化妝品中杜鵑醇的檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及化妝品檢測(cè)領(lǐng)域，具體設(shè)及化妝品中杜酷醇的檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[000引杜酷醇，化學(xué)名為4-(4-哲苯基）-2- 了醇，其分子式是?；?02,分子量為166. 2， 純品為白色粉末，易溶于水，溶于甲醇、己醇和己膳等有機(jī)溶劑?，F(xiàn)代美白化妝品中有效成 分大多來(lái)自天然植物提取物，如熊果巧、中草藥提取物和杜酷醇等，其中杜酷醇廣泛分布于 白枠和日光械，具有有效抑制黑色素形成的作用。然而，正是由于杜酷醇具有抑制黑色素合 成的作用，從而干擾了皮膚中酪氨酸向黑色素的正常酶轉(zhuǎn)化過(guò)程，添加了杜酷醇的美白化 妝品會(huì)造成皮膚美白過(guò)度而出現(xiàn)白斑等過(guò)敏癥狀。
[0003] 因此有必要建立快速有效檢測(cè)杜酷醇的方法，W鑒別各類(lèi)美白化妝品是否含有杜 酷醇。目前國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)中對(duì)杜酷醇的報(bào)道主要集中于其在生物體內(nèi)賦存狀況和其生物合成 方法等方面，具體設(shè)及到杜酷醇的檢測(cè)技術(shù)W及化妝品中杜酷醇的檢測(cè)技術(shù)還很少，幾乎 處于空白狀態(tài)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供化妝品中杜酷醇的檢測(cè)方法，W便能夠快速簡(jiǎn)便，定性定 量的準(zhǔn)確檢測(cè)出化妝品中的杜酷醇含量。
[0005] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下：
[0006] 一種化妝品中杜酷醇的檢測(cè)方法，采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（HPLC-MS/M巧法 測(cè)定，包括如下步驟：
[0007] (1)樣品的前處理：將待測(cè)樣本利用己醇溶解，混勻，然后超聲提取，利用濾膜過(guò) 膜后得到樣品提取液；
[000引 （2)標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定：配置杜酷醇標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，利用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法上 機(jī)測(cè)定，根據(jù)測(cè)定結(jié)果得到標(biāo)準(zhǔn)溶液含量-結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0009] (3)上機(jī)檢測(cè)：采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)上述樣品提取液上機(jī)檢測(cè)，色譜 條件為；粒徑為1. 9微米的C18色譜柱，流動(dòng)相為甲醇-氨水溶液，梯度洗脫的方式；質(zhì)譜條 件為；大氣壓化學(xué)離子源負(fù)離子檢測(cè)模式，放電針電流為4.0uA，母離子分子量為165,子 離子分子量（碰撞能量）為93(256￥)、106(206￥)、119(216￥)、121(186￥)，其中106為定量 離子。
[0010] 優(yōu)選的，所述梯度洗脫程序?yàn)椋?-lmin采用體積比為30:70的甲醇-氨水， 1. 15-3. 5min采用體積比為45:55的甲醇-氨水，第一斜坡時(shí)間為0. 15min，3. 7-4. 5min采 用體積比為30:70的甲醇-氨水，第二斜坡時(shí)間為0. 2min。
[0011] 優(yōu)選的，步驟（1)中，所述超聲提取后，離屯、分離，將上清液經(jīng)濾膜過(guò)膜后得到樣 品提取濃。
[0012] 優(yōu)選的，所述離屯、速度為8000轉(zhuǎn)/分，離屯、時(shí)間為10分鐘。
[0013] 優(yōu)選的，步驟（1)中，所述超聲提取后，取樣用體積比為30:70的甲醇-氨水溶液 定容至10倍體積，然后經(jīng)濾膜過(guò)膜后得到樣品提取液。
[0014] 優(yōu)選的，所述氨水的體積百分比濃度為0. 05%。
[0015] 優(yōu)選的，所述濾膜為0. 22微米水相濾膜。
[0016] 優(yōu)選的，所述杜酷醇標(biāo)準(zhǔn)溶液系列中包括空白樣。
[0017] 優(yōu)選的，所述高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法中，高效液相色譜的進(jìn)樣量為10微升。
[001引本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：
[0019] (1)利用HPLC-MS/MS測(cè)定化妝品中的杜酷醇，樣品前處理步驟快速簡(jiǎn)單，而且樣 品上機(jī)洗脫檢測(cè)時(shí)間也短，可W在5min實(shí)現(xiàn)對(duì)杜酷醇的定量定性分析。
[0020] (2)采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的方法，與僅采用高效液相色譜相比，其檢測(cè)結(jié)果 更加精確，因?yàn)橐合鄨D譜可能會(huì)存在其他物質(zhì)的干擾，僅根據(jù)液相圖譜并不能完全確認(rèn)測(cè) 定結(jié)果就是樣品中的杜酷醇，導(dǎo)致結(jié)果在定性方面受到質(zhì)疑，而W質(zhì)譜的的檢測(cè)結(jié)果加W 輔助則可W毫無(wú)疑問(wèn)定性為杜酷醇。
[0021] (3)利用該方法檢測(cè)的靈敏度高，樣品的檢測(cè)限可低至0.Img/kg，測(cè)試結(jié)果 的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性均十分高，加標(biāo)回收率達(dá)到80. 6 % -110%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差巧SD)為 3. 08% -10. 5%，回收率和精密度良好。
