一種煙草及煙草制品中多種氯代茴香醚的檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種煙草及煙草制品中多種氯代茴香醚的檢測(cè)方法，采用溶劑萃取、固相萃取凈化，再采用多模式進(jìn)樣口與毛細(xì)色譜柱預(yù)柱配合進(jìn)樣，氣相色譜?三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定，從而對(duì)煙草及煙草制品中多種氯代茴香醚進(jìn)行定性定量檢測(cè)。本發(fā)明提供的一種煙草及煙草制品中多種氯代茴香醚的檢測(cè)方法，與現(xiàn)有技術(shù)相比，具備定性準(zhǔn)確、抗干擾能力強(qiáng)及靈敏度高等特點(diǎn)，能夠進(jìn)一步降低色譜系統(tǒng)污染，減少分析結(jié)果干擾，具有較好的準(zhǔn)確性和精密度。
【專利說(shuō)明】
-種煙草及煙草制品中多種氯代茵香離的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于卷煙質(zhì)量安全領(lǐng)域，設(shè)及一種煙草及煙草制品中多種氯代茵香酸的檢 測(cè)方法，具體設(shè)及一種使用氣相色譜-Ξ重四極桿質(zhì)譜(GC-MS/MS)檢測(cè)煙草及煙草制品中 多種氯代茵香酸的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 煙草及煙草制品霉變會(huì)對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量產(chǎn)生重大影響，建立準(zhǔn)確、靈敏、易實(shí)現(xiàn)的化學(xué) 分析方法用于卷煙中霉變的檢測(cè)非常必要。在不當(dāng)?shù)膬?chǔ)存環(huán)境中，煙草及煙草制品會(huì)發(fā)生 霉變，由于霉菌(如曲霉、毛霉、根霉、青霉)作用，會(huì)形成具有強(qiáng)烈霉味的物質(zhì)一一氯代茵香 酸。研究表明，在各種氯代茵香酸的同分異構(gòu)體中，對(duì)霉味起決定性作用的主要有2,4,6-Ξ 氯代茵香酸(2,4,6-TCA)、2,3,4,6-四氯代茵香酸(TeCA)等。
[0003] 國(guó)內(nèi)外對(duì)氯代茵香酸的分析研究主要集中在對(duì)葡萄酒和軟木塞中2,4,6-Ξ氯代 茵香酸(TCA)的檢測(cè)，對(duì)于煙草及煙草制品中多種氯代茵香酸的檢測(cè)鮮有報(bào)道。目前，利用 頂空固相微萃取-氣相色譜法化S-SPME-GC-ECD)進(jìn)行檢測(cè)的研究較多，但是運(yùn)種方法的缺 點(diǎn)在于，雖然電子捕獲檢測(cè)器化CD)靈敏度較高，但無(wú)法準(zhǔn)確定性，受樣品基質(zhì)影響較大，氯 代茵香酸色譜峰和復(fù)雜基質(zhì)物質(zhì)峰無(wú)法達(dá)到有效的分離，檢測(cè)結(jié)果容易假陽(yáng)性。同時(shí)采用 頂空固相微萃取化S-SPME)前處理手段靈敏度受到一定限制。除此之外，還有采用溶劑萃取 凈化后，利用氣相色譜質(zhì)譜法(GC-MS)對(duì)氯代茵香酸類物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析檢測(cè)，雖然 質(zhì)譜（MS)的定性能力較強(qiáng)，可W避免假陽(yáng)性的干擾，但由于氯代茵香酸的闊值要低于 0.1 ng/g，質(zhì)譜(MS)的靈敏度遠(yuǎn)遠(yuǎn)達(dá)不到要求。
[0004] 綜上所述，對(duì)于氯代茵香酸的檢測(cè)，難點(diǎn)主要有二點(diǎn)：一、基質(zhì)對(duì)氯代茵香酸的檢 測(cè)干擾較大;二、檢測(cè)需要的靈敏度較高。而煙草基質(zhì)的化學(xué)組分與葡萄酒和軟木塞基質(zhì)相 比更為復(fù)雜，W致目前尚無(wú)針對(duì)煙草及煙草制品中氯代茵香酸的成熟檢測(cè)方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 鑒于W上所述現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，本發(fā)明的目的在于提供一種煙草及煙草制品中多 種氯代茵香酸的檢測(cè)方法，該檢測(cè)方法準(zhǔn)確、可靠、靈敏度較高，能夠?qū)崿F(xiàn)煙草及煙草制品 中多種氯代茵香酸的準(zhǔn)確定量及定性測(cè)定。
[0006] 為實(shí)現(xiàn)上述目的及其他相關(guān)目的，本發(fā)明提供一種煙草及煙草制品中多種氯代茵 香酸的檢測(cè)方法，采用溶劑萃取、固相萃取凈化，再采用多模式進(jìn)樣口與毛細(xì)色譜柱預(yù)柱配 合進(jìn)樣，氣相色譜-Ξ重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-QQQ-MS/MS)測(cè)定，從而對(duì)煙草及煙草制品中 多種氯代茵香酸進(jìn)行定性定量檢測(cè)。
[0007] 較佳地，所述煙草選自烤煙、白肋煙、驚曬煙、香料煙等煙草原料中的一種。
[000引優(yōu)選地，所述煙草原料選自煙葉或煙絲的一種或兩種混合。
[0009]較佳地，所述煙草制品為煙葉原料制成的卷煙成品。具體來(lái)說(shuō)，所述煙草制品為中 華牌卷煙、雙喜牌卷煙等。
[0010] 較佳地，所述煙草及煙草制品中多種氯代茵香酸共4種，包括有2，4-二氯代茵香酸 (2,4-0〔4)、2,6-二氯代茵香酸（2,6-0〔4)、2,4,6-^氯代茵香酸（2,4,6-批4)、2,3,4,6-四 氯代茵香酸(TeCA)。
[0011] 較佳地，所述多模式進(jìn)樣口為安捷倫(Agilent)公司制造的氣相色譜儀(GC)上的 MMI進(jìn)樣口。所述多模式進(jìn)樣口能夠W-個(gè)進(jìn)樣口實(shí)現(xiàn)通常需要兩個(gè)或更多進(jìn)樣口的功能， 可采用大體積進(jìn)樣功能提高分析的靈敏度，同時(shí)仍然能夠?qū)崿F(xiàn)通常采用分流/不分流進(jìn)樣 口進(jìn)行的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)樣功能。
[0012] 較佳地，所述毛細(xì)色譜柱預(yù)柱為去活性無(wú)固定相石英毛細(xì)管色譜柱。
[0013] 較佳地，所述一種煙草及煙草制品中多種氯代茵香酸的檢測(cè)方法，具體包括W下 步驟：
[0014] 1)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制:配制內(nèi)標(biāo)溶液和混合標(biāo)準(zhǔn)溶液；
