專利名稱：一種絲膠的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物材料制備領(lǐng)域，尤其涉及一種絲膠的提取方法。
背景技術(shù)：
蠶絲加工產(chǎn)生的絲綢廢水中含有高濃度的絲膠蛋白，其渾濁度和COD含量很高，如不經(jīng)處理直接排放會(huì)嚴(yán)重污染水源，引起周圍環(huán)境的惡化。蠶絲中絲膠的含量約占25-30%，而絲膠和絲素是含氮的高分子化合物，同屬蛋白質(zhì)，而蛋白質(zhì)水解的最終廣物是氣基酸。根據(jù)研究，組成蛋白質(zhì)的氣基酸有20多種,而組成絲素和絲膠的氨基酸各有18種，且成份相似，絲膠蛋白這一資源占繭絲資源總量的1/4以上，而絲膠在紡織品涂層、生物材料、醫(yī)藥、化妝品等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景?，F(xiàn)有的從絲綢廢水中提取絲膠的技術(shù)主要有:有機(jī)溶劑法、冰凍法、化學(xué)混凝法和超濾法等。由于絲膠成分的復(fù)雜性和不穩(wěn)定性，以上幾種方法均未能地在沉淀和分離環(huán)節(jié)取得良好的效果，以至于在提取的過(guò)程中出現(xiàn)絲膠蛋白的生物活性被破壞、造成的污染無(wú)法解決等問(wèn)題，而且提取率低、成本耗費(fèi)量大，很難應(yīng)用于大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種絲膠的提取方法，旨在解決現(xiàn)有技術(shù)中絲膠蛋白的生物活性被破壞、造成污染，且提取率低、成本耗費(fèi)量大的問(wèn)題。本發(fā)明實(shí)施例是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種絲膠的提取方法，所述方法包括下述步驟:絲綢廢水用超濾膜過(guò)濾后離心，取上清液；在所述上清液中邊攪拌邊慢慢加入飽和硫酸銨溶液后，將所述溶液放在磁力攪拌器上攪拌，使蛋白質(zhì)充分沉淀；離心所述溶液，棄上清液保留沉淀；將所述沉淀物加蒸餾水?dāng)嚢韬蟛捎霉滔噍腿》ǚ蛛x出的硫酸銨，得到純的蛋白質(zhì)溶液；用低溫干燥法使所述蛋白質(zhì)溶液結(jié)晶，得到純的絲膠蛋白粉。本發(fā)明實(shí)施例安全、高效、節(jié)能，所提取蛋白質(zhì)的生物活性不被破壞，適用于工業(yè)
化生產(chǎn)。


圖1表示本發(fā)明實(shí)施例一提供的絲膠提取方法的實(shí)現(xiàn)流程圖。圖2表示本發(fā)明實(shí)施例二提供的絲膠提取方法的實(shí)現(xiàn)流程圖。
具體實(shí)施例方式為了使本發(fā)明的目的及優(yōu)點(diǎn)更 加清楚明白，以下結(jié)合附圖及實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。實(shí)施例一圖1示出了本發(fā)明實(shí)施例提供的絲膠提取方法的實(shí)現(xiàn)流程，詳述如下:在步驟SlOl中，將IOOg絲綢廢水用超濾膜過(guò)濾后離心，取上清液；在本發(fā)明實(shí)施例中，以絲綢廢水進(jìn)行回收提取。在步驟S102中，在上清液中邊攪拌邊慢慢加入飽和硫酸銨溶液后，將溶液放在磁力攪拌器上攪拌，使蛋白質(zhì)充分沉淀；在本發(fā)明實(shí)施例中的硫酸銨((NH4)2SO4)在生物學(xué)上的用途很多，多用于蛋白純化工藝方面，因?yàn)榱蛩徜@屬于惰性物質(zhì)，不易與其他生物活性物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，在純化過(guò)程中能最大程度的保護(hù)蛋白活性，另外，硫酸銨的可溶性極好，能形成高鹽環(huán)境，對(duì)于蛋白沉淀與后續(xù)的高鹽純化做準(zhǔn)備。硫酸銨與蒸餾水以7.67: 10的質(zhì)量比例攪拌混合，即得到飽和度為100%的硫酸銨溶液(SAS)。在步驟S103中，離心溶液，棄上清液保留沉淀；在本發(fā)明實(shí)施例中，以5000轉(zhuǎn)/min離心40分鐘，取上清液。