一種基于微接觸剝離技術(shù)利用點面電極電場制備相分離的巨型磷脂囊泡陣列的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種制備相分離的巨型磷脂囊泡陣列的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]脂筏是膜脂雙層內(nèi)含有特殊脂質(zhì)和蛋白質(zhì)的微區(qū)，以液態(tài)有序相分散于細(xì)胞膜中，對生物體內(nèi)的信號傳導(dǎo)，蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運，細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)以及病原體入侵等生理過程中都起著非常重要的作用。但細(xì)胞膜中的脂筏不能用顯微鏡直接觀察，目前主要是采用間接的方法對脂筏進(jìn)行研究。由于巨型磷脂囊泡與細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)相似、與細(xì)胞尺寸相近，且便于用顯微鏡進(jìn)行觀察，三元組分巨型磷脂囊泡的相分離被廣泛應(yīng)用于脂筏的模擬中。目前相分離巨型磷脂囊泡陣列的制備還罕見報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是要解決現(xiàn)有不能制備相分離的巨型磷脂囊泡陣列的問題，而提供一種基于微接觸剝離技術(shù)利用點面電極電場制備相分離的巨型磷脂囊泡陣列的方法。
[0004]—種基于微接觸剝離技術(shù)利用點面電極電場制備相分離的巨型磷脂囊泡陣列的方法是按以下步驟完成的:
[0005]—、清洗電極:首先使用無水乙醇對ITO電極進(jìn)行超聲清洗，再使用蒸餾水對ITO電極進(jìn)行超聲清洗，再使用氮氣吹干，再使用等離子體清洗機對ITO電極進(jìn)行清洗;得到清洗后的ITO電極;將鎢針電極浸泡在物質(zhì)的量濃度為2mo 1/L的鹽酸中3h?6h，再用蒸餾水進(jìn)行沖洗3次?6次，再使用氮氣吹干，得到清洗后的鎢針電極；
[0006]二、帶有圖案的聚二甲基硅氧烷印章的清洗:首先使用蒸餾水對帶有圖案的聚二甲基硅氧烷印章進(jìn)行超聲清洗，再使用無水乙醇對帶有圖案的聚二甲基硅氧烷印章進(jìn)行超聲清洗，再使用氮氣吹干，得到清洗后的帶有圖案的聚二甲基硅氧烷印章；
[0007]三、制備混合磷脂干膜:將混合磷脂溶解到氯仿中，得到混合磷脂/氯仿溶液;再將混合磷脂/氯仿溶液均勻涂覆在清洗后的ITO電極的導(dǎo)電面上，室溫下自熱干燥2h?4h，得到干燥的涂有混合磷脂的ITO電極；
[0008]步驟三中所述的混合磷脂為I，2_二油?；字Ｄ憠A、二硬脂酰磷脂酰膽堿和膽固醇的混合物;所述的混合磷脂中I，2_二油?；字Ｄ憠A與二硬脂酰磷脂酰膽堿質(zhì)量比為1: (0.6?3);所述的I，2_二油酰基磷脂酰膽堿與膽固醇的質(zhì)量比為1: (0.4?2);
[0009]步驟三中所述的混合磷脂/氯仿溶液中混合磷脂的質(zhì)量與氯仿的體積比為(3mg?15mg):lmL；
[0010]步驟三中所述的混合磷脂/氯仿溶液的體積與清洗后的ITO電極的導(dǎo)電面的面積比為(3yL?1yL): 1.44cm2;
[0011]四、制備三元混合磷脂干膜陣列的ITO電極:將清洗后的帶有圖案的聚二甲基硅氧烷印章的帶有圖案微結(jié)構(gòu)的一面壓印在干燥的涂有混合磷脂的ITO電極的混合磷脂干膜上1min?50min，得到三元混合磷脂干膜陣列的ITO電極；
[0012]步驟四中所述的壓印時每Icm2清洗后的帶有圖案的聚二甲基硅氧烷印章上受力*0.05Ν?0.1Ν;
[0013]五、密閉制備裝置的組裝:將三元混合磷脂干膜陣列的ITO電極與聚四氟乙烯矩形框和PDMS蓋片組成密閉制備裝置，清洗后的鎢針電極垂直通過TOMS蓋片，且清洗后的鎢針電極進(jìn)入到密閉制備裝置內(nèi)部中；再在密閉制備裝置中注入蒸餾水；
