一種檢測香菇素和蘑菇醇的方法
【技術(shù)領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種檢測香菇素和蘑菇醇的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 食用菌風味物質(zhì)鑒定的研究一直是風味化學研究的重點，食用菌中風味成分可分 為揮發(fā)性化合物和非揮發(fā)性化合物，其中揮發(fā)性化合物組分種類繁多，主要包括八碳化合 物及其衍生物、萜烯類、含硫化合物以及醛類、酸類、酮類、酯類等，以八碳化合物和含硫化 合物為主，醛酸酮酯類等與它們互補，各組分間相互協(xié)調(diào)、平衡呈現(xiàn)食用菌的香味。
[0003] 香菇的風味取決于其中含有的揮發(fā)性芳香物質(zhì)，而含硫化合物通常能影響菇體 整體的芳香，是香菇中最重要的香味來源。香菇素化學名稱為1，2, 3, 5, 6-五硫雜環(huán)庚烷 (1，2, 3, 5, 6-Pentathiepane)，是一種具有強烈的香燕特征風味的含硫雜環(huán)化合物，是由前 體物質(zhì)香菇酸在谷氨酸轉(zhuǎn)肽酶的作用下產(chǎn)生二硫雜環(huán)丙烷中間體聚合而成的。1966年被發(fā) 現(xiàn)并命名為香菇素（Lenthionine)、香菇精。八碳揮發(fā)性化合物通常具有很濃烈的蘑菇風 味，蘑燕醇（Mushroom alcohol)化學名稱為1-辛稀-3-醇，是食用菌中最重要的八碳揮發(fā) 性化合物之一，幾乎存在于所有的食用菌種類中，并且含量較為豐富。因此，對香菇素和蘑 菇醇進行分析檢測，在食用菌的風味研究中有著重要意義。
[0004]
[0005] 作為香菇中揮發(fā)性風味物質(zhì)的重要成分之一，香菇素的檢測技術(shù)研究受到廣泛關(guān) 注。國內(nèi)外已有學者運用水蒸氣蒸餾法、溶劑萃取法、同時蒸餾萃取法、超臨界萃取法對香 氣成分進行萃取，并應用色譜、質(zhì)譜及吸聞技術(shù)對香菇的特征風味作了研究，鑒定了組成香 菇特征風味的化合物。但對于香菇素和蘑菇醇的定性、定量檢測，國內(nèi)外并沒有檢測標準。 鄭建仙等（鄭建仙，福建香菇風味物質(zhì)的分離與鑒定[J]，中國食用菌，1995, 14(6)，3-6。） 采用水汽蒸餾法提取香菇中的風味物質(zhì)，樣品經(jīng)水浴加熱連續(xù)抽取2. 5小時后，再經(jīng)濃縮、 氮吹，再由氣相色譜-質(zhì)譜檢測。該方法不僅前處理步驟復雜、處理時間長、且檢測的重復 性較差。張書香等（張書香，謝建春，孫寶國.固相微萃取/氣-質(zhì)聯(lián)用分析香菇揮發(fā)性 香味成分[J]，北京工商大學學報，自然科學版，2010, 28 (2)，1-5。）使用Carboxen/PDMS纖 維固相微萃取/氣-質(zhì)聯(lián)機分析了香菇的揮發(fā)性香味成分，但該方法不能對各個風味組分 進行精確的定量分析，而是采用質(zhì)量百分比來計算各個風味物質(zhì)的貢獻。
[0006] 因此，尋找一種準確度高、靈敏度高、重復性好、操作簡單、適合于工業(yè)化應用的香 菇素和蘑菇醇的檢測方法是目前急需解決的技術(shù)問題。固相微萃取法是利用微纖維表面少 量的吸附劑從樣品中分離和濃縮分析物的技術(shù)。該方法無需有機溶劑、分析樣品量少，集采 樣、萃取、濃縮、進樣于一體，主要與氣相色譜、液相色譜聯(lián)用分析鑒定香味物質(zhì)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是為了克服現(xiàn)有技術(shù)測定香菇中風味物質(zhì)的檢測方 法中，前處理方法復雜、操作繁瑣、重復性較差、靈敏度不高、準確度不高，不適合于標準化 應用等缺陷，而提供了一種檢測香菇素和蘑菇醇的方法。本發(fā)明的檢測方法前處理方法簡 單、操作簡單、重復性好、靈敏度高、準確度高，適合于工業(yè)化、標準化應用。
