一種水溶肥料中殼聚糖含量的檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種水溶肥料中殼聚糖含量的檢測(cè)方法，其特點(diǎn)是：1）準(zhǔn)確稱取固體或液體試樣備用；準(zhǔn)確移取適量該溶液至透析袋中進(jìn)行透析，透析結(jié)束后定容為Ⅰ液；準(zhǔn)確移取適量Ⅰ液至具塞試管中，加酸水解，水解后中和，定容為Ⅱ液；2）以鹽酸氨基葡萄糖溶液為標(biāo)準(zhǔn)溶液，繪制工作曲線；3）準(zhǔn)確移?、蛞?，與乙酰丙酮和對(duì)二甲氨基苯甲醛進(jìn)行顯色反應(yīng)生成紅色化合物，在波長(zhǎng)525nm下測(cè)定吸光值，根據(jù)吸光值計(jì)算殼聚糖含量。本發(fā)明確保了檢測(cè)結(jié)果的真實(shí)可靠性，確定了殼聚糖的最佳水解條件，排除了肥料中一些物料如大量元素、微量元素及有機(jī)物對(duì)殼聚糖含量檢測(cè)的干擾，同時(shí)，本發(fā)明方法選擇性好，操作簡(jiǎn)單，成本低，普遍適用性高。
【專利說明】
-種水溶肥料中亮聚糖含量的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及水溶肥料檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，尤其設(shè)及一種水溶肥料中殼聚糖含量的檢測(cè) 方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 殼聚糖(Chitosan，CTS)學(xué)名為β-1，4-2-氨基-2-脫氧-D-葡聚糖，是甲殼質(zhì)經(jīng)濃堿 脫乙酷基后得到的衍生物。殼聚糖對(duì)植物病害有防治作用，其機(jī)理是誘導(dǎo)植物產(chǎn)生廣譜抗 菌性，增強(qiáng)自身的防衛(wèi)能力，抑制多種病源微生物的生長(zhǎng)。近年來，殼聚糖類水溶肥料發(fā)展 迅速，已成為一種無毒、無公害、無污染、促進(jìn)植物生長(zhǎng)的新型肥料，并且廣泛應(yīng)用到農(nóng)業(yè)生 產(chǎn)中。
[0003] 然而關(guān)于殼聚糖水溶肥料中殼聚糖的檢測(cè)一直都沒有適合的方法，在準(zhǔn)確性上都 達(dá)不到要求，因此，國(guó)家或行業(yè)內(nèi)沒有一個(gè)統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)方法。運(yùn)就導(dǎo)致無法驗(yàn)證產(chǎn)品指標(biāo)的 真實(shí)性，也就無法控制產(chǎn)品質(zhì)量，使得殼聚糖產(chǎn)品良莽不齊，不便于管理。因此基于運(yùn)個(gè)缺 陷，在2013年9月農(nóng)業(yè)部肥料登記評(píng)審委員會(huì)肥料評(píng)審組屯屆二次會(huì)議上，對(duì)94個(gè)W海藻、 郵蟹殼、腐植酸錠、腐植酸鐘、糖蜜、有機(jī)酸等為原料的獲證有機(jī)水溶肥料進(jìn)行了重新審核， 會(huì)議明確表示殼聚糖測(cè)定值作為登記評(píng)審的技術(shù)指標(biāo)，暫不予W標(biāo)注。運(yùn)就表示生產(chǎn)殼聚 糖類水溶肥料的廠家不能再在產(chǎn)品上標(biāo)識(shí)殼聚糖含量指標(biāo)，該類產(chǎn)品也不能再W殼聚糖名 稱來銷售，只能W有機(jī)水溶肥料名稱銷售。運(yùn)對(duì)生產(chǎn)企業(yè)和肥料行業(yè)都是一個(gè)很大的沖擊， 殼聚糖類肥料產(chǎn)品的優(yōu)勢(shì)無法體現(xiàn)出來，運(yùn)對(duì)廠家和消費(fèi)者都是一個(gè)損失。因此，目前迫切 需要建立適合水溶肥料的殼聚糖含量檢測(cè)方法。
[0004] 另一方面目前現(xiàn)有的關(guān)于肥料中殼聚糖含量檢測(cè)方法，能查閱到的文獻(xiàn)僅是韓書 霞、李德波等的《分光光度法測(cè)定肥料中殼聚糖含量》，文章中的方法存在缺陷：其一，未將 某些大量元素、微量元素及有機(jī)物對(duì)殼聚糖檢測(cè)的干擾考慮在內(nèi)。而本