[0014]步驟五中所述的圖案化磷脂薄膜陣列的ITO電極與清洗后的鎢針電極針尖之間的距離為 200μηι ?800μηι;
[0015]步驟五中所述的清洗后的鎢針電極針尖與密閉制備裝置上部PDMS蓋片的距離為1200μπι ?1800μπι ；
[0016]六、相分離的巨型磷脂囊泡陣列的形成過程:將密閉制備裝置放在溫度為65°C?120°C的加熱臺上，再將三元混合磷脂干膜陣列的ITO電極和清洗后的鎢針電極分別與信號發(fā)生器相連接，再在波形為正弦波、交流電壓為0.5V?10V、頻率為1Hz?1000Hz、溫度為65°C?120°C和時間為30min?300min的條件下，得到相分離的巨型磷脂囊泡陣列；
[0017]步驟六中所述的巨型磷脂囊泡陣列中磷脂囊泡的直徑為30μπι?50μπι。
[0018]本發(fā)明的優(yōu)點:
[0019]—、本發(fā)明利用點面電極和帶有圖案的聚二甲基硅氧烷印章，基于微接觸剝離技術(shù)和電形成方法，實現(xiàn)在一定三元混合磷脂比例，一定交流電壓范圍及一定時間范圍內(nèi)，相分離的巨型磷脂囊泡陣列的制備，囊泡尺寸均勻、相分離清晰可見；
[0020]二、本發(fā)明豐富了相分離巨型磷脂囊泡陣列的制備方法，具有低能耗、綠色經(jīng)濟(jì)、操作簡單、反應(yīng)條件溫的優(yōu)點；
[0021]三、本發(fā)明制備的巨型磷脂囊泡陣列中磷脂囊泡的直徑為30μπι?50μπι;
[0022]四、本發(fā)明制備的巨型磷脂囊泡陣列中磷脂囊泡在研究細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞間信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白質(zhì)分選、細(xì)胞內(nèi)吞途徑等方面具有重要意義。
[0023]本發(fā)明可獲得一種基于微接觸剝離技術(shù)利用點面電極電場制備相分離的巨型磷脂囊泡陣列的方法。
【附圖說明】
[0024]圖1為實施例一步驟四中制備三元混合磷脂干膜陣列的ITO電極過程的示意圖；圖1中I為將清洗后的帶有圖案的聚二甲基硅氧烷印章，2為干燥的涂有混合磷脂的ITO電極，3為三元混合磷脂干膜陣列的ITO電極；
[0025]圖2為實施例一步驟五中所述的密閉制備裝置的結(jié)構(gòu)示意圖，圖2中I為干燥的涂有混合磷脂的ITO電極，2為清洗后的鎢針電極，3為聚四氟乙烯矩形框，4為PDMS蓋片，5為信號發(fā)生器，A為清洗后的鎢針電極針尖與密閉制備裝置上部TOMS蓋片的距離，B為干燥的涂有混合磷脂的ITO電極與清洗后的鎢針電極針尖之間的距離；
[0026]圖3為實施例一制備的相分離的巨型磷脂囊泡陣列的熒光顯微鏡圖片。
【具體實施方式】
[0027]【具體實施方式】一:本實施方式是一種基于微接觸剝離技術(shù)利用點面電極電場制備相分離的巨型磷脂囊泡陣列的方法是按以下步驟完成的:
[0028]—、清洗電極:首先使用無水乙醇對ITO電極進(jìn)行超聲清洗，再使用蒸餾水對ITO電極進(jìn)行超聲清洗，再使用氮氣吹干，再使用等離子體清洗機對ITO電極進(jìn)行清洗;得到清洗后的ITO電極;將鎢針電極浸泡在物質(zhì)的量濃度為2mo 1/L的鹽酸中3h?6h，再用蒸餾水進(jìn)行沖洗3次?6次，再使用氮氣吹干，得到清洗后的鎢針電極；
[0029]二、帶有圖案的聚二甲基硅氧烷印章的清洗:首先使用蒸餾水對帶有圖案的聚二甲基硅氧烷印章進(jìn)行超聲清洗，再使用無水乙醇對帶有圖案的聚二甲基硅氧烷印章進(jìn)行超聲清洗，再使用氮氣吹干，得到清洗后的帶有圖案的聚二甲基硅氧烷印章；
[0030]三、制備混合磷脂干膜:將混合磷脂溶解到氯仿中，得到混合磷脂/氯仿溶液;再將混合磷脂/氯仿溶液均勻涂覆在清洗后的ITO電極的導(dǎo)電面上，室溫下自熱干燥2h?4h，得到干燥的涂有混合磷脂的ITO電極；
[0031]步驟三中所述的混合磷脂為I，2_二油?；字Ｄ憠A(D0PC)、二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)和膽固醇的混合物;所述的混合磷脂中I，2_二油酰基磷脂