[0008] 本發(fā)明提供了一種檢測香菇素和/或蘑菇醇的方法，其包括以下步驟：
[0009] 步驟1 :將粉碎后的待測樣品與鄰二氯苯內(nèi)標標準溶液形成的混合物先加熱、再 進行頂空固相微萃取，得到萃取物；所述的加熱的溫度為40°C~50°C，所述的加熱的時間 為30~40分鐘；所述的頂空固相微萃取的溫度為40°C~50°C，所述的頂空固相微萃取的 時間為30~40分鐘；
[0010] 步驟2 :將步驟1得到的萃取物進行解析，得到解析后的混合物；所述的解析的溫 度為200°C~220°C，所述的解析的時間為3~8分鐘；
[0011] 步驟3 :將步驟2得到的解析后的混合物進行氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析，得到待測樣 品中香菇素或蘑菇醇的質(zhì)譜圖。
[0012] 步驟1中，所述的待測樣品包括干品和鮮品。所述的干品是指本領域中常規(guī)的經(jīng) 過脫水處理后的含有香菇素和/或蘑菇醇的樣品。所述的鮮品是指本領域中常規(guī)的新鮮的 含有香菇素和/或蘑菇醇的樣品。當所述的待測樣品為鮮品時，所述的"粉碎后的待測樣 品"優(yōu)選經(jīng)過高速研磨勻漿，均勻混合后得到。當所述的待測樣品為干品時，所述的"粉碎 后的待測樣品"優(yōu)選經(jīng)過高速研磨、均勻混合后得到；所述的"粉碎后的待測樣品"的粒徑優(yōu) 選不大于355 μ m。
[0013] 步驟1中，所述的待測樣品為本領域中常規(guī)的含有香菇素和/或蘑菇醇的樣品，例 如香菇、花菇或金錢菇。
[0014] 步驟1中，所述的鄰二氯苯內(nèi)標標準溶液的濃度優(yōu)選100 μ g/mL~500 μ g/mL。
[0015] 步驟1中，所述的待測樣品與所述的鄰二氯苯的質(zhì)量比值優(yōu)選100000~500000。
[0016] 步驟1中，所述的加熱的溫度優(yōu)選45°C~50°C。
[0017] 步驟1中，所述的加熱的時間優(yōu)選30~35分鐘。
[0018] 步驟1中，所述的加熱優(yōu)選在震蕩的條件下進行，所述的震蕩轉(zhuǎn)速優(yōu)選400轉(zhuǎn)每分 鐘~600轉(zhuǎn)每分鐘。
[0019] 步驟1中，所述的頂空固相微萃取的固相微萃取頭優(yōu)選SPME萃取頭，所述的SPME 萃取頭的組成優(yōu)選50 μ m/30 μ m二乙烯基苯/碳分子篩/聚二甲基硅氧烷（DVB/CAR/PDMS， 50 μ m/30 μ m表示SPME萃取頭的膜厚度）。
[0020] 步驟1中，所述的頂空固相微萃取的溫度優(yōu)選45°C~50°C。
[0021] 步驟1中，所述的頂空固相微萃取的時間優(yōu)選30~35分鐘。
[0022] 步驟1中，所述的頂空固相微萃取優(yōu)選在震蕩的條件下進行，所述的震蕩轉(zhuǎn)速優(yōu) 選400轉(zhuǎn)每分鐘~600轉(zhuǎn)每分鐘。
[0023] 步驟1中，所述的頂空固相微萃取優(yōu)選采用自動頂空固相微萃取裝置進行，所述 的自動頂空固相微萃取裝置型號優(yōu)選G6500-CTC，廠家優(yōu)選安捷倫。
[0024] 步驟2中，所述的解析的溫度優(yōu)選210°C~220°C。
[0025] 步驟2中，所述的解析的時間優(yōu)選3~5分鐘。