【申請(qǐng)人】則針對(duì)添加 各類原料對(duì)殼聚糖檢測(cè)的干擾進(jìn)行了大量組合試驗(yàn)，最終通過歸納總結(jié)大量實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可 知:①為肥料提供大量元素氮源的物質(zhì)中所包含的Ν也+、Ν03^、尿素對(duì)測(cè)定有嚴(yán)重干擾，其中 畑4+、尿素使測(cè)定結(jié)果偏高5%-28%，而Ν03前存在則使測(cè)定無法正常進(jìn)行，檢測(cè)不到數(shù)值;② 為肥料提供微量元素的物質(zhì)中所包含的Cu2\Fe2\B〇33^對(duì)測(cè)定有嚴(yán)重干擾，均使測(cè)定結(jié)果 偏低11%-48%;③有機(jī)物類原料生化黃腐酸、糖蜜發(fā)酵液均對(duì)測(cè)定存在嚴(yán)重干擾，使測(cè)定結(jié) 果偏高7%-130%。若不排除此類干擾，會(huì)嚴(yán)重影響測(cè)定數(shù)值的真實(shí)性;而提供大量元素憐源、 大量元素鐘源、中量元素（巧和儀）、其他微量元素(鋒和儘）W及其他一些有機(jī)物質(zhì)（甘露 醇、薦糖、葡萄糖)則對(duì)殼聚糖檢測(cè)基本無影響。
[0005] 其二，《分光光度法測(cè)定肥料中殼聚糖含量》文章中殼聚糖水解的酸類別及酸濃度 不是最佳條件。而本
【申請(qǐng)人】則采用不同種酸溶液及不同濃度酸溶液對(duì)殼聚糖進(jìn)行水解，通 過大量實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)可W看出:硫酸溶液整體上水解效果都優(yōu)于鹽酸溶液。
[0006] 如何提供一種水溶肥料中殼聚糖含量的檢測(cè)方法，確定最佳的水解條件W及排除 大量元素、微量元素及有機(jī)物對(duì)殼聚糖含量檢測(cè)的干擾，真實(shí)客觀反映水溶肥料中殼聚糖 含量，且方法符合普遍適用性，是殼聚糖類肥料行業(yè)內(nèi)迫切需要的，運(yùn)也是本發(fā)明面臨的技 術(shù)問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明為解決現(xiàn)有存在的上述問題，提供了一種水溶肥料中殼聚糖含量的檢測(cè)方 法，確定最佳的水解條件，排除水溶肥料中添加的各種物料(大量元素、微量元素及有機(jī)物） 對(duì)殼聚糖含量檢測(cè)的干擾，真實(shí)客觀反映水溶肥料中殼聚糖含量，且方法符合普遍適用性。
[0008] 本發(fā)明的目的是通過W下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：一種水溶肥料中殼聚糖含量的檢測(cè)方 法，包括如下檢測(cè)步驟： 1) 試樣溶液的制備:準(zhǔn)確稱取固體或液體試樣，固體試樣配制成溶液備用，液體試樣直 接備用;準(zhǔn)確移取適量該溶液至透析袋中進(jìn)行透析，透析結(jié)束后定容為I液;準(zhǔn)確移取適量I 液至具塞試管中，加酸水解，水解后中和，定容為Π 液； 2) 工作曲線的繪制：W鹽酸氨基葡萄糖溶液為標(biāo)準(zhǔn)溶液，與乙酷丙酬和對(duì)二甲氨基苯 甲醒進(jìn)行顯色反應(yīng)生成紅色化合物，在波長(zhǎng)525nm下測(cè)定吸光值，W標(biāo)準(zhǔn)系列鹽酸氨基葡萄 糖質(zhì)量為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的吸光值為縱坐標(biāo)，繪制工作曲線； 3) 試樣的測(cè)定:若試樣溶液Π 液為無色透明液體，則準(zhǔn)確移取Π 液，與乙酷丙酬和對(duì)二 甲氨基苯甲醒進(jìn)行顯色反應(yīng)生成紅色化合物，在波長(zhǎng)525nm下測(cè)定吸光值，根據(jù)測(cè)得的吸光 值，在工作曲線上查得對(duì)應(yīng)的鹽酸氨基葡萄糖的質(zhì)量;若試樣溶液Π 液為有色或不透明液 體，則準(zhǔn)確移取Π 液，與乙酷丙酬和對(duì)二甲氨基苯甲醒進(jìn)行顯色反應(yīng)生成紅色化合物，在波 長(zhǎng)525nm下測(cè)定吸光值，吸光值讀數(shù)記為Ai;另取1只比色管，加入與顯色時(shí)相同體積的Π 液，加入無醒乙醇，將溶液用水稀釋定容，搖勻，在波長(zhǎng)525nm下測(cè)定吸光值，吸光值讀數(shù)記 為Ao;最終所得試樣吸光值A(chǔ)=Ai-A〇。根據(jù)得到的吸光值，在工作曲線上查得對(duì)應(yīng)的鹽酸氨基 葡萄糖的質(zhì)量； 4) 分析結(jié)果的表述 固體產(chǎn)品殼聚糖含量wW其質(zhì)量分?jǐn)?shù)(％)表示，按公式(1)計(jì)算：
