y1/cm噴在2cm寬玻璃纖維素膜金標墊上，37°C烘干18~24小時，即得制成金標墊。
[0217] 2. 1. 2NC膜包被過程為：以0? 01MpH7. 4磷酸鹽緩沖液將As全抗原配制成0? 1、 0? 5、1. 0、1. 5、2. 0、2. 5、3.Omg/mL的溶液，將抗鼠IgG配制成 0? 1、0. 5、1. 0、1. 5、2. 0、2. 5、 3.Omg/mL的溶液，用劃膜儀以1y1/cm速度分別進行劃線包被C、T線，放置在37度烘箱干 燥12小時。
[0218] 2. 1. 3試劑盒的裝配：試劑盒裝配在溫度為20~30°C，濕度為〈40%的室內(nèi)進行， 取塑料底板，將已包被的NC膜放置在塑料地板中部粘貼，將金標墊搭在NC膜T線一側(cè)，金 標墊搭在NC膜上1mm粘貼，金標墊另一側(cè)搭接粘貼上樣品墊，樣品墊與試紙下邊緣對齊。在 NC膜一側(cè)搭接吸樣紙，搭在NC膜上1mm粘貼。最后使用切條機將貼好的塑料板切成5mm寬 試紙條，再裝入塑料卡內(nèi)，形成試劑盒。
[0219] 2. 1.4試紙條工藝參數(shù)調(diào)試：將濃度不同標記、包被的試劑進行組合配對，制備成 小樣，使用As標準樣品對試劑進行測試，尋找出最佳組合。
[0220] 2. 2提取劑：為10%的稀硝酸溶液。
[0221] 2. 3稀釋液：分別使用0. 01M、0. 02M、0. 04MPBS溶液，加入終濃度分別為0. 5%、 1 %、1. 5、2% 的tween-20,加入終濃度為1X10 9、1X10S、1X10 7、1X10 6、1X10 5、 1X10 4、2X10 3g/mL的絡(luò)合劑ITCBE配置成稀釋液。
[0222] 2. 4標準曲線制備、換算和錄入：確定好試紙工藝參數(shù)后，分別用濃度為0、50、 100、200、400、600、800、1000yg/kg的As標準樣品對試劑盒進行測定，不同濃度的標準樣 品顯示出不同的強度T線，使用膠體金讀數(shù)儀測定其強度。將標準添加樣品濃度除以As的 回收率55. 6%作為測定樣品中As濃度值；使用做特殊軟件制作標準曲線，并將相應(yīng)參數(shù)導(dǎo) 入讀數(shù)儀中，完成儀器曲線參數(shù)設(shè)置。
[0223] 2. 5檢測方法
[0224] 1)使用粉碎機粉碎所需檢測樣品，并過20目篩網(wǎng)；
[0225] 2)使用小型天平準確稱量lg檢測待檢樣品到提取瓶中，加入4mL提取劑，室溫下 在震蕩頻率為2~60cpm條件下反應(yīng)lOmin;
[0226] 3)使用離心機或過濾裝置過濾取清液，用移液器器準確移取40y1清液至160y1 稀釋液中混合均勻；
[0227] 4)取出試劑盒將試劑盒和上述混合液放入干式恒溫儀中5min，穩(wěn)定設(shè)定為37°C;
[0228] 5)用移液器取120y1上述混合液加入試劑盒加樣孔中，繼續(xù)在37°C恒溫環(huán)境下 反應(yīng)20min;
[0229] 6)將反應(yīng)完的試劑盒放入手持式膠體金讀數(shù)儀中即可顯示出樣品中As的濃度。
[0230] 2. 6對在市場上或檢測機構(gòu)獲得6份樣品使用重金屬砷快速定量檢測試劑盒進行 檢測并與原子吸收光譜法結(jié)果檢測對比分析其準確性；配制濃度分別為200ppb、400ppb、 800ppb標準樣品溶液使用重金屬砷快速定量檢測試劑盒并分析檢測，每個濃度檢測6次分 析其精密度。
[0231] 3、結(jié)果
[0232] 3. 1傳統(tǒng)的方法膠體金標記pH值為8.5;最適標記量為1. 0mg/100mL;復(fù)溶液為 20mMPBS含有1%BSA、5%蔗糖、0? 1%tween-20 ;改性膠體金最適標記量為1. 0mg/100mL; 最佳As全抗原包被量1. 0mg/mL;稀釋液最佳條件為0. 2MPBS，終濃度為1. 5%tween-20， 1X10 5g/mLITCBE;以上工藝不同批次可能需要適當調(diào)整工藝。
