一種適合全自動生化分析儀的尿總蛋白檢測試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及尿總蛋白檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種適合全自動生化分析儀的尿總蛋白 檢測試劑。
【背景技術(shù)】
[0002] 血液中常會有定量的對人類生命活動不可或缺的蛋白存在。一部分的蛋白會在腎 臟的絲球體中過濾進入尿液中，但又會在腎小管被吸收而回到血液中。因此，若腎臟的機 能正常，在尿液中出現(xiàn)的蛋白量只有極少量(每日排出量小于150 mg)，但是當腎臟與尿管 出現(xiàn)障礙時就會漏出多量的蛋白變成蛋白尿。正常人尿中有微量蛋白，正常范圍內(nèi)定性為 陰性，記為(_)。尿中蛋白質(zhì)含量多達〇.15g/24h以上時，稱蛋白尿，尿常規(guī)定性可出現(xiàn)陽性。 分型1.腎小球性蛋白尿這是最常見的一種蛋白尿。由于腎小球濾過膜因炎癥、免疫、代謝 等因素損傷后濾過膜孔徑增大、斷裂和(或)靜電屏障作用減弱，血漿蛋白質(zhì)特別是清蛋白 濾出，超出近端腎小管重吸收能力而形成的蛋白尿。若腎小球損害較重，球蛋白及其他大相 對分子質(zhì)量蛋白濾出也可增加。
[0003] 糖尿病腎病早期，腎小球基底膜受損較輕，故只有微量白蛋白漏出。早期糖尿病腎 病uAE為15~200微克/分，臨床糖尿病腎病>200微克/分。
[0004] 臨床上常用的尿總蛋白檢測方法有比濁法、染料結(jié)合法和雙縮脲比色法。
[0005] 1.比濁法 比濁法是通過加入磺基水楊酸(SSA)、三氯乙酸(TCA)、鎢酸于尿液中，使蛋白質(zhì)沉淀形 成一定的濁度，然后通過比濁的方法檢測蛋白質(zhì)含量。該方法準確度較差，抗干擾能力差。 2.染料結(jié)合法 染料結(jié)合法分為直接法和沉淀法兩類。直接法是通過染料與蛋白質(zhì)結(jié)合時，其最大吸 收峰的漂移來檢測的。該方法所用的染料有考馬斯亮藍G-250、鄰苯三酚紅和苯甲紫等，這 類方法具有蛋白質(zhì)與染料結(jié)合迅速，呈色穩(wěn)定和靈敏度高等優(yōu)點。
[0006] 3.雙縮脲比色法 蛋白質(zhì)在堿性溶液中可與CU2+形成紫色化合物，在一定濃度范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)濃度與紫 色化合物顏色的深淺成正比。雙縮脲反應(yīng)的靈敏度低，抗干擾能力差。
[0007] 染料結(jié)合法相對于其他兩種方法具有穩(wěn)定性好，靈敏度高的特點。鄰苯三酚紅 (PR)與鉬酸(Movi)形成的紅色化合物(最大吸收波長470nm)，在酸性條件下能與蛋白質(zhì)結(jié) 合成藍紫色復(fù)合物(PR-M〇-Pr 〇tein)(最大吸收波長604nm)，反應(yīng)所形成的藍紫色跟樣品中 蛋白質(zhì)含量成正比。該方法簡單實用，檢測結(jié)果準確，檢測范圍廣，適合全自動生化分析儀。
[0008] 鑒于此，本發(fā)明在鄰苯三酚紅法的基礎(chǔ)上，優(yōu)化反應(yīng)體系，添加多種抗干擾物質(zhì)和 穩(wěn)定劑，顯著改善了試劑的抗干擾能力。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]針對于尿總蛋白檢測，本發(fā)明提供了一種適合與全自動生化分析儀配套使用的尿 總蛋白檢測試劑盒，該試劑盒與常規(guī)的試劑盒相比，使用簡單、方便，具有很好的準確度、重 復(fù)性及良好的檢測范圍，有利于試劑在臨床上的推廣應(yīng)用。
[0010] 基本原理 鄰苯三酚紅(PR)與鉬酸(Movi)形成的紅色化合物(最大吸收波長470nm)，在酸性條件 下能與蛋白質(zhì)結(jié)合成藍紫色復(fù)合物(PR-Mo_Protein)(最大吸收波長604nm)，反應(yīng)所形成的 藍紫色跟樣品中蛋白質(zhì)含量成正比。
[0011] 本發(fā)明是通過以下步驟得到的： 一種尿總蛋白檢測試劑，包括試劑R，所述試劑R的組成如下： 1. 一種適合全自動生化分析儀的尿總蛋白檢測試劑盒，由R單試劑組成。其特征在于： R:鄰苯三酚紅 60ymol/L 甲醇 4.0% 鉬酸鈉 40ymol/L 琥珀酸 5.9g/L 草酸鈉 0.14g/L 苯甲酸鈉 0.5 g/L 十^烷基硫酸納 20mg/L 牛血清白蛋白 1.5g/L 2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑R在使用時的用量為R= 300yL。
[0012] 本發(fā)明的有益效果是： 本發(fā)明選擇染料結(jié)合法(鄰苯三酚紅)設(shè)計試劑配方用于檢測尿總蛋白，該試劑適用于 多種全自動生化分析儀。