液體產(chǎn)品殼聚糖含量P W其質(zhì)量濃度(g/L)表示，按公式(2 )計(jì)算：
上述公式中，mi代表由工作曲線查得的鹽酸氨基葡萄糖的質(zhì)量，單位為微克(yg);m代 表固體試樣的質(zhì)量，單位為克(g);V代表液體試樣的體積，單位為毫升(mL);V〇代表固體試 樣溶解后的定容體積，單位為毫升(mL) ; Vi代表透析后定容的體積，單位為毫升(mL) ; V2代表 水解中和后定容的體積，單位為毫升(mL) ; VI代表移取I液水解的體積，單位為毫升(mL) ; V2 代表移取Π 液至比色管中的體積，單位為毫升(mL); 0.8309代表鹽酸氨基葡萄糖折算為氨 基葡萄糖的系數(shù)。
[0009] 對(duì)上述技術(shù)方案的改進(jìn):所述步驟1)中，試樣溶液水解前需進(jìn)行透析，將干擾因素 NH4+、N03-、尿素、Cu2+、Fe2\B〇33-W及小分子有機(jī)物（分子量<500Da)排除，透析袋規(guī)格為 MWC0:100-500、透析時(shí)間為2地~72h。 對(duì)上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn):所述步驟1)中，酸水解中所用酸溶液為硫酸溶液，水解 時(shí)溶液濃度為7-9mo 1 /L，水解溫度100°C~105°C，水解時(shí)間化~她。
[0010] 對(duì)上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn):所述步驟1)中，I液酸水解后需要進(jìn)行中和反應(yīng)， 所用中和試劑為氨氧化鋼溶液，濃度為200g/l~400g/L。
[0011] 對(duì)上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn):所述步驟2)中，W鹽酸氨基葡萄糖溶液為標(biāo)準(zhǔn)溶 液，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為10~50yg/mL。
[0012] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn)和積極效果： 本發(fā)明方法從根本上確保了檢測(cè)結(jié)果的真實(shí)可靠性，確定了殼聚糖的最佳水解條件， 排除了肥料中一些物料如大量元素、微量元素及有機(jī)物對(duì)殼聚糖含量檢測(cè)的干擾，同時(shí)該 方法選擇性好，操作簡(jiǎn)單，成本低，普遍適用性高，能完全滿足現(xiàn)有殼聚糖類肥料市場(chǎng)上的 產(chǎn)品檢測(cè)，使產(chǎn)品質(zhì)量能得到有效控制，從而使殼聚糖類肥料產(chǎn)品能名正言順的生產(chǎn)銷售， 有效監(jiān)督和制約生產(chǎn)企業(yè)，促使生產(chǎn)企業(yè)不斷改革創(chuàng)新、提高生產(chǎn)技術(shù)，促進(jìn)殼聚糖類肥料 行業(yè)的發(fā)展。
【附圖說明】
[0013] 圖1為本發(fā)明的實(shí)施例1中氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線； 圖2為本發(fā)明的實(shí)施例2中氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線； 圖3為本發(fā)明的實(shí)施例3中氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0014] 實(shí)施例1: 本發(fā)明一種水溶肥料中殼聚糖含量的檢測(cè)方法，測(cè)定固體產(chǎn)品，殼聚糖理論含量 33.7%，檢測(cè)步驟如下： 1)試樣溶液的制備 固體產(chǎn)品稱取2.523?至lOOmL容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，備用。