[0015] A)分別稱取2,4-DCA、2,6-DCA、2,4,6-TCA、TeCA的標(biāo)準(zhǔn)品，加入正己燒定容，配成 混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液；
[0016] B)稱取気代2,4,6-Ξ氯茵香酸(2,4,6-TCA，d5)，加入正己燒定容，配成內(nèi)標(biāo)溶液；
[0017] 優(yōu)選地，所述內(nèi)標(biāo)溶液中気代2,4,6-Ξ氯茵香酸的濃度為l-l(K)ng/mL。更優(yōu)選地， 所述內(nèi)標(biāo)溶液中気代2,4,6-Ξ氯茵香酸的濃度為lOng/mL。
[0018] 所述気代2,4,6-Ξ氯茵香酸(2,4,6-批4，(15)為商品化試劑，其化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，適 于作為內(nèi)標(biāo)。
[0019] C)分別移取不同體積的步驟A中混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，再分別加入一定體積的步驟Β 中內(nèi)標(biāo)溶液，用正己燒定容配制為一系列不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。
[0020] 優(yōu)選地，所述混合標(biāo)準(zhǔn)溶液中多種氯代茵香酸的含量分別為0.05-100ng。
[0021] 2)樣品前處理:稱取煙草或煙草制品樣品，進(jìn)行溶劑萃取后，離屯、，取上清液，進(jìn)行 固
[0022] 相萃取凈化，收集凈化后的溶液進(jìn)行濃縮后，待測(cè)；
[0023] 優(yōu)選地，所述煙草或煙草制品樣品需要研磨成粉末。所述煙草或煙草制品樣品的 用量為l-2g。
[0024] 優(yōu)選地，所述溶劑萃取是將煙草或煙草制品樣品，加入水振蕩混勻后，再加入正己 燒和步驟1)所述內(nèi)標(biāo)溶液，進(jìn)行滿旋震蕩。
[0025] 更優(yōu)選地，所述煙草或煙草制品樣品的質(zhì)量與水加入的體積之比為l-2:5-10(g/ ml)。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述煙草或煙草制品樣品的質(zhì)量與水加入的體積之比為2:10(g/ml)。、
[0026] 更優(yōu)選地，所述加入水振蕩混勻?yàn)槌Ｒ?guī)手動(dòng)振蕩混勻方式。
[0027] 更優(yōu)選地，所述煙草或煙草制品樣品的質(zhì)量與正己燒、內(nèi)標(biāo)溶液加入的體積之比 為1-2:5-10:0.05-0.1 (g/ml/ml)。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述煙草或煙草制品樣品的質(zhì)量與正己 燒、內(nèi)標(biāo)溶液加入的體積之比為2:10:0.1 (g/ml/ml)。
[002引更優(yōu)選地，所述滿旋震蕩的條件為：震蕩頻率：2000-3000r/min;震蕩時(shí)間：5- 15min。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述滿旋震蕩的條件為:震蕩頻率:25(K)r/min;震蕩時(shí)間：10min。
[00巧]優(yōu)選地，所述離屯、條件為：離屯、頻率：1000-6000r/min;離屯、時(shí)間：2-6min。更優(yōu)選 地，所述罔屯、條件為：罔屯、頻率:2000-5000;r/min;罔屯、時(shí)間：3-5min。
[0030]優(yōu)選地，所述固相萃取凈化是將上清液過(guò)固相萃取柱，再用有機(jī)溶劑過(guò)固相萃取 柱進(jìn)行洗脫，收集過(guò)固相萃取柱后的溶液。
[0031] 更優(yōu)選地，所述固相萃取柱要使用正己燒進(jìn)行活化。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述正己燒用 量為5mL。
[0032] 更優(yōu)選地，所述有機(jī)溶劑為正己燒與乙酸乙醋的混合溶液。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述正 己燒與乙酸乙醋的體積之比為100: l(v/v)。
[0033] 優(yōu)選地，所述濃縮為旋蒸濃縮。更優(yōu)選地，所述旋蒸濃縮條件為:頻率:200-400r/ min;時(shí)間：5-15min;真空度：195-241kPa。
[0034] 優(yōu)選地，所述濃縮后的體積為0.1-lmL。更優(yōu)選地，所述濃縮后的體積為0.5mL。
[0035] 3)樣品定性檢測(cè):分別將步驟1)配制的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液和步驟2)中待測(cè)液采用多模 式進(jìn)樣口與毛細(xì)色譜柱預(yù)柱配合進(jìn)樣，再進(jìn)行GC-QQQ-MS/MS檢測(cè)，根據(jù)內(nèi)標(biāo)法比較保留時(shí) 間進(jìn)行定性，確定待測(cè)液中多種氯代茵香酸成分；
[0036] 所述內(nèi)標(biāo)法(標(biāo)準(zhǔn)加入法)定性的原理為:通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)樣品中各組分和內(nèi)標(biāo)的保留時(shí) 間和實(shí)際樣品中各組分和內(nèi)標(biāo)的保留時(shí)間對(duì)比分析是否一致，從而確認(rèn)實(shí)際樣品中各組分 成分。
[0037] 4)樣品定量檢測(cè):分別將步驟1)配制的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液和步驟2)中待測(cè)液采用多模 式進(jìn)樣口與毛細(xì)色譜柱預(yù)柱配合進(jìn)樣，再進(jìn)行GC-QQQ-MS/MS檢測(cè)，采用內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn) 行定量，獲得待測(cè)液中多種氯代茵香酸成分的含量；
[0038] 優(yōu)選地，所述內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法包括W下步驟：
[0039] 所述內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法是指在標(biāo)準(zhǔn)溶液中加入內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，進(jìn)行儀器測(cè)定，獲得標(biāo)準(zhǔn) 工作曲線，進(jìn)而測(cè)定含有內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的待測(cè)液中樣品含量的方法。