在步驟S104中，將沉淀物加蒸餾水?dāng)嚢韬蟛捎霉滔噍腿》ǚ蛛x出的硫酸銨，得到純的蛋白質(zhì)溶液；在本發(fā)明實(shí)施例中的固相萃取技術(shù)是基于液-固相色譜理論，采用選擇性吸附、選擇性洗脫的方式對(duì)樣品進(jìn)行富集、分離、純化，是一種包括液相和固相的物理萃取過(guò)程；也可以將其近似的看作一種簡(jiǎn)單的色譜過(guò)程。SPE是利用選擇性吸附與選擇性洗脫的液相色譜法分離原理。較常用的方法是使液體樣品通過(guò)一吸附劑，保留其中被測(cè)物質(zhì)，再選用適當(dāng)強(qiáng)度溶劑沖去雜質(zhì)，然后用少量良溶劑洗脫被測(cè)物質(zhì)，從而達(dá)到快速分離凈化與濃縮的目的。也可選擇性吸附干擾雜質(zhì)，而讓被測(cè)物質(zhì)流出；或同時(shí)吸附雜質(zhì)和被測(cè)物質(zhì)，再使用合適的溶劑選擇性洗脫被測(cè)物質(zhì)。在本發(fā)明實(shí)施例中，在2V的溫度下邊攪拌邊慢慢加入飽和硫酸銨溶液到上清液中，使其體積比達(dá)到1: 1，然后將溶液放在磁力攪拌器上攪8個(gè)小時(shí)，使蛋白質(zhì)充分沉淀。蛋白質(zhì)溶液以5000轉(zhuǎn)/min離心50分鐘，棄上清液保留沉淀，沉淀物再加蒸餾水?dāng)嚢?，使溶液含水量達(dá)到70%，然后采用固相萃取法分離出的硫酸銨，得到純的蛋白質(zhì)溶液。在步驟S105中，用低溫干燥法使所述蛋白質(zhì)溶液結(jié)晶，得到純的絲膠蛋白粉。在本發(fā)明實(shí)施例中，用低溫干燥法使蛋白質(zhì)溶液結(jié)晶，得到絲膠蛋白粉6.8g左右。將本發(fā)明實(shí)施例得到的絲膠粉進(jìn)行氨基酸分析，結(jié)果如表1:
權(quán)利要求
1.一種絲膠的提取方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟: 絲綢廢水用超濾膜過(guò)濾后離心，取上清液； 在所述上清液中邊攪拌邊慢慢加入飽和硫酸銨溶液后，將所述溶液放在磁力攪拌器上攪拌，使蛋白質(zhì)充分沉淀； 離心所述溶液，棄上清液保留沉淀； 將所述沉淀物加蒸餾水?dāng)嚢韬蟛捎霉滔噍腿》ǚ蛛x出的硫酸銨，得到純的蛋白質(zhì)溶液； 用低溫干燥法使所述蛋白質(zhì)溶液結(jié)晶，得到純的絲膠蛋白粉。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述絲綢廢水用超濾膜過(guò)濾后離心是以5000轉(zhuǎn)/min離心40-50分鐘。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述加入的飽和硫酸銨溶液與上清液的體積比是1:1。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述將所述溶液放在磁力攪拌器上的攪拌在0-5 °C的溫度條件下進(jìn)行。
5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述將所述溶液放在磁力攪拌器上的攪拌時(shí)間為6-8個(gè)小時(shí)。
6.如權(quán)利要求1 所述的方法，其特征在于，所述離心所述溶液，棄上清液保留沉淀是在0-5 °C的溫度條件下進(jìn)行。
全文摘要
本發(fā)明適用于生物材料制備領(lǐng)域，提供了一種絲膠的提取方法，所述方法包括絲綢廢水用超濾膜過(guò)濾后離心，取上清液；在所述上清液中邊攪拌邊慢慢加入飽和硫酸銨溶液后，將所述溶液放在磁力攪拌器上攪拌，使蛋白質(zhì)充分沉淀；離心所述溶液，棄上清液保留沉淀；將所述沉淀物加蒸餾水?dāng)嚢韬蟛捎霉滔噍腿》ǚ蛛x出的硫酸銨，得到純的蛋白質(zhì)溶液；用低溫干燥法使所述蛋白質(zhì)溶液結(jié)晶，得到純的絲膠蛋白粉。本發(fā)明安全、高效、節(jié)能，所提取蛋白質(zhì)的生物活性不被破壞，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07K1/30GK103242439SQ20131015909
公開(kāi)日2013年8月14日 申請(qǐng)日期2013年5月3日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月3日
發(fā)明者潘大東 申請(qǐng)人:廣西立盛繭絲綢有限公司