[001引移取l.OmL上述固體產(chǎn)品溶液至透析袋中進(jìn)行透析。透析結(jié)束后，試樣轉(zhuǎn)移至25mL 容量瓶中定容，稱為I液，備用。
[0016] 準(zhǔn)確移取I液3 . OmL至比色管中，加入2 . OmL濃硫酸，100°C水浴水解化。水解后用 400g/L氨氧化鋼溶液調(diào)至中性，然后定容至50mL容量瓶中，稱為Π 液，備用，Π 液為接近無 色透明液體。
[0017] 2)工作曲線的繪制 準(zhǔn)確移取鹽酸氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0血、1.0血、2. OmL、3.0血、4.0血、5.0血分別置于 比色管中，用水稀釋至5.0mL，各加入乙酷丙酬溶液l.OmL，搖勻，沸水浴中（Imin后蓋塞)放 置25min，取出，用冷水迅速冷卻后，加入對(duì)二甲氨基苯甲醒溶液1 .OmL,再加入無醒乙醇 3. OmL,用力振搖后，于60 °C水浴中（15min后蓋塞)放置化，取出立即用冷水冷卻至室溫，在 波長(zhǎng)525nm處，用1cm比色皿，W試劑空白為參比液，測(cè)其吸光值。
[0018] W標(biāo)準(zhǔn)系列鹽酸氨基葡萄糖質(zhì)量為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的吸光值為縱坐標(biāo)，繪制工作曲 線，如圖1所示； 3)試樣的測(cè)定 準(zhǔn)確移取π液3. OmL置于比色管中，按步驟2)中"用水稀釋至5. OmL"及w下步驟進(jìn)行。
[0019] 根據(jù)測(cè)得的吸光值，在工作曲線上查得對(duì)應(yīng)的鹽酸氨基葡萄糖的質(zhì)量。
[0020] 4)分析結(jié)果的表述 固體產(chǎn)品殼聚糖含量wW其質(zhì)量分?jǐn)?shù)(％)表示，按公式(1)計(jì)算：
式中： mi-由工作曲線查得的鹽酸氨基葡萄糖的質(zhì)量，單位為微克(yg); m -固體試樣的質(zhì)量，單位為克(g); Vo -固體試樣溶解后的定容體積，單位為毫升(mL)，100mL; Vi -透析后定容的體積，單位為毫升(mL)，25mL; V2 -水解中和后定容的體積，單位為毫升(mL)，50mL; VI -移取I液水解的體積，單位為毫升(mL); V2 -移取Π 液至比色管中的體積，單位為毫升(血）； 0.8309 -鹽酸氨基葡萄糖折算為氨基葡萄糖的系數(shù)。
[0021] 所測(cè)得殼聚糖含量如表1所示。
[0022] 表 1
所述步驟1)中透析袋的規(guī)格為MWC0:100-500，透析時(shí)間為24h。
[0023] 所述步驟2)中鹽酸氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為3化g/mL。
[0024] 所述步驟2)中乙酷丙酬溶液配制步驟為：取乙酷丙酬3.5mL，加入碳酸鋼溶液至 50mL，置4 °C冰箱中備用，應(yīng)于使用前一日配制。碳酸鋼溶液濃度為1. Omo 1/L。
[0025] 所述步驟2)中對(duì)二甲氨基苯甲醒溶液配制步驟為：稱取對(duì)二甲氨基苯甲醒0.8g， 加無醒乙醇15. OmL及濃鹽酸15. OmL，搖勻，現(xiàn)配現(xiàn)用。
[0026] 所述步驟4)中，分析結(jié)果的表述使用固體產(chǎn)品表述方式，W其質(zhì)量分?jǐn)?shù)(％)表示。
[0027] 實(shí)施例2: 本發(fā)明一種水溶肥料中殼聚糖含量的檢測(cè)方法，測(cè)定液體產(chǎn)品，殼聚糖理論含量 14.6g/L，檢測(cè)步驟如下： 1)試樣溶液的制備 準(zhǔn)確移取1.OmL液體產(chǎn)品至透析袋中進(jìn)行透析。透析結(jié)束后，試樣轉(zhuǎn)移至化血容量瓶中 定容，稱為I液，備用。
