br>[0047] "氨基酸"是指化合物，其具有氨基基團和羧酸基團，優(yōu)選是在碳骨架上的1，2-取 代、1，3-取代或1，4-取代模式。a -氨基酸是最優(yōu)選的，且包括在蛋白中發(fā)現(xiàn)的20種天 然氨基酸（它們是L-氨基酸，除了甘氨酸）、相應的D-氨基酸、相應的N-甲基氨基酸、側 鏈修飾的氨基酸、沒有在蛋白中發(fā)現(xiàn)的生物合成獲得的氨基酸（例如4-羥基-脯氨酸、 5-羥基-賴氨酸、瓜氨酸、鳥氨酸、刀豆氨酸、黎豆氨酸、P -氰基丙氨酸）、以及合成衍生的 a _氨基酸（例如氨基異丁酸、正亮氨酸、正纈氨酸、同型半胱氨酸和同型絲氨酸）。丙氨酸 和Y-氨基丁酸分別是1，3-氨基酸和1，4-氨基酸的例子，且許多其它氨基酸在本領域是公 知的。抑胃酶氨酸樣等構物（包括兩個氨基酸的二肽，其中CONH鍵被CHOH置換）、羥基亞 乙基等構物（包括兩個氨基酸的二肽，其中CONH鍵被CHOHCH 2置換）、還原的酰胺等構物 (包括兩個氨基酸的二肽，其中CONH鍵被CH2NH鍵置換）和硫代酰胺等構物（包括兩個氨 基酸的二肽，其中CONH鍵被CSNH鍵置換）也是本發(fā)明有用的氨基酸殘基。用于本發(fā)明的 氨基酸是可商業(yè)獲得或者可通過常規(guī)合成方法獲得的氨基酸。
[0048] "置換"是指由不同的氨基酸或核苷酸置換一個或多個氨基酸或核苷酸。
[0049] "缺失"是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一個或多個氨基酸或核苷酸的缺失。
[0050] "插入"或"添加"是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改變導致與天然存在或改 變前的分子相比，一個或多個氨基酸或核苷酸的增加。
[0051] "置換、缺失和/或添加一個或多個氨基酸"則是指，利用定位誘變法等公知的突變 核酸或多肽的制作法置換、缺失和/或添加能夠置換、缺失和/或添加的程度的數(shù)目的氨基 酸或核苷酸。上述突變不限于利用已知的定點突變法而人為誘導的突變，也可以是對天然 存在的核酸或蛋白質的突變進行分離純化而得到的。對氨基酸的突變可以包含有一個或多 個氨基酸殘基為構象為D-型的氨基酸，自然界存在的稀有氨基酸或人工修飾的氨基酸，這 些氨基酸可以是也可以不是由遺傳密碼子編碼的。與此相類似的，誘導核酸發(fā)生突變，可以 包括自然界天然存在的核苷酸，也可以包括具有修飾的核苷酸。
[0052] 本領域技術人員已知的氨基酸的保守替代是在本發(fā)明的范圍內(nèi)。保守氨基酸替代 包括一個氨基酸用另一個具有相同類型官能團或側鏈例如脂肪族、芳族、帶正電、帶負電的 氨基酸置換。這些替代可以增強口服生物利用度、滲透到中樞神經(jīng)系統(tǒng)、靶向特異性細胞群 體等。本領域技術人員知曉，在編碼序列中改變、增加或刪除單個氨基酸或小百分率的氨基 酸的對肽、多肽或蛋白序列的個別替代、刪除或增加是"保守修飾變體"，其中改變導致了氨 基酸用化學類似的氨基酸替代。例如，以下六組各自含有用于彼此保守替代的氨基酸：1) 丙氨酸（A)、絲氨酸（S)、蘇氨酸（T) ;2)天冬氨酸（D)、谷氨酸（E) ;3)天冬酰胺（N)、谷胺 酰胺（Q) ;4)精氨酸（R)、賴氨酸（K) ;5)異亮氨酸（I)、亮氨酸（L)、甲硫氨酸（M)、繳氨酸 (V) ;以及6)苯丙氨酸（F)、酪氨酸（Y)、色氨酸（W)。提供功能上類似的氨基酸的保守替代 方式在本領域中是公知的，其他任何已知的替代方式都是可以的。
[0053] "疏水性氨基酸"是指側鏈具有高疏水性的氨基酸，例如蛋氨酸（M)、色氨酸（W)、酪 氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、纈氨酸（V)、亮氨酸（L)、異亮氨酸（I)、脯氨酸（P)和丙氨酸（A)。
[0054] "芳香族氨基酸"是指含有芳香環(huán)的氨基酸，例如酪氨酸（Y)、苯丙氨酸（F)、色氨酸 (W) 以及甲狀腺素。