[0040] 1、將步驟1)的C中一系列不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液分別進(jìn)行GC-QQQ-MS/MS檢測(cè)， 分別獲得4種氯代茵香酸成分/內(nèi)標(biāo)物的二級(jí)選擇離子峰面積比與4種氯代茵香酸成分/相 應(yīng)內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量濃度比的線性關(guān)系，繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，分別計(jì)算得到4種氯代茵香 酸成分標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的回歸方程。
[0041] 進(jìn)一步的，所述標(biāo)準(zhǔn)曲線中，W4種氯代茵香酸成分與相應(yīng)內(nèi)標(biāo)物的二級(jí)選擇離子 峰面積比為縱坐標(biāo)(Y軸），其4種氯代茵香酸成分與相應(yīng)內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量濃度比為橫坐標(biāo)(X 軸)。
[0042] ?、將步驟2)中待測(cè)液，進(jìn)行GC-QQQ-MS/MS檢測(cè)，將獲得的待測(cè)液中4種氯代茵香 酸成分/相應(yīng)內(nèi)標(biāo)物的二級(jí)選擇離子峰面積比，代入步驟i中相應(yīng)的4種氯代茵香酸成分標(biāo) 準(zhǔn)工作曲線的回歸方程，并根據(jù)加入相應(yīng)內(nèi)標(biāo)物的已知質(zhì)量濃度，計(jì)算得到待測(cè)液中4種氯 代茵香酸成分的質(zhì)量。
[0043] 優(yōu)選地，所述步驟3)或4)中多模式進(jìn)樣口與毛細(xì)色譜柱預(yù)柱配合進(jìn)樣條件為：
[0044] 進(jìn)樣口 ：多模式進(jìn)樣口（匪I進(jìn)樣口）；色譜進(jìn)樣口溫度:初始70-80°C，保持0. Οδ? ?. 2min ， 500-700°C /min 速率升至 180-200°C ; 進(jìn)樣量: 20-30μ1; 進(jìn)樣方式:冷不分流進(jìn)樣; 載 氣：高純氮?dú)猓d氣純度> 99.999% ;載氣流速：初始流速1. 1-1 .3mL/min，保持0.05- 0.15min，再W90-1 lOmL/min速率升至 1.9-2. ImL/min，保持3.8-3.9min，最后 W90-1 lOmL/ min速率降至1.1-1.3血/min;色譜柱預(yù)柱:去活性無(wú)固定相石英毛細(xì)管色譜柱(5mX0.32mm X0.2如m)。
[0045] 更優(yōu)選地，所述多模式進(jìn)樣口與毛細(xì)色譜柱預(yù)柱配合進(jìn)樣條件為：
[0046] 進(jìn)樣口 ：多模式進(jìn)樣口（MMI進(jìn)樣口）；色譜進(jìn)樣口溫度:初始75°C，保持0.1 min，600 Γ/min速率升至19(TC ;進(jìn)樣量:2扣1;進(jìn)樣方式:冷不分流進(jìn)樣;載氣：高純氮?dú)?，載氣純度 > 99.999 % ;載氣流速：初始流速1.2mL/min，保持0 . Imin，再W lOOmL/min速率升至2mL/ min，保持3.892min，最后W lOOmL/min速率降至1.2血/min;色譜柱預(yù)柱:去活性無(wú)固定相石 英毛細(xì)管色譜柱(5m X 0.32mm X 0.25皿）。
[0047] 優(yōu)選地，所述步驟3)或4)中GC-QQQ-MS/MS檢測(cè)條件為：
[004引氣相色譜條件為:色譜柱1:DB-35MS UI石英毛細(xì)管色譜柱（10mX0.25mmΧ0.25μ m);色譜柱2:DB-35MS υ?石英毛細(xì)管色譜柱(20m X 0.25mm X 0.25皿）：升溫程序:初始溫度 60-80°(：保持3-5111111，^25-35°(：/111111的速率升至120-140°(：，再^4-6°(：/111111的速率升至 190-210°C，保持0.5-1.5min;反吹系統(tǒng)條件為：在升溫程序后開始進(jìn)行反吹；反吹運(yùn)行時(shí) 間：7-9min;反吹運(yùn)行壓力：19-21psi ;反吹運(yùn)行溫度:290-310°C。
[0049] 所述反吹系統(tǒng)在升溫程序完成后立即開始，與升溫程序保持連續(xù)。
[0050] 質(zhì)譜條件為:傳輸線溫度:220-240°C ;電離方式:電子轟擊電離巧I);離子源溫度： 220-240°C ;四級(jí)桿溫度：140-160°C ;Q2碰撞氣：高純氮?dú)?N2);溶劑延遲時(shí)間：6-8min;掃描 方式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)。
[0051 ] 更優(yōu)選地，所述GC-QQQ-MS/MS檢測(cè)條件為：
[0化2] 氣相色譜條件為:色譜柱1:DB-35MS UI石英毛細(xì)管色譜柱（10mX0.25mmΧ0.25μ m);色譜柱2:DB-35MS UI石英毛細(xì)管色譜柱(20m X 0.25mm X 0.25皿）：升溫程序:初始溫度 70°C保持4min，W30°C/min的速率升至130°C，再W5°C/min的速率升至200°C，保持Imin;反 吹系統(tǒng)條件為:在升溫程序后開始進(jìn)行反吹;反吹運(yùn)行時(shí)間：8min;反吹運(yùn)行壓力：2化si ;反 吹運(yùn)行溫度:300°C。
[0053] 質(zhì)譜條件為:傳輸線溫度:230°C;電離方式：電子轟擊電離化I);離子源溫度:230 °C ;四級(jí)桿溫度：150°C ;Q2碰撞氣：高純氮?dú)?N2);溶劑延遲時(shí)間：7min;掃描方式:多反應(yīng)監(jiān) 測(cè)(MRM)。
[0054] 5)實(shí)際樣品含量的測(cè)定:將步驟4)獲得的待測(cè)液中多種氯代茵香酸成分的含量分 別代入計(jì)算公式，計(jì)算得到實(shí)際煙草或煙草制品樣品中多種氯代茵香酸成分的含量。
[0055] 優(yōu)選地，所述計(jì)算公式為X = m/[m0X(l-w)]，其中，X為實(shí)際煙草或煙草制品樣品 中各組分的含量，單位為ng/g;m為通過(guò)內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法得到的待測(cè)液中多種氯代茵香酸成 分的含量，單位為ng;m〇為稱取的實(shí)際煙草或煙草制品樣品的質(zhì)量，單位為g;w為樣品含水 率，單位為％。所述含水率通過(guò)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YC/T31-1996《煙草及煙草制品試樣的制備和水分 測(cè)定烘箱法》測(cè)定獲得。