[0028] 準(zhǔn)確移取I液2.5血至具塞試管中，加入2. OmL濃硫酸，100°C水浴水解化。水解后用 400g/L氨氧化鋼溶液調(diào)至中性，然后定容至50mL容量瓶中，稱為π液，備用，π液為接近無 色透明液體。
[00巧]2)工作曲線的繪制 準(zhǔn)確移取鹽酸氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0血、1.0血、2. OmL、3.0血、4.0血、5.0血分別置于 比色管中，用水稀釋至5.0mL，各加入乙酷丙酬溶液l.OmL，搖勻，沸水浴中（Imin后蓋塞)放 置25min，取出，用冷水迅速冷卻后，加入對(duì)二甲氨基苯甲醒溶液1 .OmL,再加入無醒乙醇 3. OmL,用力振搖后，于60 °C水浴中（15min后蓋塞)放置化，取出立即用冷水冷卻至室溫，在 波長(zhǎng)525nm處，用1cm比色皿，W試劑空白為參比液，測(cè)其吸光值。
[0030] W標(biāo)準(zhǔn)系列鹽酸氨基葡萄糖質(zhì)量為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的吸光值為縱坐標(biāo)，繪制工作曲 線，如圖2所示； 3)試樣的測(cè)定 準(zhǔn)確移取Π 液3. OmL置于比色管中，按步驟2)中"用水稀釋至5. OmL"及W下步驟進(jìn)行。
[0031] 根據(jù)測(cè)得的吸光值，在工作曲線上查得對(duì)應(yīng)的鹽酸氨基葡萄糖的質(zhì)量。
[0032] 4)分析結(jié)果的表述 液體產(chǎn)品殼聚糖含量P W其質(zhì)量濃度(g/L)表示，按公式(2 )計(jì)算：
式中： mi-由工作曲線查得的鹽酸氨基葡萄糖的質(zhì)量，單位為微克(yg); V -液體試樣的體積，單位為毫升(mL); Vi -透析后定容的體積，單位為毫升(mL)，25mL; V2 -水解中和后定容的體積，單位為毫升(mL)，50mL; VI -移取I液水解的體積，單位為毫升(mL); V2 -移取Π 液至比色管中的體積，單位為毫升(血）； 0.8309-鹽酸氨基葡萄糖折算為氨基葡萄糖的系數(shù)。
[0033] 所測(cè)得殼聚糖含量如表2所示。
[0034] 表 2
所述步驟1)中透析袋的規(guī)格為MWC0:100-500，透析時(shí)間為4她。
[0035] 所述步驟2)中鹽酸氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為3化g/mL。
[0036] 所述步驟2)中乙酷丙酬溶液配制步驟為：取乙酷丙酬3.5mL，加入碳酸鋼溶液至 50mL，置4 °C冰箱中備用，應(yīng)于使用前一日配制。碳酸鋼溶液濃度為1. Omo 1/L。
[0037] 所述步驟2)中對(duì)二甲氨基苯甲醒溶液配制步驟為：稱取對(duì)二甲氨基苯甲醒0.8g， 加無醒乙醇15. OmL及濃鹽酸15. OmL，搖勻，現(xiàn)配現(xiàn)用。
[0038] 所述步驟4)中，分析結(jié)果的表述使用液體產(chǎn)品表述方式，W其質(zhì)量濃度(g/L)表 /J、- 〇
[0039] 實(shí)施例3: 本發(fā)明一種水溶肥料中殼聚糖含量的檢測(cè)方法，測(cè)定液體產(chǎn)品，殼聚糖理論含量 20.5g/L，檢測(cè)步驟如下： 1)試樣溶液的制備 準(zhǔn)確移取1.OmL液體產(chǎn)品至透析袋中進(jìn)行透析。透析結(jié)束后，試樣轉(zhuǎn)移至化血容量瓶中 定容，稱為I液，備用。
[0040] 準(zhǔn)確移取I液2.5血至具塞試管中，加入2.OmL濃硫酸，100°C水浴水解化。水解后用 400g/L氨氧化鋼溶液調(diào)至中性，然后定容至50mL容量瓶中，稱為Π 液，備用，Π 液為褐色溶 液。
[0041] 2)工作曲線的繪制 準(zhǔn)確移取鹽酸氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0血、1.0血、2. OmL、3.0血、4.0血、5.0血分別置于 比色管中，用水稀釋至5.OmL,各加入乙酷丙酬溶液1.OmL,搖勻，沸水浴中（Imin后蓋塞)放 置25min，取出，用冷水迅速冷卻后，加入對(duì)二甲氨基苯甲醒溶液1 .OmL,再加入無醒乙醇 3. OmL,用力振搖后，于60 °C水浴中（15min后蓋塞)放置化，取出立即用冷水冷卻至室溫，在 波長(zhǎng)525nm處，用1cm比色皿，W試劑空白為參比液，測(cè)其吸光值。