[0026] 步驟3中，所述的氣相色譜的參數(shù)條件優(yōu)選：HP-5MS，30mX0. 25mm內(nèi)徑，膜厚度 0. 25 μπι;進樣口溫度為220°C ;氣相程序升溫：起始溫度50°C，保持lmin，以3°C /min的速 率升溫至180°C，保持5min，再以KTC /min的速率升溫至280°C;不分流進樣；恒流模式，流 速為 lmL/min〇
[0027] 步驟3中，所述的串聯(lián)質(zhì)譜的參數(shù)條件優(yōu)選：EI離子源溫度230°C，傳輸線溫度 280°C，碰撞能量70eV ;溶劑延遲時間5. 5~6. 5min，全掃描模式范圍為35-550amu ;載氣為 純度> 99. 999 %的高純氦氣。
[0028] 步驟3中，所述的氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析優(yōu)選采用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀進行；所 述的氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀型號優(yōu)選Agilent 7890A-5975C，廠家優(yōu)選安捷倫。
[0029] 本發(fā)明所述的檢測香菇素和/或蘑菇醇的方法中，定性分析方法：利用標準譜庫 檢索，通過比較目標化合物和標準化合物的標準譜圖，所得匹配度都在95%以上。所述的 香菇素的定性離子為m/z 142,定量離子為m/z 124和/或78;所述的蘑菇醇的定性離子為 m/z 57,定量離子為m/z 43和/或72。
[0030] 按照所述的檢測香菇素和/或蘑菇醇的方法測得待測樣品中香菇素或蘑菇醇的 質(zhì)譜圖之后，再按照下述公式計算得到待測樣品中香菇素或蘑菇醇的含量：
[0031]
[0032] C#nDn為待測樣品中香菇素或蘑菇醇的含量，單位為微克每克（μ g/g);
[0033] Cfrx為鄰二氯苯內(nèi)標標準溶液的濃度，單位是微克每毫升（μ g/mL);
[0034] V為內(nèi)標標準溶液的體積，單位為微升（μ L);
[0035] As為待測樣品中香菇素或蘑菇醇的峰面積；
[0036] A。為鄰二氯苯內(nèi)標的峰面積；
[0037] W為待測樣品質(zhì)量，單位為克（g)。
[0038] 本發(fā)明中，所述的溶液都用色譜純的丙酮配制。
[0039] 在不違背本領域常識的基礎上，上述各優(yōu)選條件，可任意組合，即得本發(fā)明各較佳 實例。
[0040] 本發(fā)明所用試劑和原料均市售可得。
[0041 ] 本發(fā)明的積極進步效果在于：
[0042] 1、本發(fā)明運用自動頂空固相微萃取/氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（HS-SPME-GC/MS)檢測 風味物質(zhì)的含量，前處理簡單，沒有溶劑污染、減小前處理過程中的損失，在檢測實際樣品 的風味物質(zhì)含量中具有明顯的優(yōu)勢。
[0043] 2、由于高純度香菇素標準品難以獲得，本方法利用內(nèi)標定量，可以克服由此帶來 的難以精確定量的問題。
[0044] 3、本發(fā)明方法可有效分析香菇風味中的揮發(fā)性成分及組成，且在處理過程中具有 操作簡單，縮短采樣時間，無需溶劑，減少有效成份損失，有效避免雜質(zhì)干擾、測試的準確性 高、重復性好、靈敏度高，香菇素和蘑菇醇的檢出限達到了 0.0 l μ g/g，為香菇質(zhì)量評價、風 味改良、蘑菇風味料開發(fā)提供技術(shù)參數(shù)和指導。
【附圖說明】
[0045] 圖1表示GC-MS全掃描模式檢測實施例1制得的香菇素和蘑菇醇總離子流圖。
[0046] 圖2表示實施例1制得的蘑菇