長梗冬青苷的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本發(fā)明涉及中藥材有效成分的分離技術(shù)，具體涉及一種從救必應(yīng)中制備長梗冬青 苷的簡易方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 救必應(yīng)為冬青科植物鐵冬青（Ilex rotunda Thunb.)的干燥樹皮，始載于《嶺南采 藥錄》，現(xiàn)收載于《中華人民共和國藥典》(2015年版一部），為我國嶺南常用中草藥。藥材性 苦、涼，具有清熱解毒，利濕止痛的功效，常用于治療暑濕發(fā)熱，咽喉腫痛，濕熱瀉痢，脘腹脹 痛，風(fēng)濕痹痛，濕疹，瘡癤，跌打損傷。救必應(yīng)中含有紫丁香苷、長梗冬青苷、救必應(yīng)酸等許多 化學(xué)成分。其中長梗冬青苷含量較豐富且具有突出的生物活性。長梗冬青苷具有顯著的調(diào) 節(jié)血脂作用、抗炎作用和對肝損傷和平滑肌損傷的保護(hù)作用。長梗冬青苷是一種五環(huán)三萜 化合物，分子式C36H58016，分子量658.86，結(jié)構(gòu)式為：
[0003]
[0004] 長梗冬青苷(Pedunculoside)
[0005] 近年來，有一些從救必應(yīng)中提取分離長梗冬青苷的方法被研究報(bào)道，現(xiàn)有制備長 梗冬青苷的方法主要包括硅膠柱分離法、高效逆流色譜法和大孔樹脂法。傳統(tǒng)硅膠柱分離 方法花費(fèi)時(shí)間長，有機(jī)溶劑用量大，產(chǎn)量低，已不適合現(xiàn)代工業(yè)要求;使用高效逆流色譜的 方法不適合于工廠放大生產(chǎn);使用大孔樹脂的方法，工藝復(fù)雜，產(chǎn)率低。專利CN103351419公 開了一種兩步法同時(shí)制備長梗冬青苷和紫丁香苷的方法，取救必應(yīng)粗粉用乙醇回流提取， 并使用重結(jié)晶或柱層析法對長梗冬青苷純化，得到紫丁香苷和長梗冬青苷，純度為98%，但 對于長梗冬青苷的提取分離而言，產(chǎn)率損失較大。
[0006] 綜上所述，現(xiàn)有從救必應(yīng)中提取純化長梗冬青苷的方法，存在方法復(fù)雜、不適合工 業(yè)放大、使用較多有毒試劑、產(chǎn)率低、效率不高、成本高等問題。因此，有必要尋找一種較為 簡單、高效提取分離長梗冬青苷的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種制備長梗冬青苷的簡易方 法，該方法操作簡單、成本低，制備的長梗冬青苷產(chǎn)品產(chǎn)率純度高。
[0008] 本發(fā)明包括以下步驟：
[0009] (1)取救必應(yīng)藥材，采用乙醇水溶液加熱回流提取，過濾，收集救必應(yīng)提取液。
[0010] (2)將濾液濃縮至無醇味，得浸膏。
[0011] (3)向浸膏加入適量乙酸乙酯水溶液，混勻后靜置過夜，過濾，得濾渣。
[0012] (4)將濾渣干燥，直接得到長梗冬青苷產(chǎn)品2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征 在于步驟（1)所述的乙醇水溶液的濃度按體積比為20%-70%，料液比為lg: 8~16ml，提取 次數(shù)為2~3次，每次60~120min。
[0013] 步驟（1)所述的乙醇水溶液的濃度優(yōu)選40%-70%，料液比為1 g: 14~16ml。
[0014] 步驟(3)所述的乙酸乙酯水溶液的濃度優(yōu)選50 %-60 %，次優(yōu)選30 %-70 %。料液比 為lg:2~5ml，靜置12~24h。
[0015] 最優(yōu)選的提取參數(shù)為:步驟（1)所述的乙醇水溶液的濃度按體積比為70%，料液比 為lg: 16ml，提取次數(shù)為3次，每次120min;步驟(3)所述的乙酸乙酯水溶液的濃度是按體積 比為60%，料液比為lg:5ml，靜置12h。