[0233] 3. 2準確度檢測結(jié)果
[0234]
[0235]對本組數(shù)據(jù)做配對樣本T檢驗法，t=0?255,t雙尾臨界(。.。5,5；) = 2. 571，t〈t雙尾臨wa(K, 5)，說明重金屬砷快速定量檢測試劑盒檢測結(jié)果與原子吸收光譜法檢測結(jié)果無顯著結(jié)果差 異。
[0236] 3. 3精密度檢測結(jié)果
[0237]
[0238] 由結(jié)果及分析可知，重金屬砷快速定量檢測試劑盒重復(fù)檢測結(jié)果變異系數(shù)為 13. 8~14. 4之間，平均變異系數(shù)小于15%
[0239] 檢測結(jié)果表明本發(fā)明重金屬砷的檢測試劑盒以及檢測系統(tǒng)性能良好，可以快速、 準確的檢測待檢樣品中砷含量，適用于實驗室和取樣現(xiàn)場的快速定量檢測，滿足客戶對食 品中重金屬砷快速定量檢測要求。
[0240] 實施例7重金屬鉻快速定量檢測試劑盒制備
[0241] 1、主要材料
[0242] 1. 1鉻（Cr)標準樣品：國家有色金屬及電子材料分析測試中心產(chǎn)品；Cr特異性單 克隆抗體、Cr全抗原，羊抗鼠IgG:成都安普諾生物科技有限公司產(chǎn)品；氯金酸：Sigma公司 產(chǎn)品；硝酸纖維素膜：MILLIP0RE(美國），M135 ;牛血清白蛋白（BSA)、聚乙二醇2000:Sigma 產(chǎn)品；玻璃纖維素膜、吸水墊、底板：上海杰一生物產(chǎn)品；其它常用試劑均為分析純試劑。
[0243] 1. 2含有重金屬Cr糧食樣品在市場上或檢測機構(gòu)獲得，共5份，使用國標GB/ T5009. 123-2003的第一法測定其含量，其中Cr含量分布區(qū)間為0~200yg/kg3份Cr含 量分布區(qū)間為200~400yg/kg1份、Cr含量分布區(qū)間為400~1000yg/kg1份。
[0244] 1. 3干式恒溫儀購干式恒溫儀，購自杭州瑞誠儀器有限公司；手持式膠體金讀數(shù) 儀，購自深圳拓能達科技有限公司。
[0245] 2、方法
[0246] 2. 1試劑盒的制備
[0247] 2. 1. 1Cr單克隆抗體膠體金標記
[0248] 以氯金酸一檸檬酸三鈉還原法制備直徑為40nm的膠體金溶液，制備完成的膠體 金100份加入〇? 5份濃度為1 %的二（三乙醇胺）鈦酸二異丙酯（TMC-TE)溶液，在200r/ min下混合攪拌2h。用氨水調(diào)節(jié)溶液pH值至8. 5,加入0. 5份鈦酸正丁酯，在室溫下繼續(xù)反 應(yīng)24小時，在12000r/min條件下離心15min，吸出上清液加入超純水或緩沖液清洗，重復(fù)1 次，即制備得表面含有活性-0H的鈦酸酯改性的膠體金顆粒。取上述表面含有活性-0H的 鈦酸酯改性的膠體金3份，按每100mL加入0. 2、0. 5、1. 0、1. 5、2mgCr單克隆抗體，反應(yīng)2h。 在12000r/min條件下離心15min，去上清液，用復(fù)溶液定溶至膠體金溶液體積的1/20。按 4yL/cm噴在2cm寬玻璃纖維素膜金標墊上，37°C烘干18~24小時，即得制成金標墊。
[0249] 2. 1. 2NC膜包被過程為：以0. 01MpH7. 4磷酸鹽緩沖液將Cr全抗原配制成0. 1、 0? 5、1. 0、1. 5、2. 0、2. 5、3.Omg/mL的溶液，將抗鼠IgG配制成 0? 1、0. 5、1. 0、1. 5、2. 0、2. 5、 3.Omg/mL的溶液，用劃膜儀以1yL/cm速度分別進行劃線包被C、T線，放置在37度烘箱干 燥12小時。
[0250] 2. 1. 3試劑盒的裝配：試劑盒裝配在溫度為20~30°C，濕度為〈40%的室內(nèi)進行， 取塑料底板，將已包被的NC膜放置在塑料地板中部粘貼，將金標墊搭在NC膜T線一側(cè)，金 標墊搭在NC膜上1mm粘貼，金標墊另一側(cè)搭接粘貼上樣品墊，樣品墊與試紙下邊緣對齊。在 NC膜一側(cè)搭接吸樣紙，搭在NC膜上1mm粘貼。最后使用切條機將貼好的塑料板切成5mm寬 試紙條，再裝入塑料卡內(nèi)，形成試劑盒。