[0056] 如上所述，本發(fā)明的一種煙草及煙草制品中多種氯代茵香酸的檢測(cè)方法，通過(guò)將 煙草或煙草制品樣品進(jìn)行溶劑萃取、離屯、、固相萃取凈化、濃縮后，采用多模式進(jìn)樣口（MMI 進(jìn)樣口）與經(jīng)去活性無(wú)固定相毛細(xì)色譜柱預(yù)柱配合的的大體積進(jìn)樣方式，再采用氣相色譜- Ξ重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用法對(duì)煙草或煙草制品樣品中的4種氯代茵香酸進(jìn)行定性定量檢測(cè)。
[0057] 本方法與現(xiàn)有技術(shù)相比，通過(guò)大體積進(jìn)樣提高檢測(cè)靈敏度，同時(shí)，由于采用的Ξ重 四級(jí)桿質(zhì)譜(MS/MS)具備定性準(zhǔn)確、抗干擾能力強(qiáng)及靈敏度高等特點(diǎn)，特別適用于分析背景 干擾嚴(yán)重、定性困難、被測(cè)化合物含量低的樣品。此外，引入氣相色譜反吹系統(tǒng)，在目標(biāo)組分 準(zhǔn)確分離檢測(cè)后，控制載氣流向變化，將保留較強(qiáng)的高沸點(diǎn)雜質(zhì)吹出前段色譜柱外，進(jìn)一步 降低色譜系統(tǒng)污染，減少分析結(jié)果干擾。本方法的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的相關(guān)系數(shù)r = 0.9988~ 0.9998，方法檢出限化0D)為0.0029-0.006 Ing/g，定量檢出限化0Q)為0.010-0.020ng/g，具 有較高的靈敏度。方法的回收率為95~111 %，平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD% )小于6%，具有較 好的準(zhǔn)確性和精密度。
【附圖說(shuō)明】
[005引圖1顯示為含有內(nèi)標(biāo)溶液的4種氯代茵香酸的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液在GC-MS/MS上的總離 子色譜圖。
[0059] 圖2顯示為煙末中多種氯代茵香酸的GC-MS/MS檢測(cè)MRM圖2a、2b、2c、2d，其中，2a為 2，4-二氯代茵香酸(2，4-DCA)、2，6-二氯代茵香酸(2，6-DCA)的MRM圖；2b為2，4，6-Ξ氯代茵 香酸(2，4，6-TCA)的MRM圖；2c為2，3，4，6-四氯代茵香酸(TeCA)的MRM圖；2d為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)気代 2，4，6-Ξ 氯茵香酸(2，4，6-TCA，d5)的 MRM 圖。
【具體實(shí)施方式】
[0060] 下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明，應(yīng)理解，運(yùn)些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0061] W下通過(guò)特定的具體實(shí)例說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施方式，本領(lǐng)域技術(shù)人員可由本說(shuō)明書 所掲露的內(nèi)容輕易地了解本發(fā)明的其他優(yōu)點(diǎn)與功效。本發(fā)明還可W通過(guò)另外不同的具體實(shí) 施方式加 W實(shí)施或應(yīng)用，本說(shuō)明書中的各項(xiàng)細(xì)節(jié)也可W基于不同觀點(diǎn)與應(yīng)用，在沒(méi)有背離 本發(fā)明的精神下進(jìn)行各種修飾或改變。
[0062] 須知，下列實(shí)施例中未具體注明的工藝設(shè)備或裝置均采用本領(lǐng)域內(nèi)的常規(guī)設(shè)備或 裝置;所有壓力值和范圍都是指相對(duì)壓力。
[0063] 此外應(yīng)理解，本發(fā)明中提到的一個(gè)或多個(gè)方法步驟并不排斥在所述組合步驟前后 還可W存在其他方法步驟或在運(yùn)些明確提到的步驟之間還可W插入其他方法步驟，除非另 有說(shuō)明；還應(yīng)理解，本發(fā)明中提到的一個(gè)或多個(gè)設(shè)備/裝置之間的組合連接關(guān)系并不排斥在 所述組合設(shè)備/裝置前后還可W存在其他設(shè)備/裝置或在運(yùn)些明確提到的兩個(gè)設(shè)備/裝置之 間還可W插入其他設(shè)備/裝置，除非另有說(shuō)明。而且，除非另有說(shuō)明，各方法步驟的編號(hào)僅為 鑒別各方法步驟的便利工具，而非為限制各方法步驟的排列次序或限定本發(fā)明可實(shí)施的范 圍，其相對(duì)關(guān)系的改變或調(diào)整，在無(wú)實(shí)質(zhì)變更技術(shù)內(nèi)容的情況下，當(dāng)亦視為本發(fā)明可實(shí)施的 范疇。
[0064] W下實(shí)施例使用的試劑與儀器如下：
[0065] 1、試劑
[0066] 煙草及煙草制品（選自上海煙草集團(tuán)）；2，4-二氯代茵香酸、2，6-二氯代茵香酸、2， 4，6-S氯代茵香酸、2，3，4，6-四氯代茵香酸(純品，純度>99.99%，德國(guó)DR公司）；気代2，4， 6-Ξ氯茵香酸（純品，純度> 99.99 %，德國(guó)DR公司）；正己燒、乙酸乙醋（色譜純，了抓IA公 司）；水(純水機(jī)自制純水）。
[0067] 2、儀器
[006引7890A型氣相色譜-7000B型Ξ重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國(guó)Agilent科技有限公司）； 滿旋震蕩儀(CAT N0:945066、SN:140919007，Ta化oys公司）；RJ-LDレ50G型離屯、機(jī)(無(wú)錫市 瑞江分析儀器有限公司）;Mega BE-FI型固相萃取柱(美國(guó)Agilent科技有限公司）；Q-101型 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(腳CHI公司）；色譜柱:DB-35MS(UI)石英毛細(xì)管色譜柱(美國(guó)Agilent科技有限 公司）；色譜柱:去活性無(wú)固定相石英毛細(xì)管色譜柱預(yù)柱(美國(guó)Agilent科技有限公司）。
[0069] 實(shí)施例1
[0070] 1、標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制