[0055] "帶正電的氨基酸"是指側鏈帶有正電荷的氨基酸，例如賴氨酸（K)、精氨酸（R)和 組氨酸⑶。
[0056] "多肽"或"氨基酸序列"是指肽、寡肽、多肽或蛋白質及其部分片段，其間以肽鍵相 連接的氨基酸。當本發(fā)明中的"氨基酸序列"涉及一種天然存在的蛋白質分子的氨基酸序 列時，這種"多肽"或"蛋白質"并不意味著將氨基酸序列限制為與所述蛋白質分子相關的 完整的天然氨基酸序列。本發(fā)明的氨基酸序列可以含有附加的肽。作為附加的肽，如多組 氨酸標簽（His-tag)、或Myc、FLAG等表位標記的肽為例。
[0057] 肽類似物和肽模擬物也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)，此外還包括本發(fā)明的肽的鹽和 酯。根據(jù)本發(fā)明的肽類似物可任選地包括至少一個非天然氨基酸和/或在C端或N端的至 少一個封閉基團。本發(fā)明的肽的鹽是生理學上可接受的有機鹽和無機鹽。適當?shù)?類似物" 的設計可以用計算機輔助。
[0058] "肽模擬物"是指根據(jù)本發(fā)明的肽以包括至少一個非肽鍵例如脲鍵、氨基甲酸酯 鍵、磺酰胺鍵、肼鍵或任何其它共價鍵的這種方式來修飾。適當?shù)?肽模擬物"的設計可以 用計算機來輔助。
[0059] 本發(fā)明的肽的鹽和酯包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。本發(fā)明的肽的鹽是生理學上可接受 的有機鹽和無機鹽。本發(fā)明的肽的功能衍生物包括可以通過本領域已知的方式由作為殘基 上的側鏈或N或C端基團存在的官能團制備的衍生物，并且包括在本發(fā)明中，只要它們保持 藥學上可接受，即它們不破壞肽的活性且不賦予含有它的組合物以毒性。這些衍生物例如 包括羧基的脂肪族的酯、通過與氨或伯胺或仲胺反應所產(chǎn)生的羧基的酰胺、通過與?；?分（例如烷?；蛱辑h(huán)芳?；┓磻纬傻陌被釟埢挠坞x氨基的N-?；苌锘蛲?過與酰基部分反應形成的游離羥基（例如絲氨?；蛱K氨?；鶜埢┑末?酰基衍生物。
[0060] "多核苷酸"、"核酸序列"或"堿基序列"是指核苷酸、寡核苷酸或多核苷酸及其片 段或部分。本發(fā)明的核酸能夠以RNA(例如，mRNA)的形態(tài)、或DNA的形態(tài)（例如，cDNA或 基因組DNA)存在。DNA可以是雙鏈，也可以是單鏈。單鏈DNA或RNA可以是編碼鏈（有義 鏈）、或非編碼鏈（反義鏈）中任一種。另外，本發(fā)明的多核苷酸也可以在其5'端或3'端 融合編碼標簽標記（標簽序列或標記物序列）的多核苷酸。它們可以是合成的或是從天然 來源獲得的（例如，分離和/或純化），其可以包含天然的、非天然的或者修飾過的核苷酸， 并且其可以包含天然的、非天然的或改變的核苷酸之間的鍵，諸如氨基磷酸酯鍵或硫代磷 酸酯鍵，用來代替在未修飾的寡核苷酸中核苷酸之間存在的磷酸二酯鍵。
[0061] "分離的"一詞是指將物質從它原始的環(huán)境（例如，若是自然產(chǎn)生的就指其天然環(huán) 境）分離出來。比如說，一個自然產(chǎn)生的多核苷酸或多肽存在于活動物中就是沒有被分離 出來，而同樣的多核苷酸或多肽同一些或全部在自然系統(tǒng)中與之共存的物質分開就是分離 的。這樣的多核苷酸或多肽可以是某一載體的一部分，也可以是某一組合物的一部分。既 然載體和組合物不是它的天然環(huán)境的成分，它們?nèi)匀皇欠蛛x的。
[0062] "核酸雜交"在本領域已公知（參見，例如，Sambrook等，Molecular Cloning :A Laboratory Manual，3rd Ed.，Cold Spring Harbor Laboratory，2001)。通常，溫度越高， 鹽濃度越低，則嚴謹性變得越高（難以雜交），從而能夠取得更加相同的多核苷酸。適合的 雜交溫度根據(jù)堿基序列或其堿基序列的長度而異。另外，本發(fā)明還涉及在"嚴格條件"下雜 交。本發(fā)明中，"嚴格條件"是指，在較低離子強度和較高溫度下的雜交和洗脫，例如，42°C的 條件下、在（50%甲酰胺、5XSSC(150mM NaCl、15mM檸檬酸三鈉）、50mM的磷酸鈉（pH7. 6)、 5 X Denhardt溶液、10 %硫酸葡聚糖、和20 y g/mL的變性剪切鮭魚精子DNA)中孵育過夜，然 后在65°C條件下用0.1 X SSC洗脫。
