低葡萄糖苷酶纖維素酶的離心沉渣。
[0035]步驟五、第一次水解處理:將步驟四得到的含有低β-葡萄糖苷酶纖維素酶的離心沉渣投至無菌容器中，在無菌容器中補(bǔ)加無菌水至原反應(yīng)原液的體積，并調(diào)節(jié)無菌容器中的反應(yīng)體系的pH值為4.80，無菌容器的溫度設(shè)定為50°C，水解反應(yīng)一段時間后，采用固液分離方法將液相移除。
[0036]步驟六、第二次水解處理:在經(jīng)過步驟五第一次水解處理得到的固體渣中補(bǔ)加一定無菌水至原反應(yīng)原液的體積，調(diào)節(jié)無菌容器中的反應(yīng)體系的pH值為4.80，無菌容器的溫度設(shè)定為50°C，繼續(xù)反應(yīng)一段時間后，采用固液分離方法將液相移除。
[0037]步驟七、第三次水解處理:在經(jīng)過步驟六第二次水解處理后得到的固體渣中繼續(xù)補(bǔ)加一定無菌水至原反應(yīng)原液的體積，調(diào)節(jié)無菌容器中的反應(yīng)體系的pH值為4.80，無菌容器的溫度設(shè)定為50°C，繼續(xù)反應(yīng)一段時間后，采用固液分離方法再次將液相移除。
[0038]其中，步驟五和步驟六中的固液分離方法包括離心法和過濾法。離心法較過濾法的分離速度較快，能節(jié)省大量的固液分離時間。在本發(fā)明實(shí)施例中，固液分離方法采用離心法。
[0039]進(jìn)一步地，步驟五第一次水解處理、步驟六第二次水解處理和步驟七第三次水解處理的總水解時間為24h。
[0040]實(shí)施例一、
[0041]第一次水解處理中的水解時間為6h，第二次水解處理中的水解時間為6h。
[0042]實(shí)施例二、
[0043]第一次水解處理中的水解時間為6h，第二次水解處理中的水解時間為8h。
[0044]實(shí)施例三、
[0045]第一次水解處理中的水解時間為Sh，第二次水解處理中的水解時間為Sh。
[0046]實(shí)施例四、
[0047 ] 第一次水解處理中的水解時間為6h，第二次水解處理中的水解時間為12h。
[0048]實(shí)施例五、
[0049 ] 第一次水解處理中的水解時間為24h。
[0050]試驗(yàn):
[0051]實(shí)施例一至實(shí)施例四代表不同分段時間節(jié)點(diǎn)的三段水解制備技術(shù)，實(shí)施例五代表不分段水解制備技術(shù)。
[0052]將實(shí)施例一至實(shí)施例五分別按照本發(fā)明提供的一種纖維素定向三段水解制備纖維寡糖的方法制備纖維寡糖，分別測定實(shí)施例一至實(shí)施例五的纖維寡糖的得率，記錄數(shù)據(jù)，繪制成柱狀圖如圖1所示。
[0053]參閱圖1，從圖中可發(fā)現(xiàn)，實(shí)施例一至實(shí)施例四的纖維寡糖的得率均明顯高于實(shí)施例五的纖維寡糖得率。且在三段水解模式中，實(shí)施例一的纖維寡糖的得率最高，為72.27%，較實(shí)施例五的纖維寡糖得率高出37.06%，整整翻了一倍，較二段水解模式下的最高得率提升了 15.98%，大大提高了纖維寡糖的生產(chǎn)產(chǎn)量。
[0054]本發(fā)明提供的一種纖維素定向三段水解制備纖維寡糖的方法，能夠高效解除水解過程中產(chǎn)物對酶的反饋抑制作用，提高低葡萄糖苷酶纖維素酶定向水解低聚木糖生產(chǎn)廢渣制備纖維寡糖的得率，提升了纖維寡糖的生產(chǎn)產(chǎn)量。
[0055]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換或改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種纖維素定向三段水解制備纖維寡糖的方法，其特征在于:包括如下步驟: 步驟一、制備反應(yīng)原液:按1:20的比例稱取底物纖維素和無菌水，將底物纖維素和無菌水倒入溫度可設(shè)定的無菌容器中，得到底物纖維素濃度為5%的反應(yīng)原液； 步驟二、設(shè)定溫度及PH值:調(diào)節(jié)無菌容器中的反應(yīng)原液的pH值為7.0，設(shè)定無菌容器的溫度恒為10°C; 步驟三、底物原位吸附:稱取一定量的里氏木霉纖維素酶，投入經(jīng)步驟二處理后的反應(yīng)原液中，攪拌均勻后得到吸附體系，吸附時間為30min; 