[0016] 本發(fā)明方法具有如下優(yōu)勢：（1)該方法為工藝簡單易行，周期短，成本低，可實(shí)現(xiàn)大 規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)。（2)長梗冬青苷產(chǎn)品產(chǎn)率高、純度高。采用HPLC外標(biāo)法測定，扣除水分與 殘留溶劑后，所得到的長梗冬青苷產(chǎn)品純度大于95%，產(chǎn)率約為3.1%，得到的長梗冬青苷 相對于原料救必應(yīng)藥材含有的長梗冬青苷轉(zhuǎn)移率可達(dá)40%以上，最高可高達(dá)55.1%。
【附圖說明】
[0017]圖1為本發(fā)明實(shí)施例1制得的長梗冬青苷產(chǎn)品的HPLC圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 下面結(jié)合具體的實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但本發(fā)明并不局限于此。
[0019] 實(shí)施例1
[0020] 取救必應(yīng)藥材lkg，加14倍量（14L)體積分?jǐn)?shù)為40 %的乙醇水溶液回流提取2次，提 取時(shí)間為90min，過濾，收集兩次提取液，合并濾液，得到救必應(yīng)提取液。
[0021] 加熱濃縮乙醇提取液，回收乙醇至無醇味，得浸膏，加入藥材兩倍量的水(2L)和乙 酸乙酯（2L)，攪拌混勻，于室溫靜置過夜（12h)，有白色片狀沉淀于水層析出，過濾，得到白 色濾渣。
[0022]常壓下烘干濾渣，即得到31.0g長梗冬青苷產(chǎn)品，產(chǎn)率為3.1 %。
[0023]以長梗冬青苷對照品（中檢所，批號11868-201001)為外標(biāo)，使用HPLC法檢測得到 的長梗冬青苷產(chǎn)品，色譜條件為使用C18色譜柱(柱長:250mm，粒徑:5μπι)，以乙腈為流動(dòng)相 Α，水為流動(dòng)相Β，梯度洗脫：0-10min，A: 10% ; 10-20min，A: 10-40%，20-60min，A:40%。 得到的長梗冬青苷產(chǎn)品扣除水分與殘留溶劑后純度為95.1%，面積歸一化純度大于98%， 整個(gè)工藝方法長梗冬青苷轉(zhuǎn)移率達(dá)到44.8%。
[0024] 實(shí)施例2
[0025]取救必應(yīng)藥材lkg，加8倍量(8L)體積分?jǐn)?shù)為30%的乙醇水溶液回流提取2次，提取 時(shí)間為90min，過濾，收集兩次提取液，合并濾液，得到救必應(yīng)提取液。
[0026]加熱濃縮乙醇提取液，回收乙醇至無醇味，得浸膏，加入藥材兩倍量的水(2L)和乙 酸乙酯（2L)，攪拌混勻，于室溫靜置過夜（12h)，有白色片狀沉淀于水層析出，過濾，得到白 色濾渣。
[0027] 常壓下烘干濾渣，即得到27.8g長梗冬青苷產(chǎn)品，產(chǎn)率為2.8%。以長梗冬青苷對照 品（中檢所，批號11868-201001)為外標(biāo)，使用HPLC法檢測得到的長梗冬青苷產(chǎn)品，色譜條件 為使用C18色譜柱(柱長:250mm，粒徑:5μπι)，以乙腈為流動(dòng)相A，水為流動(dòng)相B，梯度洗脫:0- 10min，A: 10% ; 10-20min，A: 10-40%，20-60min，A:40%。得到的長梗冬青苷產(chǎn)品扣除水 分與殘留溶劑后純度為97.6%，面積歸一化純度大于98%，整個(gè)工藝方法長梗冬青苷轉(zhuǎn)移 率達(dá)到40.6%。
[0028] 實(shí)施例3
[0029]取救必應(yīng)藥材1 kg，加14倍量（14L)體積分?jǐn)?shù)為40 %的乙醇水溶液回流提取2次，提 取時(shí)間為90min，過濾，收集兩