[0071 ]分別稱取2，4-二氯代茵香酸(2，4-DCA)、2，6-二氯代茵香酸(2，6-DCA)、2，4，6-Ξ 氯代茵香酸(2，4，6-TCA)、2，3，4,6-四氯代茵香酸(TeCA)的標(biāo)準(zhǔn)品，加入正己燒定容，配成 混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。
[0072] 同時(shí)，稱取気代2,4,6-Ξ氯茵香酸(2,4,6-TCA，d5)，加入正己燒定容，配成內(nèi)標(biāo)溶 液，內(nèi)標(biāo)溶液中気代2，4，6-Ξ氯茵香酸的濃度為1 -10化g/mL。
[0073] 然后，分別移取不同體積的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，再分別加入一定體積的內(nèi)標(biāo)溶液， 用正己燒定容配制為一系列不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。混合標(biāo)準(zhǔn)溶液中多種氯代茵香酸的 含量分別為0.05-100ng。
[0074] 2、樣品前處理
[0075] 準(zhǔn)確稱取研磨成粉末的煙草或煙草制品樣品l-2g，加入5-lOml純水振蕩混勻后， 再加入5-lOml正己燒和0.05-0.1ml內(nèi)標(biāo)溶液，進(jìn)行滿旋震蕩后，離屯、。滿旋震蕩的條件為： 震蕩頻率:2000-3000r/min;震蕩時(shí)間：5-15min。離屯、條件為:離屯、頻率：1000-6000r/min; 離屯、時(shí)間：2-6min。然后，取上清液過(guò)固相萃取柱，再用正己燒與乙酸乙醋(v/v為100:1)的 混合溶液過(guò)固相萃取柱進(jìn)行洗脫，收集過(guò)固相萃取柱后的溶液。收集凈化后的溶液進(jìn)行旋 蒸濃縮后，待測(cè)。濃縮后的體積為0.1-lmL。固相萃取柱使用前需要使用正己燒進(jìn)行活化，正 己燒用量為5mL。
[0076] 3、樣品含量計(jì)算
[0077] 分別將步驟1中配制的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液和步驟2中待測(cè)液采用多模式進(jìn)樣口與毛細(xì) 色譜柱預(yù)柱配合進(jìn)樣，再進(jìn)行GC-QQQ-MS/MS檢測(cè)，根據(jù)內(nèi)標(biāo)法比較保留時(shí)間進(jìn)行定性，確定 待測(cè)液中4種氯代茵香酸成分，同時(shí)，采用內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行定量，獲得待測(cè)液中4種氯代 茵香酸成分的含量。
[0078] 具體來(lái)說(shuō)，內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法是先將上述步驟1中一系列不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液 分別進(jìn)行GC-QQQ-MS/MS檢測(cè)，別獲得4種氯代茵香酸成分/相應(yīng)內(nèi)標(biāo)物的二級(jí)選擇離子峰面 積比與4種氯代茵香酸成分/相應(yīng)內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量濃度比的線性關(guān)系，繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)工作曲 線，W4種氯代茵香酸成分與相應(yīng)內(nèi)標(biāo)物的二級(jí)選擇離子峰面積比為縱坐標(biāo)(Y軸），其4種氯 代茵香酸成分與相應(yīng)內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量濃度比為橫坐標(biāo)(X軸），分別計(jì)算得到4種氯代茵香酸成 分標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的回歸方程。
[0079] 再將上述步驟2中待測(cè)液進(jìn)行GC-QQQ-MS/MS檢測(cè)，將獲得的待測(cè)液中4種氯代茵香 酸成分/相應(yīng)內(nèi)標(biāo)物的二級(jí)選擇離子峰面積比，代入相應(yīng)的4種氯代茵香酸成分標(biāo)準(zhǔn)工作曲 線的回歸方程，并根據(jù)加入相應(yīng)內(nèi)標(biāo)物的已知質(zhì)量濃度，計(jì)算得到待測(cè)液中4種氯代茵香酸 成分的質(zhì)量。
[0080] 其中，多模式進(jìn)樣口與毛細(xì)色譜柱預(yù)柱配合進(jìn)樣條件為：進(jìn)樣口：多模式進(jìn)樣口 (MMI進(jìn)樣口）；色譜進(jìn)樣口溫度:初始70-80 °C，保持0.05-0.2min，500-700 °C/min速率升至 180-20(TC;進(jìn)樣量：20-30μ1;進(jìn)樣方式：冷不分流進(jìn)樣；載氣：高純氮?dú)?，載氣純度> 99.999% ;載氣流速:初始流速 1.1-1.3mL/min，保持ο. 05-0.15min，再W90-110血/min速率 升至 1.9-2. ImL/min，保持3.8-3.9min，最后 W90-110血/min速率降至 1.1-1.3血/min;色譜 柱預(yù)柱:去活性無(wú)固定相石英毛細(xì)管色譜柱(5m X 0.32mm X 0.25皿）。
[0081 ] GC-QQQ-MS/MS 檢測(cè)條件為：
[0082] 氣相色譜條件為:色譜柱1:DB-35MS UI石英毛細(xì)管色譜柱（10mX0.25mmΧ0.25μ m);色譜柱2:DB-35MS υ?石英毛細(xì)管色譜柱(20m X 0.25mm X 0.25皿）：升溫程序:初始溫度 60-80°(：保持3-5111111，^25-35°(：/111111的速率升至120-140°(：，再^4-6°(：/111111的速率升至 190-210°C，保持0.5-1.5min;反吹系統(tǒng)條件為：在升溫程序后開始進(jìn)行反吹；反吹運(yùn)行時(shí) 間：7-9min;反吹運(yùn)行壓力：19-21psi ;反吹運(yùn)行溫度:290-310°C。
[0083] 質(zhì)譜條件為:傳輸線溫度:220-240°C ;電離方式:電子轟擊電離巧I);離子源溫度： 220-240°C ;四級(jí)桿溫度：140-160°C ;Q2碰撞氣：高純氮?dú)?N2);溶劑延遲時(shí)間：6-8min;掃描 方式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)。另外，目標(biāo)物及內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)譜分析參數(shù)見表1。
[0084] 表1目標(biāo)物及內(nèi)標(biāo)物的MRM參數(shù)
[0085]