步驟四、固液分離處理:當(dāng)吸附時間到達(dá)30min時，將無菌容器中的吸附體系快速倒入離心機(jī)中離心處理，分離除去吸附體系中的液相，得到含有適合于纖維寡糖制備的低β-葡萄糖苷酶纖維素酶的離心沉渣； 步驟五、第一次水解處理:將步驟四得到的含有低β-葡萄糖苷酶纖維素酶的離心沉渣投至無菌容器中，在無菌容器中補(bǔ)加無菌水至原反應(yīng)原液的體積，并調(diào)節(jié)無菌容器中的反應(yīng)體系的PH值為4.80，無菌容器的溫度設(shè)定為50°C，水解反應(yīng)一段時間后，采用固液分離方法將液相移除； 步驟六、第二次水解處理:在經(jīng)過步驟五第一次水解處理得到的固體渣中補(bǔ)加一定無菌水至原反應(yīng)原液的體積，調(diào)節(jié)無菌容器中的反應(yīng)體系的PH值為4.80，無菌容器的溫度設(shè)定為50°C，繼續(xù)反應(yīng)一段時間后，采用固液分離方法將液相移除； 步驟七、第三次水解處理:在經(jīng)過步驟六第二次水解處理后得到的固體渣中繼續(xù)補(bǔ)加一定無菌水至原反應(yīng)原液的體積，調(diào)節(jié)無菌容器中的反應(yīng)體系的pH值為4.80，無菌容器的溫度設(shè)定為50°C，繼續(xù)反應(yīng)一段時間后，采用固液分離方法再次將液相移除； 步驟八、提純纖維寡糖:收集經(jīng)步驟五、步驟六和步驟七固液分離后的液相，并提取液相中的纖維寡糖反應(yīng)產(chǎn)物，提純得到纖維寡糖，可直接用于飼料添加劑。2.如權(quán)利要求1所述的一種纖維素定向三段水解制備纖維寡糖的方法，其特征在于:所述的步驟一中的底物纖維素為低聚木糖生產(chǎn)廢渣。3.如權(quán)利要求1所述的一種纖維素定向三段水解制備纖維寡糖的方法，其特征在于:所述的步驟三中里氏木霉纖維素酶的用量為15FPIU/g底物纖維素。4.如權(quán)利要求1所述的一種纖維素定向三段水解制備纖維寡糖的方法，其特征在于:所述的步驟五、步驟六和步驟七中的固液分離方法包括離心法和過濾法。5.如權(quán)利要求1所述的一種纖維素定向三段水解制備纖維寡糖的方法，其特征在于:所述的步驟五第一次水解處理、步驟六第二次水解處理和步驟七第三次水解處理的總水解時間為24h。6.如權(quán)利要求5所述的一種纖維素定向三段水解制備纖維寡糖的方法，其特征在于:所述的步驟五第一次水解處理中的水解時間為6h，步驟六第二次水解處理中的水解時間為6h07.如權(quán)利要求5所述的一種纖維素定向三段水解制備纖維寡糖的方法，其特征在于:所述的步驟五第一次水解處理中的水解時間為6h，步驟六第二次水解處理中的水解時間為8h。8.如權(quán)利要求5所述的一種纖維素定向三段水解制備纖維寡糖的方法，其特征在于:所述的步驟五第一次水解處理中的水解時間為8h，步驟六第二次水解處理中的水解時間為8h。9.如權(quán)利要求5所述的一種纖維素定向三段水解制備纖維寡糖的方法，其特征在于:所述的步驟五第一次水解處理中的水解時間為6h，步驟六第二次水解處理中的水解時間為12h010.如權(quán)利要求6所述的一種纖維素定向三段水解制備纖維寡糖的方法，其特征在于:所述的步驟五第一次水解處理中的水解時間為24h。
【專利摘要】本發(fā)明適用于纖維寡糖制備的技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種纖維素定向三段水解制備纖維寡糖的方法，包括如下步驟：制備反應(yīng)原液、設(shè)定溫度及pH值、底物原位吸附、固液分離處理、第一次水解處理、第二次水解處理、第三次水解處理和提純纖維寡糖。本發(fā)明一種纖維素定向三段水解制備纖維寡糖的方法，通過低β-葡萄糖苷酶的纖維素酶水解低聚木糖生產(chǎn)廢渣，得到含有纖維寡糖的液相，通過固液分離方法并提純得到纖維寡糖，采用三段水解模式，能高效地解除水解過程中產(chǎn)物對酶的反饋抑制作用，纖維寡糖的得率大大高于不分段水解模式下的纖維寡糖得率，較二段水解模式也明顯提升，提高了纖維寡糖的生產(chǎn)產(chǎn)量，成本較低，資源利用率高，可工業(yè)化進(jìn)行纖維寡糖的生產(chǎn)。
【IPC分類】C12P19/14, C12P19/04
【公開號】CN105524958
【申請?zhí)枴緾N201610057509
【發(fā)明人】朱漢靜, 朱漢生, 劉鎦, 陳冬勁
【申請人】江蘇康維生物有限公司
【公開日】2016年4月27日
【申請日】2016年1月27日