[0022] 本發(fā)明還提供了一種化妝品中杜酷醇的快速檢測(cè)方法，采用超高效液相色譜 扣HX)法測(cè)定，包括如下步驟：
[002引 （1)樣品前處理；將待測(cè)樣品利用己醇溶解，混勻，然后超聲提取，利用濾膜過(guò)膜 后得到樣品提取液；
[0024] 似標(biāo)準(zhǔn)溶液配置；配置杜酷醇標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，利用超高效液相色譜法上機(jī)測(cè)定， 根據(jù)測(cè)定結(jié)果得到標(biāo)準(zhǔn)溶液含量-結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0025] (3)上機(jī)檢測(cè)：W己膳與水溶液為流動(dòng)相，二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)，采用超高效液 相色譜法對(duì)上述樣品提取液上機(jī)檢測(cè)，所述超高效液相色譜法的色譜條件為；色譜柱為粒 徑為1. 7微米的C18色譜柱，檢測(cè)波長(zhǎng)為280納米，流動(dòng)相為體積比為75:25的水-己膳溶 液，洗脫采用等度洗脫，進(jìn)樣量為1微升。
[0026] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于，利用UPLC檢測(cè)化妝品中的杜酷醇，實(shí)現(xiàn)了 樣品的快速檢測(cè)。首先，樣品前處理過(guò)程快速簡(jiǎn)便，而且與高效液相色譜（冊(cè)LC)相比，UPLC 的色譜柱粒徑更小，樣品分離速度更快，因此樣品的檢測(cè)速度很快，利用該法檢測(cè)杜酷醇， 每個(gè)樣品的上機(jī)時(shí)間僅為2. 5min。同時(shí)，杜酷醇的測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性也十分高， 加標(biāo)回收率達(dá)到92. 9% -97. 1%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差巧SD)僅為0. 4% -1. 5%，回收率和精密度 良好。該方法測(cè)定杜酷醇的樣品檢出限為200mg/kg，而美白化妝品中杜酷醇含量需要達(dá)到 1.8% (18000mg/kg)W上才會(huì)起到美白作用，因此本方案完全能夠滿足化妝品中杜酷醇的 檢測(cè)要求。
【附圖說(shuō)明】
[0027] 圖1是本發(fā)明利用【具體實(shí)施方式】中所述高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定杜酷醇的 色譜圖；
[002引圖2是本發(fā)明利用【具體實(shí)施方式】中所述高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定杜酷醇的 質(zhì)譜圖；
[0029] 圖3是杜酷醇分子的質(zhì)譜碎裂方式示意圖；
[0030] 圖4是本發(fā)明利用【具體實(shí)施方式】中所述超高效液相色譜法測(cè)定杜酷醇標(biāo)準(zhǔn)溶液 的吸收光譜圖；
[0031] 圖5是本發(fā)明利用【具體實(shí)施方式】中所述超高效液相色譜法測(cè)定空白化妝品的色 譜圖；
[0032] 圖6是本發(fā)明利用【具體實(shí)施方式】中所述超高效液相色譜法測(cè)定空白化妝品添加 杜酷醇標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0033]W下結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明提出的化妝品中杜酷醇的檢測(cè)方法作進(jìn)一 步詳細(xì)說(shuō)明。根據(jù)下面說(shuō)明和權(quán)利要求書(shū)，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特征將更清楚。需說(shuō)明的是，附 圖均采用非常簡(jiǎn)化的形式，僅用W方便、明晰地輔助說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例的目的。
[0034] 實(shí)施例1 ;高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法她LC-MS/M巧測(cè)定化妝品中杜酷醇的條件選 擇
[0035] 1. 1樣品前處理；采用己醇做溶劑，溶解杜酷醇。與甲醇等溶劑相比，己醇無(wú)毒性， 更為安全。
[0036] 1. 2流動(dòng)相及洗脫條件：
[0037] 采用甲醇-氨水作為流動(dòng)化梯度洗脫的方式。與己膳-水、甲醇-水、己膳-氨 水等流動(dòng)體系相比，采用甲醇-氨水流動(dòng)相，可W在短時(shí)間內(nèi)巧min)實(shí)現(xiàn)對(duì)杜酷醇的分離 檢測(cè)，而且靈敏度最好。
[003引1.3質(zhì)譜條件的選擇：
[0039] 在APCI負(fù)離子監(jiān)測(cè)模式下，杜酷醇主要生成[M-田-準(zhǔn)分子離子，離子的質(zhì)荷比 (m/z)為165,其保留時(shí)間為2. 21min，如圖1所示，選擇性對(duì)[M-田-進(jìn)行產(chǎn)物離子掃描分 析，結(jié)果如圖2所示，其母離子和碎片離子W及質(zhì)譜條件見(jiàn)表1，杜酷醇生成的主要碎片離 子m/z是106,將其作為定量離子，杜酷醇的碎片離子的碎裂規(guī)律如圖3所示，碎片離子93 是由分子離子165丟失CH2CH2CHOCH3,碎片離子106是由分子離子165丟失CH2CHOHCH3形成 的，碎片離子119,121是由分子離子165丟失CHOHCH3形成的。
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