[0086] 然后，將獲得的待測(cè)液中多種氯代茵香酸成分的含量分別代入計(jì)算公式，計(jì)算得 到實(shí)際煙草或煙草制品樣品中多種氯代茵香酸成分的含量。所述計(jì)算公式為X = m/[m0X (1-W)]，其中，X為實(shí)際煙草或煙草制品樣品中各組分的含量，單位為ng/g;m為通過(guò)內(nèi)標(biāo)標(biāo) 準(zhǔn)曲線法得到的待測(cè)液中多種氯代茵香酸成分的含量，單位為ng;m〇為稱取的實(shí)際煙草或 煙草制品樣品的質(zhì)量，單位為g;w為樣品含水率，單位為％。
[0087] 實(shí)施例2
[0088] 1、標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制
[0089] 分別稱取2，4-二氯代茵香酸(2，4-DCA)、2，6-二氯代茵香酸(2，6-DCA)、2，4，6-Ξ 氯代茵香酸(2，4，6-TCA)、2，3，4,6-四氯代茵香酸(TeCA)的標(biāo)準(zhǔn)品，加入正己燒定容，配成 混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。
[0090] 同時(shí)，稱取気代2，4，6-立氯茵香酸(2，4，6-TCA，d5)，加入正己燒定容，配成內(nèi)標(biāo)溶 液，內(nèi)標(biāo)溶液中気代2，4，6-Ξ氯茵香酸的濃度為lOng/mL。
[0091 ]然后，分別移取不同體積的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，再分別加入一定體積的內(nèi)標(biāo)溶液， 用正己燒定容配制為一系列不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。混合標(biāo)準(zhǔn)溶液一共8級(jí)，其中4種氯 代茵香酸的含量分別為：0.05ng、0.1ng、0.5ng、1.00ng、5. OOng、10.00ng、50.00ng、 lOO.OOng，即配即用。
[0092] 2、樣品前處理
[0093] 準(zhǔn)確稱取研磨成粉末的煙草或煙草制品樣品2g，置于50mL離屯、管中，加入10ml純 水振蕩混勻后，再加入10ml正己燒和0.1ml內(nèi)標(biāo)溶液，進(jìn)行滿旋震蕩后，離屯、。滿旋震蕩的條 件為:震蕩頻率：250化/min;震蕩時(shí)間：lOmin。離屯、條件為：離屯、頻率：200化/min;離屯、時(shí) 間：5min。然后，取上清液過(guò)固相萃取柱，再用6mL正己燒與乙酸乙醋(v/v為100:1)的混合溶 液過(guò)固相萃取柱進(jìn)行洗脫，收集過(guò)固相萃取柱后的溶液。收集凈化后的溶液進(jìn)行旋蒸濃縮 后，待測(cè)。濃縮后的體積為〇.5mL。固相萃取柱使用前需要使用正己燒進(jìn)行活化，正己燒用量 為 5mL。
[0094] 3、樣品含量計(jì)算
[0095] 分別將步驟1中配制的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液和步驟2中待測(cè)液采用多模式進(jìn)樣口與毛細(xì) 色譜柱預(yù)柱配合進(jìn)樣，再進(jìn)行GC-QQQ-MS/MS檢測(cè)，根據(jù)內(nèi)標(biāo)法比較保留時(shí)間進(jìn)行定性，確定 待測(cè)液中4種氯代茵香酸成分，同時(shí)，采用內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行定量，獲得待測(cè)液中4種氯代 茵香酸成分的含量，具體數(shù)據(jù)見圖1-2。
[0096] 具體來(lái)說(shuō)，內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法是先將上述步驟1中一系列不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液 分別進(jìn)行GC-QQQ-MS/MS檢測(cè)，別獲得4種氯代茵香酸成分/相應(yīng)內(nèi)標(biāo)物的二級(jí)選擇離子峰面 積比與4種氯代茵香酸成分/相應(yīng)內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量濃度比的線性關(guān)系，繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)工作曲 線，W4種氯代茵香酸成分與相應(yīng)內(nèi)標(biāo)物的二級(jí)選擇離子峰面積比為縱坐標(biāo)(Y軸），其4種氯 代茵香酸成分與相應(yīng)內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量濃度比為橫坐標(biāo)(X軸），分別計(jì)算得到4種氯代茵香酸成 分標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的回歸方程。再將上述步驟2中待測(cè)液進(jìn)行GC-QQQ-MS/MS檢測(cè)，將獲得的待 測(cè)液中4種氯代茵香酸成分/相應(yīng)內(nèi)標(biāo)物的二級(jí)選擇離子峰面積比，代入相應(yīng)的4種氯代茵 香酸成分標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的回歸方程，并根據(jù)加入相應(yīng)內(nèi)標(biāo)物的已知質(zhì)量濃度，計(jì)算得到待 測(cè)液中4種氯代茵香酸成分的質(zhì)量。
[0097] 其中，所述多模式進(jìn)樣口與毛細(xì)色譜柱預(yù)柱配合進(jìn)樣條件為:進(jìn)樣口 ：多模式進(jìn)樣 口（MMI進(jìn)樣口）；色譜進(jìn)樣口溫度:初始75°C，保持0.1 min，600°C/min速率升至190°C ;進(jìn)樣 量:2化1;進(jìn)樣方式:冷不分流進(jìn)樣;載氣：高純氮?dú)猓d氣純度^ 99.999 % ;載氣流速:初始 流速 1.2mL/min，保持0 . Imin，再 W lOOmL/min速率升至2mL/min，保持3.892min，最后 W lOOmL/min速率降至1.2mL/min;色譜柱預(yù)柱：去活性無(wú)固定相石英毛細(xì)管色譜柱（5mX 0.32mmX0.25ym)。
[009引 GC-QQQ-MS/MS檢測(cè)條件為：
[0099] 氣相色譜條件為:色譜柱1:DB-35MS UI石英毛細(xì)管色譜柱（10mX0.25mmΧ0.25μ m);色譜柱2:DB-35MS υ?石英毛細(xì)管色譜柱(20m X 0.25mm X 0.25皿）：升溫程序:初始溫度 70°C保持4min，W30°C/min的速率升至130°C，再W5°C/min的速率升至200°C，保持Imin;反 吹系統(tǒng)條件為:在升溫程序后開始進(jìn)行反吹;反吹運(yùn)行時(shí)間：8min;反吹運(yùn)行壓力：2化si ;反 吹運(yùn)行溫度:300°C。
