山茱萸藥材及其提取物與制劑的質(zhì)量控制方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種中藥材及其制劑的質(zhì)量控制方法，具體涉及山茱萸藥材及其提取 物與制劑的質(zhì)量控制方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 山茱萸為山茱萸科植物山茱萸Cornus officinalis Sieb. et Zucc.的干燥成熟 果肉，在中醫(yī)臨床應(yīng)用廣泛，具有補(bǔ)益肝腎，收澀固脫之功，常用于眩暈耳鳴、腰膝酸痛、陽 痿遺精、遺尿尿頻、崩漏帶下、大汗虛脫、內(nèi)熱消渴等癥?，F(xiàn)代研究顯示，山茱萸所含化學(xué)成 分較為復(fù)雜，主要含有環(huán)烯醚萜苷類、三萜酸類、黃酮類、有機(jī)酸及其酯類、多糖類等。其中， 環(huán)烯醚萜苷類化學(xué)成分具有降低血糖、增強(qiáng)免疫、利尿、降壓、抗炎、神經(jīng)保護(hù)等生物活性， 三萜酸類化學(xué)成分具有增強(qiáng)免疫、保肝、降血糖、抗腫瘤等生物活性，二者均為山茱萸藥材 發(fā)揮傳統(tǒng)功效的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。目前文獻(xiàn)報(bào)道有關(guān)山茱萸藥材的質(zhì)量控制方法多以環(huán)烯醚 萜苷類或有機(jī)酸類化學(xué)成分作為主要評(píng)價(jià)指標(biāo)，而《中國藥典》2010年版僅收載以馬錢苷單 一成分作為山茱萸藥材的含量測定指標(biāo)，難以全面、客觀地用于評(píng)價(jià)山茱萸藥材及其提取 物與制劑的品質(zhì)。目前尚未見同時(shí)以環(huán)烯醚萜苷類和三萜酸類活性成分為質(zhì)控指標(biāo)的多指 標(biāo)測定方法用于全面有效控制山茱萸藥材質(zhì)量的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 發(fā)明目的：本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，分別采用HPLC-UV、 HPLC-ELSD方法建立用于測定山茱萸藥材中莫諾苷、馬錢苷、當(dāng)藥苷三種環(huán)烯醚萜苷類和齊 墩果酸、熊果酸兩種三萜酸類化學(xué)成分含量的質(zhì)量控制方法，以期通過同時(shí)控制兩類活性 成分的含量達(dá)到對(duì)山茱萸藥材及其提取物與制劑質(zhì)量的有效控制，以實(shí)現(xiàn)山茱萸系列產(chǎn)品 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提升，為客觀評(píng)價(jià)山茱萸系列產(chǎn)品品質(zhì)提供技術(shù)支撐，對(duì)控制山茱萸相關(guān)產(chǎn)品 質(zhì)量和保證療效具有重要意義。
[0004] 技術(shù)方案：為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：
[0005] -種山茱萸藥材及其提取物與制劑的質(zhì)量控制方法，包括以下步驟：
[0006] (1)采用HPLC-UV法測定山茱萸藥材及其提取物與制劑中莫諾苷、馬錢苷、當(dāng)藥苷 3種環(huán)烯醚萜苷類化學(xué)成分的含量；
[0007] (2)采用HPLC-ELSD法測定山茱萸藥材及其提取物與制劑中烏蘇酸、齊墩果酸2種 三萜酸類化學(xué)成分的含量；
[0008] (3)分別以步驟⑴所測得環(huán)烯醚萜類成分總量、步驟⑵所測得三萜酸類成分總 量，或者步驟（1)及步驟（2)所測定得環(huán)烯醚萜類和三萜酸類成分總量作為評(píng)價(jià)指標(biāo)用于 制定評(píng)價(jià)山茱萸藥材及其提取物與制劑品質(zhì)及進(jìn)行質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)。
[0009] 作為優(yōu)選方案，以上所述的山茱萸藥材及其提取物與制劑的質(zhì)量控制方法，步驟 (1)所述的HPLC-UV測定的步驟為：
[0010] (1)供試品溶液的制備
[0011] 取山茱萸藥材或其提取物或制劑適量，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入體 積濃度為40 %~80%甲醇，密塞，稱定重量，提取60~120min，再稱定重量，加體積濃度 40 %~80%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，經(jīng)0. 45 μ m的微孔濾膜濾過后，取續(xù)濾液，即得供 試品溶液；
[0012] ⑵對(duì)照品洛液的制備
[0013] 取莫諾苷、馬錢苷、當(dāng)藥苷對(duì)照品各適量，加體積濃度40%~80%甲醇制成分別 含莫諾苷50 μ g · mL \馬錢苷50 μ g · mL \當(dāng)藥苷20 μ g · mL 1的混合對(duì)照品溶液；
[0014] (3)樣品中環(huán)烯醚萜苷類活性組分的測定
[0015] 取步驟（1)制備得到的供試品溶液、步驟（2)制備得到的混合對(duì)照品溶液分別注 入高效液相色譜儀進(jìn)行測定，獲得色譜圖，按外標(biāo)一點(diǎn)法分別計(jì)算莫諾苷、馬錢苷、當(dāng)藥苷 的質(zhì)量濃度；
