%疊氮鈉、體積百分比為0 · 2 % Tween-20或Triton X-100組成,其中所述 保存液pH=7.1。
[0098] (2)抗C-肽抗體包被的磁性微粒制備過(guò)程:
[0099] 取lmg抗C-肽抗體,用30K或50K的超濾離心管在8000-10000r/min下離心3_5min, 棄掉濾液及濾液中含有的疊氮鈉或一級(jí)胺,將濃縮的抗C-肽抗體加入包被緩沖液,繼續(xù)離 心,重復(fù)4-6次,將離心管倒置離心l-2min收集超濾過(guò)的抗體備用;取40-100mg帶羧基的磁 性微粒用包被緩沖液清洗4-6次,磁分離去除上清液,加入250yL活化劑和200yL偶聯(lián)劑,用 漩渦混合器充分混勻懸浮的磁性微粒,反應(yīng)30-40min,再用包被緩沖液清洗4-6次,磁分離 去除上清液,加入預(yù)處理過(guò)的抗體,添加包被緩沖液至總體積為lmL,在25°C下,用漩渦混合 器旋轉(zhuǎn)包被15-20小時(shí),反應(yīng)完成后用包被緩沖液清洗4-6次,磁分離去除上清液,加入2mL 封閉液,在25°C下,用漩渦混合器旋轉(zhuǎn)包被4-5小時(shí),最后用保存液清洗4-6次,用保存液稀 釋至 300-1200yg/mL,2-8 °C 保存。
[0100]所述吖啶酯標(biāo)記的抗c-肽抗體(R試劑)其抗c-肽抗體為單克隆抗體,標(biāo)記物為吖 啶酯或吖啶磺酰胺或吖啶磺酰胺衍生物中的任意一種。
[0101 ]所述吖啶酯標(biāo)記的抗c-肽抗體的制備方法如下:
[0102] (1)溶液的配制:
[0103] 標(biāo)記緩沖液:配制0.1M磷酸緩沖液,pH=6.4;
[0104] 保存液:由濃度為35mM Tris-HCl緩沖液或MES緩沖液或者M(jìn)OPS緩沖液、濃度為 0.18MNaCl溶液、質(zhì)量百分比為3%BSA、質(zhì)量百分比為1%海藻糖或者蔗糖、質(zhì)量百分比為 0 · 5 %疊氮鈉、體積百分比為0 · 2 % Tween-20或Tr i ton X-100,其中保存液pH=7 · 1 〇
[0105] (2)吖啶酯標(biāo)記的抗C-肽抗體制備過(guò)程:
[0106] 取lmg抗C-肽抗體,用30K或50K的超濾離心管在8000-10000r/min下離心3_5min, 棄掉濾液,加入標(biāo)記緩沖液,繼續(xù)離心,重復(fù)4-6次,將離心管倒置在8000-10000r/min離心 lmin收集超濾過(guò)的抗體備用。
[0107] 取0.01-0. lmg吖啶酯或吖啶磺酰胺或吖啶磺酰胺衍生物加入超濾過(guò)的抗體中,其 中標(biāo)記物在使用前需要用DMS0溶液或DMF溶液溶解,添加標(biāo)記緩沖液至總體積為0.5mL,37 °C避光震蕩反應(yīng)16小時(shí),反應(yīng)完成后,用快速高效蛋白純化系統(tǒng)純化,去除未結(jié)合的吖啶酯 或吖啶磺酰胺及其衍生物,收集標(biāo)記抗體,用保存液稀釋至0.1 -0.9yg/mL,2-8 °C保存。
[0108] 所述c-肽標(biāo)準(zhǔn)品的制備過(guò)程如下:
[0109] (1)溶液的配制:
[0110] 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液:由30mM Tris-HCl溶液或磷酸緩沖液、0.18M NaCl溶液、質(zhì)量百分 比為3%BSA、質(zhì)量百分比為0.5%疊氮鈉、質(zhì)量百分比為0.2%Tween-20組成,其中所述標(biāo)準(zhǔn) 品稀釋液pH=7.2。
[0111] (2)c-肽標(biāo)準(zhǔn)品制備過(guò)程:
[0112]用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液溶解C-肽抗原,配制目標(biāo)濃度為60ng/mL的C-肽抗原高濃度原液, 采用C-肽標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行標(biāo)示,測(cè)出其實(shí)際濃度值,根據(jù)實(shí)際濃度值,用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液稀釋配制 不同濃度c-肽標(biāo)準(zhǔn)品,配制好的C-肽標(biāo)準(zhǔn)品分裝到西林瓶中,每瓶lmL,凍干后,2-8°C保存。 [0113]所述樣本稀釋液為添加有表面活性劑和防腐劑的Tris緩沖液或MES緩沖液或磷酸 緩沖液。樣本稀釋液的配方如下:由濃度為30mMTris-HCl緩沖液或MES緩沖液或磷酸緩沖 液、濃度為〇. 18M NaCl溶液、質(zhì)量百分比0.5 %疊氮鈉、體積百分0.2 % Tween-20組成,其中 所述樣本稀釋液pH=7.3。
[0114] 所述反應(yīng)清洗液為添加有表面活性劑和防腐劑的0.01M磷酸鹽緩沖液,反應(yīng)清洗 液pH為7.2-7.4。
[0115] 所述預(yù)激發(fā)液由濃度為13.5g/L過(guò)氧化氫和濃度為3.5g/L硝酸組成的混合液制備 而成。
[0116] 所述激發(fā)液為氫氧化鈉水溶液,氫氧化鈉濃度為0.4mol/L。
[0117]實(shí)施例四:
[0118] 本實(shí)施例與實(shí)施例一的區(qū)別是所述c-肽抗體包被的磁性微粒的制備方法不同。
[0119] 該實(shí)施例中所述C-肽抗體包被的磁性微粒表面帶有對(duì)甲苯磺?;渲写判晕⒘?粒徑為1.5μπι,其制備方法如下:
[0120] (1)溶液的配制:
[0121 ]包被緩沖液:0.05Μ硼酸緩沖液,其中所述包被緩沖液ρΗ=9.5;
[0122] 催化劑:1L包被緩沖液添加2Μ硫酸銨
[0123] 封閉液:100mL包被緩沖液添加5g BSA;
[0124] 保存液:由濃度為25mM Tris-HCl緩沖液或MES緩沖液或者M(jìn)OPS、濃度為0.15M NaCl溶液、質(zhì)量百分比為0.5%BSA、質(zhì)量百分比為2%海藻糖或者蔗糖、質(zhì)量百分比為1%疊 氮鈉、體積百分比為〇 · 05 % Tween-20或Triton X-100組成,其中所述保存液pH=7 · 3 〇
[0125] (2) C-肽抗體包被的磁性微粒制備過(guò)程:
[0126] 取lmg抗C-肽抗體,用30K或50K的超濾離心管在8000-10000r/min下離心3_5min進(jìn) 行濃縮,棄掉濾液,加入包被緩沖液,繼續(xù)離心,重復(fù)4-6次,將離心管倒置離心lmin收集超 濾過(guò)的抗體備用。
[0127] 取40-100mg帶有對(duì)甲苯磺?;拇判晕⒘S冒痪彌_液清洗4-6次,磁分離去除 上清液,加入預(yù)處理過(guò)的抗體,添加包被緩沖液至總體積為2mL,再加入2mL催化劑,在37 °C 下,用漩渦混合器旋轉(zhuǎn)包被18-20小時(shí),反應(yīng)完成后再加入lmL封閉液,在37°C下,繼續(xù)用漩 渦混合器旋轉(zhuǎn)包被5-7小時(shí),最后用保存液清洗4-6次,用保存液稀釋至300-1200yg/mL,2-8 °C保存。
[0128] 實(shí)施例五
[0129] 本實(shí)施例與實(shí)施例二的區(qū)別是所述C-肽抗體包被的磁性微粒的制備方法不同。 [0130]該實(shí)施例中所述C-肽抗體包被的磁性微粒表面帶有對(duì)甲苯磺?;?,其中磁性微粒 粒徑為3μL?,其制備方法如下:
[0131] (1)溶液的配制:
[0132] 包被緩沖液:0.1Μ硼酸緩沖液,其中所述包被緩沖液ρΗ=8.5;
[0133] 催化劑:1L包被緩沖液添加4Μ硫酸銨
[0134] 封閉液:100mL包被緩沖液添加10g BSA;
[0135] 保存液:由濃度為50mM Tris-HCl緩沖液或MES緩沖液或者M(jìn)OPS、濃度為0.2M NaCl 溶液、質(zhì)量百分比為5 %BSA、質(zhì)量百分比為0.5 %海藻糖或者蔗糖、質(zhì)量百分比為0.05 %疊 氮鈉、體積百分比為l%Tween-20或Triton X-100組成,其中所述保存液ρΗ=6·9〇
[0136] (2) C-肽抗體包被的磁性微粒制備過(guò)程:
[0137] 取lmg抗C-肽抗體,用30Κ或50Κ的超濾離心管在8000-10000r/min下離心3_5min進(jìn) 行濃縮,棄掉濾液,加入包被緩沖液,繼續(xù)離心,重復(fù)4-6次,將離心管倒置離心lmin收集超 濾過(guò)的抗體備用。
[0138] 取40-100mg帶對(duì)甲苯磺?;拇判晕⒘S冒痪彌_液清洗4-6次,磁分離去除上 清液,加入預(yù)處理過(guò)的抗體,添加包被緩沖液至總體積為5mL,再加入5mL催化劑,在37 °C下, 用漩渦混合器旋轉(zhuǎn)包被18-20小時(shí),反應(yīng)完成后再加入lmL封閉液,在37°C下,繼續(xù)用漩渦混 合器旋轉(zhuǎn)包被5-7小時(shí),最后用保存液清洗4-6次,用保存液稀釋至300-1200yg/mL,2-8°C保 存。
[0139]實(shí)施例六
[0140]本實(shí)施例與實(shí)施例三的區(qū)別是所述C-肽抗體包被的磁性微粒的制備方法不同。
[0141] 該實(shí)施例中所述C-肽抗體包被的磁性微粒表面帶有對(duì)甲苯磺?;?,其中磁性微粒 粒徑為2μL?,其制備方法如下:
[0142] (1)溶液的配制:
[0143] 包被緩沖液:0.075Μ硼酸緩沖液,其中所述包被緩沖液ρΗ=9.2;
[0144] 催化劑:1L包被緩沖液添加3Μ硫酸銨
[0145] 封閉液:100mL包被緩沖液添加8g BSA;
[0146] 保存液:由濃度為35mM Tris-HCl緩沖液或MES緩沖液或者M(jìn)OPS、濃度為0.18M NaCl溶液、質(zhì)量百分比為2%BSA、質(zhì)量百分比為1%海藻糖或者蔗糖、質(zhì)量百分比為0.5%疊 氮鈉、體積百分比為〇 · 5 % Tween-20或Triton X-100組成,其中所述保存液pH=7 · 1 〇
[0147] (2) C-肽抗體包被的磁性微粒制備過(guò)程:
[0148] 取lmg抗C-肽抗體,用30K或50K的超濾離心管在8000-10000r/min下離心3_5min進(jìn) 行濃縮,棄掉濾液,加入包被緩沖液,繼續(xù)離心,重復(fù)4-6次,將離心管倒置離心lmin收集超 濾過(guò)的抗體備用。
[0149]取40-100mg帶對(duì)甲苯磺?;拇判晕⒘S冒痪彌_液清洗4-6次,磁分離去除上 清液,加入預(yù)處理過(guò)的抗體,添加包被緩沖液至總體積為3mL,再加入4mL催化劑,在37 °C下, 用漩渦混合器旋轉(zhuǎn)包被18-20小時(shí),反應(yīng)完成后再加入lmL封閉液,在37°C下,繼續(xù)用漩渦混 合器旋轉(zhuǎn)包被5-7小時(shí),最后用保存液清洗4-6次,用保存液稀釋至300-1200yg/mL,2-8°C保 存。
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