[0100] 質(zhì)譜條件為:傳輸線溫度:230°C ;電離方式：電子轟擊電離化I);離子源溫度:230 °C ;四級(jí)桿溫度：150°C ;Q2碰撞氣：高純氮?dú)?N2);溶劑延遲時(shí)間：7min;掃描方式:多反應(yīng)監(jiān) 測(cè)(MRM)。另外，目標(biāo)物及內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)譜分析參數(shù)見表1。
[0101] 然后，將獲得的待測(cè)液中4種氯代茵香酸成分的含量分別代入計(jì)算公式，計(jì)算得到 實(shí)際煙草或煙草制品樣品中多種氯代茵香酸成分的含量。所述計(jì)算公式為X = m/[m0X(l- W)]，其中，X為實(shí)際煙草或煙草制品樣品中各組分的含量，單位為ng/g;m為通過(guò)內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲 線法得到的待測(cè)液中多種氯代茵香酸成分的含量，單位為ng;m日為稱取的實(shí)際煙草或煙草 制品樣品的質(zhì)量，單位為g;w為樣品含水率，單位為％。
[0102] 實(shí)施例3
[0103] 如實(shí)施例2中步驟1所示，分別移取不同體積的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，再分別加入一 定體積的濃度為lOng/ml的內(nèi)標(biāo)溶液，用正己燒定容配制為一系列不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶 液。混合標(biāo)準(zhǔn)溶液一共8級(jí)，其中4種氯代茵香酸的含量分別為：0.05ng、0. lng、0.5ng、 1.OOng、5.OOng、10.OOng、50.OOng、100.OOng。
[0104] 將上述配制好的一系列不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液分別采用多模式進(jìn)樣口與毛細(xì) 色譜柱預(yù)柱配合進(jìn)樣，再進(jìn)行GC-QQQ-MS/MS檢測(cè)，W4種氯代茵香酸成分與相應(yīng)內(nèi)標(biāo)物的二 級(jí)選擇離子峰面積比為縱坐標(biāo)(Y軸），其4種氯代茵香酸成分與相應(yīng)內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量濃度比為 橫坐標(biāo)(X軸），進(jìn)行回歸分析，得到回歸方程及其相關(guān)系數(shù)，如表2所示。
[0105] 由表2可知，回歸方程的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r = 0.9988~0.9998。對(duì)混合標(biāo)準(zhǔn) 溶液中的目標(biāo)物響應(yīng)信號(hào)，采用最低濃度標(biāo)樣重復(fù)進(jìn)樣10次，進(jìn)行GC-QQQ-MS/MS分析，W3 倍信噪比為方法的檢出限化0D)，10倍信噪比為定量限化0Q)，換算為樣品含量后得出目標(biāo) 物的方法檢出限為0.0029-0.0061 ng/g，定量限為0.010-0.020ng/g，具有較高的靈敏度。
[0106] 表2工作曲線和檢出限
[0107]
[010引 Y:離子峰面積比;X:濃度比
[0109] 實(shí)施例4
[0110] 選取煙草或煙草制品粉末樣品，稱取Ig樣品，加入已知濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后 進(jìn)行如實(shí)施例2的步驟2中的前處理，并采用多模式進(jìn)樣口與毛細(xì)色譜柱預(yù)柱配合進(jìn)樣，再 進(jìn)行GC-QQQ-MS/MS分析，按照加標(biāo)量(低濃度O.lng、中濃度Ing、高濃度long)和測(cè)定值計(jì)算 其回收率，結(jié)果見表3。同時(shí)對(duì)同一待測(cè)樣品溶液平行測(cè)定5次(n = 5)，得到4種氯代茵香酸 成分的精密度測(cè)定數(shù)據(jù)，結(jié)果見表4。
[0111] 表3 4種氯代茵香酸成分的回收率
[0112]
[0113]表4 5種氯代茵香酸成分的的精密度(n = 5)
[0114]
[0115] 由表3-4可W看出，目標(biāo)物的回收率在95~111%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)小于 6%，說(shuō)明本發(fā)明方法的回收率高、準(zhǔn)確性和重復(fù)性好，可W滿足定量需要。
[0116] 所W，本發(fā)明有效克服了現(xiàn)有技術(shù)中的種種缺點(diǎn)而具高度產(chǎn)業(yè)利用價(jià)值。
[0117] 上述實(shí)施例僅例示性說(shuō)明本發(fā)明的原理及其功效，而非用于限制本發(fā)明。任何熟 悉此技術(shù)的人±皆可在不違背本發(fā)明的精神及范疇下，對(duì)上述實(shí)施例進(jìn)行修飾或改變。因 此，舉凡所屬技術(shù)領(lǐng)域中具有通常知識(shí)者在未脫離本發(fā)明所掲示的精神與技術(shù)思想下所完 成的一切等效修飾或改變，仍應(yīng)由本發(fā)明的權(quán)利要求所涵蓋。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種煙草及煙草制品中多種氯代茴香醚的檢測(cè)方法，采用溶劑萃取、固相萃取凈化， 再采用多模式進(jìn)樣口與毛細(xì)色譜柱預(yù)柱配合進(jìn)樣，氣相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定， 從而對(duì)煙草及煙草制品中多種氯代茴香醚進(jìn)行定性定量檢測(cè)。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的煙草及煙草制品中多種氯代茴香醚的檢測(cè)方法，其特征在于， 述煙草及煙草制品中多種氯代茴香醚共4種，包括有2，4-DCA、2，6-DCA、2，4，6-TCA、TeCA。