[0016] 以上所述的高效液相色譜測定的條件為：
[0017] 色譜柱：反相C18色譜柱；
[0018] 流動(dòng)相：以乙腈為A相，體積濃度0. 1 %甲酸水溶液為B相，梯度洗脫；
[0019] 流速：0· 8mL/min ~1mT,/mi η ；
[0020] 檢測波長：235 ~Μδηιιι。
[0021] 作為優(yōu)選方案，以上所述的山茱萸藥材及其提取物與制劑的質(zhì)量控制方法，步驟 (2) 所述的HPLC-ELSD測定的步驟為：
[0022] (1)供試品溶液的制備
[0023] 取山茱萸藥材或其提取物或制劑適量，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入體 積濃度為60 %~100 %甲醇或乙醇，密塞，稱定重量，提取60~120min，再稱定重量，加體積 濃度為60 %~100%甲醇或乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，經(jīng)0. 45 μ m的微孔濾膜濾過后，取 續(xù)濾液，即得。
[0024] (2)對(duì)照品洛液的制備
[0025] 取齊墩果酸、烏蘇酸對(duì)照品適量，加甲醇制成分別含齊墩果酸100 μ g · mL \烏蘇 酸200 μ g · mL 1的混合對(duì)照品溶液，即得；
[0026] (3)樣品中三萜酸類活性組分的測定
[0027] 取步驟⑴制備得到的樣品溶液、步驟（2)制備得到的混合對(duì)照品溶液分別注入 高效液相色譜儀進(jìn)行測定，獲得色譜圖，按外標(biāo)對(duì)數(shù)方程兩點(diǎn)法分別計(jì)算齊墩果酸、烏蘇酸 的質(zhì)量濃度；
[0028] 以上所述的高效液相色譜測定的條件為：
[0029] 色譜柱：反相C18色譜柱；
[0030] 流動(dòng)相：體積比為17 :83的0. 5 %乙酸胺水溶液和甲醇；
[0031] 流速：0· 6 ~0· 8mL/min ；
[0032] ELSD檢測霧化器溫度：80~100°C，載氣流量：2. 7~3. OL/min。
[0033] 作為優(yōu)選方案，以上所述的山茱萸藥材及其提取物與制劑的質(zhì)量控制方法，步驟 (3) 所述的環(huán)烯醚萜類成分總量、三萜酸類成分總量、環(huán)烯醚萜類和三萜酸類成分總量可為 算術(shù)總量，也可為加權(quán)后計(jì)算的總量。
[0034] 作為優(yōu)選方案，以上所述的山茱萸藥材及其提取物與制劑的質(zhì)量控制方法，步驟 (3)所述的用于制定評(píng)價(jià)樣品品質(zhì)及進(jìn)行質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)可為5個(gè)成分（3個(gè)環(huán)烯醚萜類 和2三萜酸類成分）的總量，也可為3個(gè)環(huán)烯醚萜類成分總量或2個(gè)三萜酸類成分總量共 三個(gè)指標(biāo)共同作為評(píng)價(jià)指標(biāo)。
[0035] 作為更優(yōu)選方案，以上所述的山茱萸藥材及其提取物與制劑的質(zhì)量控制方法， 其特征在于，所述的環(huán)烯醚萜苷類活性組分測定流動(dòng)相梯度洗脫程序?yàn)椋憨杶20min， 10% -17%乙腈，(λ 1 %甲酸水溶液90% -83%。
[0036] 作為優(yōu)選方案，以上所述的山茱萸藥材及其提取物與制劑的質(zhì)量控制方法，步驟 (1)、步驟（2)所述的山茱萸提取物為山茱萸藥材的水提取物或者乙醇提取物。
[0037] 本發(fā)明選取與山茱萸具有的補(bǔ)益肝腎、收澀固脫等傳統(tǒng)功效密切相關(guān)，且含量相 對(duì)較高、具有代表性的莫諾苷、馬錢苷、當(dāng)藥苷和齊墩果酸、熊果酸共5種活性成分作為測 定指標(biāo)，可有效控制山茱萸藥材的質(zhì)量。
[0038] 本發(fā)明所測定的莫諾苷、馬錢苷、當(dāng)藥苷3種環(huán)烯醚萜類化學(xué)成分，其λ _分別為 240、238、246nm，為便于分析及方法的推廣，故以235~245nm作為測定波長，并優(yōu)選240nm 作為測定波長。本發(fā)明通過不能流速的篩選，確定最佳的流速為lmL/min。
[0039] 本發(fā)明所測定的齊墩果酸和熊果酸2種三萜酸類活性成分因其紫外吸收為末端 吸收，采用UV檢測器時(shí)，基線干擾較大，故選用蒸發(fā)光散射檢測器，以降低干擾。此外，齊墩 果酸與熊果酸為同分異構(gòu)體，其物化性質(zhì)較為相似，在色譜分離過程中存在一定的難度。本 發(fā)明通過大量實(shí)驗(yàn)篩選了不同流動(dòng)相系統(tǒng)及色譜柱對(duì)其分離效果的影響。最終優(yōu)選以甲 醇-0. 5%乙酸銨水溶液作為流動(dòng)相系統(tǒng)具有很好的分離效果，且低流速、低柱溫有利于目 標(biāo)化合物的有效分離。在該系統(tǒng)下本發(fā)明又通過大量實(shí)驗(yàn)篩選不同的色譜柱，篩選試驗(yàn)結(jié) 果表明，以Hypersil (：18色譜柱具有最佳的分離效果。
[0040] 有益效果：本發(fā)明提供的山茱萸藥材及其提取物與制劑的質(zhì)量控制方法和現(xiàn)有技 術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)：