煙危害性評價(jià)有重要意義。 目前，國內(nèi)外報(bào)道的BaP分析方法有熒光分光光度法、氣相色譜法、氣相色譜/質(zhì)譜（GC/MS) 聯(lián)用法、紙色譜法和高效液相色譜法等。國內(nèi)煙草行業(yè)普遍采用夏巧玲等開發(fā)的GC/MS法 檢測卷煙主流煙氣中BaP。然而，此方法是樣品經(jīng)溶劑萃取后，還需要固相萃取小柱凈化，濃 縮，才能進(jìn)行GC/MS分析，既耗費(fèi)較多溶劑，又易造成環(huán)境污染；張峻松等建立的乙醇和乙 醚混合溶劑萃取，中性氧化鋁柱層析凈化，高效液相色譜法測定的方法也較為繁瑣。
[0003]

【發(fā)明內(nèi)容】
： 本發(fā)明的目的旨在克服現(xiàn)有技術(shù)缺陷，提供一種使用在線固相萃取高效液相色譜測定 無煙氣煙草制品中多環(huán)芳烴的方法，本發(fā)明采用在線固相萃取凈化高效液相色譜分析建立 了無煙氣煙草制品中的多環(huán)芳烴的分析方法，在提高檢測效率的同時(shí)大大降低前處理有機(jī) 試劑的使用，減少對環(huán)境的污染。
[0004] 本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的： 一種在線固相萃取高效液相色譜測定無煙氣煙草制品中多環(huán)芳烴的方法，所述多環(huán)芳 烴為以下13種：萘、1-甲基萘、2-甲基萘、芴、菲、蒽、熒蒽、苯并（a)蒽、苯并（b)熒蒽、苯并 (k)熒蒽、苯并（a)芘、二苯并（a，h)蒽、苯并（g，h，i)茈，包括以下具體測定步驟 a、 樣品的準(zhǔn)備：稱取I g無煙氣煙草制品放入100 mL錐形瓶中，然后加入10-15 mL 環(huán)己烷，超聲萃取40 min，然后靜置至室溫，取上清液用0.22 μ m聚醚砜微孔濾膜過濾至2 mL色譜瓶中，進(jìn)行在線固相萃取高效液相色譜分析； b、 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液制備：配制具有濃度梯度的含有13種多環(huán)芳烴的甲醇溶液作為混合 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，具體配制方法如下：分別準(zhǔn)確稱取IOmg的1-甲基萘和2-甲基萘至IOmL的 容量瓶中，精確至〇. lmg，分別用甲醇定容作為一級儲備液，取1-甲基萘、2-甲基萘甲醇溶 液和11個(gè)多環(huán)芳烴混合物配制成混合標(biāo)樣溶液，用甲醇稀釋，配制成13個(gè)多環(huán)芳烴組 分均為1 μ g/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，分別取適量的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，用甲醇并定容， 得到多環(huán)芳烴組分濃度分別為0.0001，0.001，0.005，0.01，0.05和0.1 μ g/mL的6 個(gè)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液；有效期為30天。標(biāo)準(zhǔn)溶液置于冰箱保存，取用時(shí)置于常溫下，達(dá)到常 溫后方可使用。
[0005] c、在線固相萃取高效液相色譜測定：在線固相萃取高效液相色譜配熒光檢測器對 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣品處理液進(jìn)行檢測，在線固相萃取高效液相色譜的在線凈化和分離條件 如下： 在線固相萃?。∣nline SPE)富集柱：Acclaim PA2 (50 mmX4.6 mm，3ym，）； 流動相：純水和乙腈，進(jìn)樣體積100 μ L ; 分離分析柱：Hypersil Green PAH(150 mmX 3 mm, 3 μπι); 流動相為純水和乙腈；在線富集柱和分析柱洗脫梯度如表1所示； 柱溫：30°C ; 檢測器：熒光檢測器，熒光激發(fā)和發(fā)射波長如表2所示。
[0006] 表1用于在線固相萃取和分離的梯度
表2各個(gè)多環(huán)芳烴化合物的熒光檢測最大激發(fā)/發(fā)射波長 CN 105136931 A IX m "ti 3/7 頁
與現(xiàn)有技術(shù)相比本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)樣品處理方法的不足，優(yōu)化了儀器檢測條件， 本發(fā)明具有如下效果： (1) 樣品前處理簡單：采用本發(fā)明測定無煙氣煙草制品中多環(huán)芳烴不需要前處理凈化， 直接上高效液相色譜在線凈化； (2) 檢測目標(biāo)物多：采用本發(fā)明可以測定無煙氣煙草制品中13種多環(huán)芳烴； (3) 本發(fā)明具有操作準(zhǔn)確、靈敏度高及重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)，且能快速、高效、環(huán)保地檢測無 煙氣煙草制品中多環(huán)芳烴的含量。
[0007] ①本發(fā)明方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢測限： 以萘、1-甲基萘、2-甲基萘、芴、菲、蒽、熒蒽、苯并（a)蒽、苯并（b)熒蒽、苯并（k)熒 蒽、苯并（a)花、二苯并（a; h)蒽和苯并（g; h; i)花為檢測指標(biāo)，配制13種多環(huán)芳經(jīng)的 工作標(biāo)準(zhǔn)溶液，經(jīng)在線固相萃取高液相色譜分析，以目標(biāo)物色譜峰面積對其相應(yīng)濃度進(jìn)行 回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線及其回歸方程、相關(guān)系數(shù)，利用最低濃度標(biāo)液信噪比為S/N=3時(shí)計(jì) 算出檢測限嫩）（表3)。由表3可知，所采用的色譜條件使13種多環(huán)芳烴色譜峰都分離 較好，并且均具有較好的相關(guān)性（於0.98)，檢出限在0. 13~2. 56 ng/g之間。
[0008] 表3無煙氣煙草制品羰基化合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限 CN 105136931 A IX m "ti 4/7 頁
注：①檢出限以3倍信噪比（S/N = 3)計(jì)算。
[0009] ②本發(fā)明方法的重復(fù)性和加標(biāo)回收率： 表4方法的回收率與重復(fù)性（/?=5)
對樣品進(jìn)行高、中、低不同濃度水平的標(biāo)準(zhǔn)溶液加標(biāo)回收率試驗(yàn)，每個(gè)樣品分別測定5 次，計(jì)算本方法各種無煙氣煙草制品中多環(huán)芳烴的平均回收率及加標(biāo)后測定值的平均相對 標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見表4。由表4可以看出，在3個(gè)加標(biāo)水平上，利用此方法檢測無煙氣煙草 制品中多環(huán)芳烴的平均回收率在83. 6°/『104. 1%之間。樣品測試結(jié)果的平均相對偏差小于 5% ;說明本法的回收率較高，重復(fù)性較好。
【附圖說明】
[0010] 圖1本發(fā)明的測定方法流程圖， 圖2在線固相萃取示意圖。
【具體實(shí)施方式】 toon] 本發(fā)明以下結(jié)合具體實(shí)施例做進(jìn)一步描述： 實(shí)例1 : 1.試劑與儀器： 標(biāo)準(zhǔn)品：11個(gè)多環(huán)芳烴的混合標(biāo)樣（I 1個(gè)多環(huán)芳烴的濃度均為2.0 mg/ ml)，溶 于二氯甲烷，包括：萘，芴，菲，蒽，熒蒽，苯并（a)蒽，苯并（b)熒蒽，苯并（k)熒 蒽，苯并（a)花，二苯并（a,