[0013]
【附圖說明】 圖1為兩種試劑的相關(guān)性曲線圖； 圖2為本發(fā)明試劑開瓶穩(wěn)定性。
【具體實施方式】
[0014] 下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進行進一步說明： (1)實施例1 R:鄰苯三酚紅 60ymol/L 甲醇 4.0% 鉬酸鈉 40ymol/L 琥珀酸 5.9g/L 草酸鈉 0.14g/L 苯甲酸鈉 0.5 g/L 十^烷基硫酸納 20mg/L 牛血清白蛋白 1.5g/L 本實施例試劑的使用方法： 本實施例描述的尿總蛋白檢測試劑，在使用時采用全自動生化分析儀，如日立7180全 自動分析儀等，利用一點終點法進行測定。將樣本和試劑R的比例設(shè)定為5:300,在樣品盤的 對應(yīng)位置放置好蒸餾水、標準品和樣本，操作如表1: 表1實施例1試劑檢測方法
尿總蛋白的含量(mg/dL) = ( ΔΑ測定+ ΔΑ標準）XC標準。
[0015] 實施例2 干擾性試驗:取新鮮混合尿液，分成2等份，然后將每等份再分成5等份，加入不同的干 擾物質(zhì)，使其在尿液中的濃度達到表2的要求。然后分別用實施例1所得試劑，與市場常見并 認可的尿總蛋白試劑同時對比測定尿總蛋白的含量，對照組測定結(jié)果與加入不同干擾物質(zhì) 后各組的測定結(jié)果見表2。相對偏差(％) =(干擾樣本的測定均值一對照樣本的測定均值)/對 照樣本的測定均值X 100%; 表2實施例試劑抗干擾性能比較
由表2可以看出，實施例1試劑在尿酸< 2250mg/L、膽紅素< 100mg/L、血紅蛋白< 200mg/L、甘油三酯<22.6mmol/L對測試結(jié)果沒有明顯干擾。與對照試劑檢測結(jié)果一致，說 明實施例1的試劑在準確度和抗干擾能力上達標。
[0016] 實施例3 相關(guān)性實驗:利用實施例1配方配制試劑，與市場常見的國家食品藥品監(jiān)督管理局認可 的某公司的尿總蛋白試劑盒進行對照檢測，同時檢測了 20個臨床血清樣本，檢測結(jié)果如表3 所示。并獲得了兩種試劑的相關(guān)性曲線（如圖1所示），通過檢測結(jié)果顯示，兩個試劑盒的相 關(guān)系數(shù)為0.999，說明了兩者有極大的相關(guān)性。
[0017] 表3實施例1試劑與市場常見并得到認可的血清銅測定試劑盒對比檢測結(jié)果
試驗所用校準品和質(zhì)控品分別為： 校準品:尿總蛋白的含量為19.2 11^/(1匕
[0018] 質(zhì)控品：尿總蛋白的靶值為15 · 8mg/dL，靶值范圍：12 · 6-19 · Omg/dL。
[0019] 實施例4 試劑穩(wěn)定性驗證試驗的具體操作方法： 將本發(fā)明實施例卜3中所得檢測試劑作為試驗組，取一種市售尿總蛋白檢測試劑盒作 為對照組，試驗組與對照組試劑每組各自取相同的兩份，一份做15天開瓶穩(wěn)定性試驗，將試 劑開瓶放置在儀器的2-8°C冷藏箱中（15天不取出），作為15天開瓶穩(wěn)定性檢測；另一份做37 °C熱穩(wěn)定性檢測試驗，封閉放置在37°C恒溫水浴鍋中（每天僅在檢測的時候取出，檢測完畢 后，依然封口放回37 °C水浴鍋中，連續(xù)7天），作為7天37 °C熱穩(wěn)定性驗證。將試劑同時在日立 7180全自動生化分析儀器上，按照如下表1方法進行檢測，并在儀器上建立標準曲線。取凍 干粉質(zhì)控品，溶解均勻后，平均分成15份，_20°C儲存，每天質(zhì)控一個，并且跟蹤檢測結(jié)果，其 開瓶跟蹤監(jiān)測趨勢如圖2。
【主權(quán)項】
1. 一種適合全自動生化分析儀的尿總蛋白檢測試劑盒，由R單試劑組成，其特征在于： R:鄰苯三酚紅 60ymol/L 甲醇 4.0% 鉬酸鈉 40ymol/L 琥珀酸 5.9g/L 草酸鈉 0.14g/L 苯甲酸鈉 0.5 g/L 十^烷基硫酸納 20mg/L 牛血清白蛋白 1.5g/L。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑R在使用時的用量為R= 300yL。
【專利摘要】本發(fā)明涉及尿總蛋白染料結(jié)合法(鄰苯三酚紅)檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種尿總蛋白檢測試劑，試劑R中含有鄰苯三酚紅、甲醇、鉬酸鈉、琥珀酸、草酸鈉、苯甲酸鈉、十二烷基硫酸鈉和牛血清白蛋白，該試劑適合與各種全自動生化分析儀配套使用。
【IPC分類】G01N21/78, G01N35/00
【公開號】CN105572117
【申請?zhí)枴緾N201510915386
【發(fā)明人】王進, 李家朋, 譚柏清
【申請人】章丘九亞醫(yī)療器械有限公司
【公開日】2016年5月11日
【申請日】2015年12月11日