[0042] W標(biāo)準(zhǔn)系列鹽酸氨基葡萄糖質(zhì)量為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的吸光值為縱坐標(biāo)，繪制工作曲 線，如圖2所示； 3)試樣的測(cè)定 準(zhǔn)確移取Π 液3. OmL置于比色管中，用水稀釋至5. OmL，加入乙酷丙酬溶液1.0血，搖勻， 沸水浴中（Imin后蓋塞)放置25min，取出，用冷水迅速冷卻后，加入對(duì)二甲氨基苯甲醒溶液 1 .OmL,再加入無醒乙醇3. OmL,用力振搖后，于60 °C水浴中（15min后蓋塞)放置比，取出立即 用冷水冷卻至室溫，在波長(zhǎng)525皿處，用1cm比色皿，W試劑空白為參比液，測(cè)其吸光值，吸光 值讀數(shù)記為Ai;另取1只比色管，準(zhǔn)確移取Π 液3.OmL置于比色管中，用水稀釋至7. OmL,搖 勻，沸水浴中（Imin后蓋塞)放置25min，取出，用冷水迅速冷卻后，再加入無醒乙醇3.OmL,用 力振搖后，于60 °C水浴中（15min后蓋塞)放置化，取出立即用冷水冷卻至室溫，在波長(zhǎng)525皿 處，用1cm比色皿，W試劑空白為參比液，測(cè)其吸光值，吸光值讀數(shù)記為Ao;最終試樣溶液吸 光值A(chǔ)=Ai-A〇。根據(jù)得到的吸光值，在工作曲線上查得對(duì)應(yīng)的鹽酸氨基葡萄糖的質(zhì)量； 根據(jù)所得的吸光值，在工作曲線上查得對(duì)應(yīng)的鹽酸氨基葡萄糖的質(zhì)量。
[0043] 4)分析結(jié)果的表述 液體產(chǎn)品殼聚糖含量P W其質(zhì)量濃度(g/L)表示，按公式(2 )計(jì)算： 巧甲：
mi-由工作曲線查得的鹽酸氨基葡萄糖的質(zhì)量，單位為微克(yg); V -液體試樣的體積，單位為毫升(mL); Vi -透析后定容的體積，單位為毫升(mL)，25mL; V2 -水解中和后定容的體積，單位為毫升(mL)，50mL; VI -移取I液水解的體積，單位為毫升(mL); V2 -移取Π 液至比色管中的體積，單位為毫升(血）； 0.8309-鹽酸氨基葡萄糖折算為氨基葡萄糖的系數(shù)。
[0044] 所測(cè)得殼聚糖含量如表3所示。
[0045] 表 3
所述步驟1)中透析袋的規(guī)格為MWC0:100-500，透析時(shí)間為4她。
[0046] 所述步驟2)中鹽酸氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為3化g/mL。
[0047] 所述步驟2)中乙酷丙酬溶液配制步驟為：取乙酷丙酬3.5mL，加入碳酸鋼溶液至 50mL，置4 °C冰箱中備用，應(yīng)于使用前一日配制。碳酸鋼溶液濃度為1. Omo 1/L。
[004引所述步驟2)中對(duì)二甲氨基苯甲醒溶液配制步驟為：稱取對(duì)二甲氨基苯甲醒0.8g， 加無醒乙醇15. OmL及濃鹽酸15. OmL，搖勻，現(xiàn)配現(xiàn)用。
[0049] 所述步驟4)中，分析結(jié)果的表述使用液體產(chǎn)品表述方式，W其質(zhì)量濃度(g/L)表 /J、- 〇
[0050] W上所述的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案和有益效果進(jìn)行了詳細(xì)說明，應(yīng)理解的是 W上所述僅為本發(fā)明的具體實(shí)施例，并不用于限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的原則范圍內(nèi)所做 的任何修改、補(bǔ)充或等同替換等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種水溶肥料中殼聚糖含量的檢測(cè)方法，其特征在于，包括如下檢測(cè)步驟： 1) 試樣溶液的制備:準(zhǔn)確稱取固體或液體試樣，固體試樣配制成溶液備用，液體試樣直 接備用;準(zhǔn)確移取適量該溶液至透析袋中進(jìn)行透析，透析結(jié)束后定容為I液;準(zhǔn)確移取適量I 