用于葡萄酒農(nóng)殘分析的快速前處理方法及檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及用于葡萄酒農(nóng)殘分析的快速前處理方法以及使用該前處理方法進行 的檢測方法。具體而言，本發(fā)明通過對葡萄酒樣品進行快速前處理，從而采用氣相色譜-質(zhì) 譜分析法對葡萄酒中多種農(nóng)藥的殘留量同時進行檢測。
【背景技術(shù)】
[0002] 殺菌劑是對病原微生物有殺死作用或抑制生長作用的藥劑，應(yīng)用范圍廣。釀酒葡 萄易感染真菌性疾病，因此在種植過程中需多次噴撒殺菌劑，包括硫制劑、銅制劑、胺類、芳 香族類、苯并咪唑類、二酰亞胺類三唑類等。殺蟲劑和除草劑也是防止有害生物保護植株的 重要農(nóng)藥，常用的包括有機磷類、有機氯類、擬除蟲菊酯類、氨基甲酸酯類和二苯醚類等。殘 留的農(nóng)藥不僅抑制酒精發(fā)酵，也使葡萄酒產(chǎn)品對人體健康構(gòu)成潛在威脅。
[0003]葡萄酒是新鮮葡萄或葡萄汁經(jīng)過發(fā)酵獲得的飲料，含有大量的多酚、糖、色素、維 生素和礦物質(zhì)，基質(zhì)復雜，對痕量的農(nóng)藥殘留檢測存在嚴重干擾。需對葡萄酒樣品進行適當 的前處理后，再采用氣相色譜-質(zhì)譜法同時定性定量分析多種農(nóng)藥殘留。目前，國內(nèi)外研究 葡萄酒中農(nóng)藥殘留的前處理方法主要有液液萃取、振蕩提取、固相萃取、固相微萃取、凝膠 滲透色譜等方法，這些方法操作具有諸多缺點，如步驟較多，耗時較長，操作人員需與大量 的有機溶劑接觸，污染環(huán)境，且成本較高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 針對上述技術(shù)問題，本領(lǐng)域迫切需要能夠縮短樣品前處理時間、節(jié)省溶劑、降低成 本的檢測方法。
[0005] 對此，本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有樣品前處理技術(shù)處理時間長、消耗溶劑多等缺 點和不足，使用快速、有效和低成本的樣品前處理過程，能夠?qū)ζ咸丫浦卸喾N農(nóng)藥的殘留量 同時進行檢測。
[0006] 本發(fā)明的第一方面涉及對葡萄酒進行前處理的方法，該葡萄酒是待進行農(nóng)藥殘 留量檢測的樣品，該前處理方法包括如下步驟：
[0007] (1)提取：向所述葡萄酒中加入內(nèi)標物、含1 %乙酸的乙腈、氯化鈉、無水乙酸鈉， 振搖，然后在冰袋的存在下超聲提取，再加入干燥劑后振搖，然后離心分離；
[0008] (2)凈化：將由所述步驟（1)中得到的上清提取液與吸附劑和干燥劑混合，振搖， 再尚心分尚；
[0009] (3)濃縮：將由所述步驟（2)中得到的上清凈化液濃縮，通過濾膜進行過濾，以待 進一步的農(nóng)藥殘留量檢測。
[0010] 在優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明所述的前處理方法可具有如下技術(shù)特征中的一項 或多項：內(nèi)標物為環(huán)氧七氯B;步驟（1)中的干燥劑為無水硫酸鎂；吸附劑為石墨化炭黑 和N-丙基乙二胺鍵合硅膠；步驟（2)中的干燥劑為無水硫酸鎂；步驟（3)中的濃縮采用在 30°C下氮吹的方式進行；所述濾膜是孔徑為0. 22μm的尼龍濾膜。
[0011] 在優(yōu)選的實施方式中，各試劑的用量為：葡萄酒l〇g;含1%乙酸的乙腈20mL;氯 化鈉4g;無水乙酸鈉lg;步驟（1)中的干燥劑6g;作為吸附劑的石墨化炭黑25-100mg，優(yōu) 選50mg;作為吸附劑的N-丙基乙二胺鍵合硅膠100-300mg，優(yōu)選250mg;步驟⑵中的干燥 劑lg。在進一步優(yōu)選的實施方式中，在所述步驟（2)中，使用10mL由所述步驟（1)中得到 的上清提取液；和/或在所述步驟（3)中，使用5mL由所述步驟（2)中得到的上清凈化液。
[0012] 在一個非常優(yōu)選的實施方式中，所述方法包括如下步驟：
[0013] (1)提取：向l〇g所述葡萄酒中加入環(huán)氧七氯B，加入20mL含1%乙酸的乙腈、4g 氯化鈉、lg無水乙酸鈉，振搖2min，然后在冰袋的存在下超聲提取20min，再加入6g無水硫 酸鎂后振搖2min，然后以3000r/min離心分離5min;