[0251] 2. 1.4試紙條工藝參數(shù)調(diào)試：將濃度不同標記、包被的試劑進行組合配對，制備成 小樣，使用Cr標準樣品對試劑進行測試，尋找出最佳組合。
[0252] 2. 2提取劑：為10%的稀硝酸溶液。
[0253]2. 3分別使用0. 01M、0. 02M、0. 04MPBS溶液，加入終濃度分別為0. 5 %、1 %、 1. 5、2 % 的tween-20,加入終濃度為 1X10 9、1X10 8、1X10 7、1X10 6、1X10 5、1X10 4、 2X10 3g/mL的絡(luò)合劑ITCBE配置成稀釋液。
[0254] 2. 4標準曲線制備、換算和錄入：確定好試紙工藝參數(shù)后，分別用濃度為0、50、 100、200、400、600、800、1000yg/kg的Cr標準樣品對試劑盒進行測定，不同濃度的標準樣 品顯示出不同的強度T線，使用膠體金讀數(shù)儀測定其強度。將標準添加樣品濃度除以Cr的 回收率69%作為測定樣品中Cr濃度值；使用做特殊軟件制作標準曲線，并將相應(yīng)參數(shù)導(dǎo)入 讀數(shù)儀中，完成儀器曲線參數(shù)設(shè)置。
[0255] 2. 5檢測方法
[0256] 1)使用粉碎機粉碎所需檢測樣品，并過20目篩網(wǎng)；
[0257] 2)使用小型天平準確稱量lg檢測待檢樣品到提取瓶中，加入4mL提取劑，室溫下 在震蕩頻率為2~60cpm條件下反應(yīng)5min;
[0258] 3)使用離心機或過濾裝置過濾取清液，用移液器器準確移取40y1清液至160y1 稀釋液中混合均勻；
[0259] 4)取出試劑盒將試劑盒和上述混合液放入干式恒溫儀中5min，穩(wěn)定設(shè)定為37°C;
[0260] 5)用移液器取120y1上述混合液加入試劑盒加樣孔中，繼續(xù)在37°C恒溫環(huán)境下 反應(yīng)20min;
[0261] 6)將反應(yīng)完的試劑盒放入手持式膠體金讀數(shù)儀中即可顯示出樣品中Cr的濃度。
[0262] 2. 6對在市場上或檢測機構(gòu)獲得6份樣品使用重金屬鉻快速定量檢測試劑盒進行 檢測并與原子吸收光譜法結(jié)果檢測對比分析其準確性；配制濃度分別為200ppb、400ppb、 800ppb標準樣品溶液使用重金屬鉻快速定量檢測試劑盒并分析檢測，每個濃度檢測6次分 析其精密度。
[0263] 3、結(jié)果
[0264] 3. 1傳統(tǒng)的方法膠體金標記pH值為8.5;最適標記量為1. 0mg/100mL;復(fù)溶液為 20mMPBS含有1%BSA、5%蔗糖、0? 1%tween-20 ;改性膠體金最適標記量為1. 0mg/100mL; 最佳Cr全抗原包被量0. 5mg/mL;稀釋液最佳條件為0. 2MPBS，終濃度為1 %tween-20， 1X10 6g/mLITCBE;以上工藝不同批次可能需要適當調(diào)整工藝。
[0265] 3. 2準確度檢測結(jié)果
[0266]
[0267]對本組數(shù)據(jù)做配對樣本T檢驗法，t= 0. 649,t雙尾臨wQ.Q5,4) = 2. 776,t〈t雙尾臨wa(K, 4)，說明重金屬鉻快速定量檢測試劑盒檢測結(jié)果與原子吸收光譜法檢測結(jié)果無顯著結(jié)果差 異。
[0268] 3. 3精密度檢測結(jié)果
[0269]
[0270]由結(jié)果及分析可知，重金屬鉻快速定量檢測試劑盒重復(fù)檢測結(jié)果變異系數(shù)為 10. 9~14. 1之間，平均變異系數(shù)小于15%
[0271] 檢測結(jié)果表明本發(fā)明重金屬鉻的檢測試劑盒以及檢測系統(tǒng)性能良好，可以快速、 準確的檢測待檢樣品中鉻含量，適用于實驗室和取樣現(xiàn)場的快速定量檢測