液至具塞試管中，加酸水解，水解后中和，定容為Π 液； 2) 工作曲線的繪制：以鹽酸氨基葡萄糖溶液為標(biāo)準(zhǔn)溶液，與乙酰丙酮和對(duì)二甲氨基苯 甲醛進(jìn)行顯色反應(yīng)生成紅色化合物，在波長(zhǎng)525nm下測(cè)定吸光值，以標(biāo)準(zhǔn)系列鹽酸氨基葡萄 糖質(zhì)量為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的吸光值為縱坐標(biāo)，繪制工作曲線； 3) 試樣的測(cè)定:若試樣溶液Π 液為無色透明液體，則準(zhǔn)確移取Π 液，與乙酰丙酮和對(duì)二 甲氨基苯甲醛進(jìn)行顯色反應(yīng)生成紅色化合物，在波長(zhǎng)525nm下測(cè)定吸光值，根據(jù)測(cè)得的吸光 值，在工作曲線上查得對(duì)應(yīng)的鹽酸氨基葡萄糖的質(zhì)量;若試樣溶液Π 液為有色或不透明液 體，則準(zhǔn)確移取Π 液，與乙酰丙酮和對(duì)二甲氨基苯甲醛進(jìn)行顯色反應(yīng)生成紅色化合物，在波 長(zhǎng)525nm下測(cè)定吸光值，吸光值讀數(shù)記為A1;另取1只比色管，加入與顯色時(shí)相同體積的Π 液，加入無醛乙醇，將溶液用水稀釋定容，搖勻，在波長(zhǎng)525nm下測(cè)定吸光值，吸光值讀數(shù)記 為A〇;最終所得試樣吸光值A(chǔ)iAi-Ao;根據(jù)得到的吸光值，在工作曲線上查得對(duì)應(yīng)的鹽酸氨基 葡萄糖的質(zhì)量； 4 )分析結(jié)果的表述 固體產(chǎn)品殼聚糖含量w以其質(zhì)量分?jǐn)?shù)百分比表示，按公式(1)計(jì)算：液體產(chǎn)品殼聚糖含量P以其質(zhì)量濃度表示，單位為g/L，按公式(2)計(jì)算：上述公式中，πη代表由工作曲線查得的鹽酸氨基葡萄糖的質(zhì)量，單位為微克;m代表固體 試樣的質(zhì)量，單位為克;V代表液體試樣的體積，單位為毫升;VQ代表固體試樣溶解后的定容 體積，單位為毫升;Vi代表透析后定容的體積，單位為毫升;％代表水解中和后定容的體積， 單位為毫升;^代表移取I液水解的體積，單位為毫升;v 2代表移取Π 液至比色管中的體積， 單位為毫升;〇. 8309代表鹽酸氨基葡萄糖折算為氨基葡萄糖的系數(shù)。2. 按照權(quán)利要求1所述的水溶肥料中殼聚糖含量的檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟1) 中，試樣溶液水解前需進(jìn)行透析，將干擾因素 NH4+、N03'尿素、Cu2+、Fe2+、B03 3-以及小分子有 機(jī)物排除，透析袋規(guī)格為MWC0:100-500、透析時(shí)間為24h~72h。3. 按照權(quán)利要求1所述的水溶肥料中殼聚糖含量的檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟1) 中，酸水解所用酸溶液為硫酸溶液，水解時(shí)硫酸溶液濃度為7_9mol/L，水解溫度為100°0 105°C，水解時(shí)間為6h~8h。4. 按照權(quán)利要求1所述的水溶肥料中殼聚糖含量的檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟1) 中，I液酸水解后需要進(jìn)行中和反應(yīng)，所用中和試劑為氫氧化鈉溶液，濃度為200g/L~400g/ L〇5. 按照權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的水溶肥料中殼聚糖含量的檢測(cè)方法，其特征在于，所 述步驟2)中，以鹽酸氨基葡萄糖溶液為標(biāo)準(zhǔn)溶液，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為10~SOyg/mL。
【文檔編號(hào)】G01N1/28GK105823746SQ201610342059
【公開日】2016年8月3日
【申請(qǐng)日】2016年5月23日
【發(fā)明人】單俊偉, 王海華, 郝曉晨, 王鵬
【申請(qǐng)人】青島海大生物集團(tuán)有限公司