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的煙草及煙草制品中多種氯代茴香醚的檢測(cè)方法，其特征在于， 具體包括以下步驟： 1) 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制:配制內(nèi)標(biāo)溶液和混合標(biāo)準(zhǔn)溶液； 2) 樣品前處理:稱取煙草或煙草制品樣品，進(jìn)行溶劑萃取后，離心，取上清液，進(jìn)行固相 萃取凈化，收集凈化后的溶液進(jìn)行濃縮后，待測(cè)； 3) 樣品定性檢測(cè):分別將步驟1)配制的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液和步驟2)中待測(cè)液采用多模式進(jìn) 樣口與毛細(xì)色譜柱預(yù)柱配合進(jìn)樣，再進(jìn)行GC-QQQ-MS/MS檢測(cè)，根據(jù)內(nèi)標(biāo)法比較保留時(shí)間進(jìn) 行定性，確定待測(cè)液中多種氯代茴香醚成分； 4) 樣品定量檢測(cè):分別將步驟1)配制的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液和步驟2)中待測(cè)液采用多模式進(jìn) 樣口與毛細(xì)色譜柱預(yù)柱配合進(jìn)樣，再進(jìn)行GC-QQQ-MS/MS檢測(cè)，采用內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行定 量，獲得待測(cè)液中多種氯代茴香醚成分的含量； 5) 實(shí)際樣品含量的測(cè)定:將步驟4)獲得的待測(cè)液中多種氯代茴香醚成分的含量分別代 入計(jì)算公式，計(jì)算得到實(shí)際煙草或煙草制品樣品中多種氯代茴香醚成分的含量。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的煙草及煙草制品中多種氯代茴香醚的檢測(cè)方法，其特征在于， 步驟1)中，具體包括以下步驟： A) 分別稱取2，4-DCA、2，6-DCA、2，4，6-TCA、TeCA的標(biāo)準(zhǔn)品，加入正己烷定容，配成混合 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液； B) 稱取氘代2，4，6-三氯茴香醚，加入正己烷定容，配成內(nèi)標(biāo)溶液； C) 分別移取不同體積的步驟A中混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，再分別加入一定體積的步驟B中內(nèi) 標(biāo)溶液，用正己烷定容配制為一系列不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的煙草及煙草制品中多種氯代茴香醚的檢測(cè)方法，其特征在于， 步驟2)中，所述溶劑萃取是將煙草或煙草制品樣品，加入水振蕩混勻后，再加入正己烷和步 驟1)所述內(nèi)標(biāo)溶液，進(jìn)行渦旋震蕩。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的煙草及煙草制品中多種氯代茴香醚的檢測(cè)方法，其特征在于， 所述煙草或煙草制品樣品的質(zhì)量與水加入的體積之比為1-2:5-10;所述煙草或煙草制品樣 品的質(zhì)量與正己烷、內(nèi)標(biāo)溶液加入的體積之比為1-2:5-10:0.05-0.1。7. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的煙草及煙草制品中多種氯代茴香醚的檢測(cè)方法，其特征在于， 步驟2)中，所述固相萃取凈化是將上清液過(guò)固相萃取柱，再用有機(jī)溶劑過(guò)固相萃取柱進(jìn)行 洗脫，收集過(guò)固相萃取柱后的溶液。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的煙草及煙草制品中多種氯代茴香醚的檢測(cè)方法，其特征在于， 所述有機(jī)溶劑為正己烷與乙酸乙酯的混合溶液。9. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的煙草及煙草制品中多種氯代茴香醚的檢測(cè)方法，其特征在于， 步驟3)或4)中，所述多模式進(jìn)樣口與毛細(xì)色譜柱預(yù)柱配合進(jìn)樣條件為:進(jìn)樣口 ： MMI進(jìn)樣口； 色譜進(jìn)樣口溫度:初始70-80°C，保持0 · 05-0 · 2min，500-700°C/min速率升至180-200°C ;進(jìn) 樣量:20-30μ1;進(jìn)樣方式:冷不分流進(jìn)樣;載氣：高純氦氣，載氣純度2 99.999 % ;載氣流速： 初始流速 1 · 1_1.3mL/min，保持0.05-0.15min，再以9〇-110mL/min速率升至 1.9-2· lmL/min， 保持3.8-3.9min，最后以90-110mL/min速率降至1.1-1.3mL/min;色譜柱預(yù)柱:去活性無(wú)固 定相石英毛細(xì)管色譜柱。10. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的煙草及煙草制品中多種氯代茴香醚的檢測(cè)方法，其特征在 于，步驟3)或4)中，所述GC-QQQ-MS/MS檢測(cè)條件為： 氣相色譜條件為：色譜柱1:DB-35MS UI石英毛細(xì)管色譜柱；色譜柱2:DB-35MS UI石英 毛細(xì)管色譜柱:升溫程序:初始溫度60-80°C保持3-5min，以25-35°C/min的速率升至120-140°C，再以4-6°C/min的速率升至190-210°C，保持0.5-1.5min;反吹系統(tǒng)條件為:在升溫程 序后開始進(jìn)行反吹；反吹運(yùn)行時(shí)間：7-9min;反吹運(yùn)行壓力：19-21psi ;反吹運(yùn)行溫度：290-31(TC〇 質(zhì)譜條件為:傳輸線溫度：220-240°C ;電離方式：電子轟擊電離；離子源溫度：220-240 °C ;四級(jí)桿溫度：140-160 °C ; Q2碰撞氣：高純氮?dú)?溶劑延遲時(shí)間：6-8min;掃描方式:多反應(yīng) 監(jiān)測(cè)。11. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的煙草及煙草制品中多種氯代茴香醚的檢測(cè)方法，其特征在 于，步驟5)中，所述計(jì)算公式為X=m/[m〇X(l- W)]，其中，X為實(shí)際煙草或煙草制品樣品中各 組分的含量，單位為ng/g;m為通過(guò)內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法得到的待測(cè)液中多種氯代茴香醚成分的 含量，單位為 ng;mQ為稱取的實(shí)際煙草或煙草制品樣品的質(zhì)量，單位為g;w為樣品含水率，單 位為％。
【文檔編號(hào)】G01N30/06GK105823841SQ201610168529
【公開日】2016年8月3日
【申請(qǐng)日】2016年3月23日
【發(fā)明人】王嘉樂(lè), 呂亮亮, 吳達(dá), 戚大偉, 曾令杰, 林華清
【申請(qǐng)人】上海煙草集團(tuán)有限責(zé)任公司