[0063]本發(fā)明的疫苗包括多肽或包含多肽的重組融合蛋白和任選的佐劑。所述疫苗可以 被配制用于以多種不同方式之一施用。根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案，所述疫苗鼻內(nèi)施用。所 述疫苗制劑可以任何便利的方式應用到淋巴組織。然而，優(yōu)選將它作為液流或液滴應用到 鼻通道的壁上。鼻內(nèi)組合物能夠例如以液體形式配制為滴鼻劑、噴霧劑，或者適合于吸入， 配制為粉劑、霜劑或乳劑。該組合物能夠含有多種添加劑，例如佐劑、賦形劑、穩(wěn)定劑、緩沖 劑或防腐劑。
[0064]為了簡單應用，所述疫苗優(yōu)選在適于以滴鼻劑或氣溶膠的形式分布所述多肽或重 組融合蛋白的容器中供應。在某些優(yōu)選實施方案中，所述疫苗被配制用于粘膜遞送，尤其鼻 部遞送（Arnon 等，Biologicals (生物制品）? 2001 ;29 (3-4) : 237-42 ;Ben_Yedidia 等，Int Immunol.(國際免疫學）1999 ; 11 (7) : 1043-51)。
[0065]在本發(fā)明的一個實施例中，可通過噴霧、氣霧劑或滴眼劑進行經(jīng)眼施用?？蓪⒁?苗配制為液體或干粉，以作為氣霧劑、噴霧劑或滴眼劑施用。作為氣霧劑、滴眼劑或噴霧劑 施用的組合物可包含一種或多種類型的通常包含在此類組合物中的賦形劑，例如防腐劑、 粘度調(diào)節(jié)劑、張力調(diào)節(jié)劑、淚液阻斷劑、緩沖劑、穩(wěn)定劑、載體、佐劑等，以制備經(jīng)眼施用的制 劑。
[0066]在本發(fā)明的一個實施方案中，施用為口服，且所述疫苗可以例如以片劑的形式提 供，或者在明膠膠囊或微膠囊內(nèi)包裹。還在又一個實施方案中，所述疫苗被配制用于胃腸外 施用。在一些實施方案中，所述疫苗被配制用于大規(guī)模接種，例如與噴射注射器或一次性用 藥筒一起使用。還根據(jù)又一個實施方案，所述施用是肌內(nèi)。還根據(jù)又一個實施方案，所述施 用是皮內(nèi)。專門設計用于皮內(nèi)投入疫苗的針在本領域中是已知的，例如特別是公開在美國 專利號6, 843, 781和7, 250, 036中。根據(jù)其它實施方案，所述施用用無針注射器進行。
[0067]這些形式的制劑對于本領域技術人員來說是常識。
[0068]遞送載體包括脂質體、微顆粒、納米顆粒等。脂質體提供了用于抗原遞送和呈遞的 另一遞送系統(tǒng)。脂質體是由包圍一個通常含水中心的磷脂和其它留醇組成的雙層囊泡，在 所述含水中心中抗原或其它產(chǎn)物能夠被包封。脂質體結構是高度多樣的，許多類型是在從 約25nm到約500 y m的納米級到微米級的范圍內(nèi)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，脂質體可有效遞送治療劑到皮 膚和粘膜表面。脂質體能夠進一步被修飾，用于例如通過將特異性抗體并入到表面膜來靶 向遞送，或者被改變成包封細菌、病毒或寄生蟲。完整的脂質體結構的平均生存時間或半衰 期可以在包括某些聚合物例如聚乙二醇時延長，允許在體內(nèi)延長釋放。脂質體可以是單層 的或多層的。微顆粒和納米顆粒使用小的可生物降解的球體，它用作疫苗遞送的貯庫。聚 合物微球具有的超過其它貯庫效應的佐劑的主要優(yōu)點是，它們是極其安全的，且已經(jīng)被美 國食品和藥品管理局批準作為適合的縫合線用于人類醫(yī)藥以及用作可生物降解的藥物遞 送系統(tǒng)。共聚物水解的速率被很好表征，進而