[0014] (2)凈化：將10mL由所述步驟⑴中得到的上清提取液與50mg石墨化炭黑、250mg N-丙基乙二胺鍵合硅膠和lg無水硫酸鎂混合，振搖2min，再以6000r/min離心分離3min;
[0015] (3)濃縮：將5mL由所述步驟（2)中得到的上清凈化液在30°C下用氮吹的方式濃 縮至lmL，通過孔徑為0. 22μπι的尼龍濾膜進行過濾，以待進一步的農(nóng)藥殘留量檢測。
[0016] 在進一步優(yōu)選的實施方式中，步驟（1)在50mL離心管中進行，步驟（2)在15mL聚 丙烯離心管中進行，步驟（3)在帶有精準刻度的5mL玻璃離心管中進行。
[0017] 本發(fā)明的第二方面涉及對葡萄酒進行農(nóng)藥殘留量檢測的方法，該檢測方法包括使 用本發(fā)明第一方面所述的前處理方法對葡萄酒進行前處理的步驟。在優(yōu)選的實施方式中， 在前處理步驟完成后通過GC/MS進行農(nóng)藥殘留量檢測。
[0018] 本發(fā)明所述前處理方法能夠?qū)崿F(xiàn)對將要進行農(nóng)殘檢測的葡萄酒樣品進行快速的 前處理，其步驟少，耗時短，無需大量的有機溶劑，十分環(huán)保，且成本較低。
[0019] 本發(fā)明所述前處理方法的一個重要特征是在冰袋的存在下進行超聲提取。雖然通 過例如將提取液體系在冰箱中冷藏一定時間再進行提取也能達到類似的提取效果，但這樣 會大大增加步驟（1)所需要的時間，對于實現(xiàn)快速前處理是不利的。如果控制室溫或超聲 機水浴的溫度（例如通過空調(diào)或恒溫傳感控制裝置）來縮短時間，又會明顯增加檢測成本， 也不利于本方法在酒廠的實際應(yīng)用。事實上，采用冰袋來降低超聲工序期間的溫度，不僅能 夠?qū)崿F(xiàn)快速提取，同時由于冰袋可以重復利用，使得本發(fā)明的方法在時間和經(jīng)濟成本兩方 面都具有明顯的優(yōu)勢。
[0020] 此外，雖然現(xiàn)有技術(shù)中存在一些針對水果、蔬菜、中草藥等樣品的農(nóng)殘檢測前處理 技術(shù)，但其所針對的樣品基質(zhì)與本發(fā)明的葡萄酒基質(zhì)相差較大（即使是水果葡萄的基質(zhì)也 與葡萄酒基質(zhì)不同）。葡萄酒是采用專用的釀酒葡萄，以新鮮的葡萄或葡萄汁為原料，經(jīng)過 發(fā)酵產(chǎn)生的含一定酒精度的產(chǎn)品。釀酒葡萄與水果葡萄相比，其糖分、酸度和酚類物質(zhì)（主 要是單寧）含量更高；經(jīng)酵母發(fā)酵和橡木桶陳釀后，葡萄酒中還含有12-14%的酒精、高級 醇和酯、橡木內(nèi)酯等物質(zhì)。因此，不宜用針對其它基質(zhì)的已有前處理方法對葡萄酒樣品進行 處理。
【附圖說明】
[0021] 圖1是0. 100μg/mL52種農(nóng)藥標準品總離子流色譜圖。
【具體實施方式】
[0022] 在本發(fā)明的下述示例性的【具體實施方式】中，所使用的儀器包括：7890A_5975C氣 相色譜-質(zhì)譜儀（美國Agilent公司）、TG16-II臺式高速離心機（長沙平凡儀器儀表有限 公司）、BSA224S-CW電子天平（德國賽多利斯集團）、SB-3200DTDN超聲波清洗機（寧波新 芝生物科技股份有限公司）、TTL-DCII氮吹儀（同泰聯(lián)科技發(fā)展有限公司）、QL-902旋渦 混合器（海門其林貝爾儀器制造有限公司）。
[0023] 在本發(fā)明的下述示例性的【具體實施方式】中，所使用的農(nóng)藥標準品包括：霜霉威、 內(nèi)吸磷、殺蟲脒、甲拌磷、特丁硫磷、嘧霉胺、百菌清、磷胺、七氯、殺螟硫磷、馬拉硫磷、倍 硫磷、對硫磷、腐霉利、苯線磷、丙溴磷、氟娃唑、除草醚、p,P'-DDE、p,P'-DDD、0,P'-DDT、 p，p'-DDT、戊唑醇、氟環(huán)唑、氯菊酯、咪鮮胺、嘧菌酯、敵敵畏、仲丁威、滅線磷、治螟磷、 α-666、β-666、γ-666、δ-666、地蟲硫磷、氯唑磷、甲基對硫磷、甲霜靈、艾氏劑、乙霉威、 毒死蜱、己唑醇、狄氏劑、腈菌唑、異狄氏劑、烯唑醇、丙環(huán)唑、炔螨特、甲氰菊酯、蠅毒磷、氰 戊菊酯（德國Dr.EhrenstorferGmbH公司）。
[0024] 在本發(fā)明的下述示例性的【具體實施方式】中，所使