專利名稱：一種用于抗病無核葡萄胚挽救培養(yǎng)及成苗培養(yǎng)的培養(yǎng)液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種農(nóng)用化肥，特別是一種用于抗病無核葡萄胚挽救培養(yǎng)及成苗培養(yǎng)的培養(yǎng)液。
背景技術(shù)：
葡萄因其含有豐富的營養(yǎng)成份已成為人們喜愛食用的主要水果之一，其栽培面積及產(chǎn)量在世界范圍內(nèi)成上升趨勢(shì)，而無核葡萄無論鮮食、制干和加工均已成為世界水果消費(fèi)的重要方向。在美國鮮食葡萄的80％是無核葡萄，澳大利亞、南非及歐洲等葡萄生產(chǎn)大國對(duì)無核葡萄的研究與開發(fā)也極為重視，而無核葡萄的育種方法是為生產(chǎn)提供優(yōu)質(zhì)品種的重要環(huán)節(jié)，美國《園藝科學(xué)》雜志1990年25卷第4期393～398頁報(bào)道的以歐洲葡萄無核品種間雜交后進(jìn)行胚挽救的技術(shù)是一種經(jīng)濟(jì)、高效、快速的無核葡萄育種方法，該方法近10多年來得到迅猛發(fā)展，但該方法培養(yǎng)的多數(shù)無核葡萄品種其突出缺點(diǎn)是缺乏抗病性。國外葡萄育種者從一個(gè)世紀(jì)前就試圖將歐洲葡萄無核基因與圓葉葡萄抗病基因有機(jī)結(jié)合在一起，但成效不大，美國《植物細(xì)胞》雜志1994年37卷第1期55～59頁發(fā)表的胚挽救技術(shù)是利用將無核品種作母本與圓葉葡萄作父本進(jìn)行雜交而生成無核葡萄胚珠進(jìn)行胚挽救培養(yǎng)，但其成苗率極柢，僅為1.25％，且植株可育性極低。目前，在世界范圍內(nèi)，其葡萄育種科學(xué)家都在為缺乏適宜有效的葡萄抗性材料和培養(yǎng)基而困惑。
中國野生葡萄沒有美洲葡萄種群的狐臭味，且抗病抗逆性強(qiáng)，產(chǎn)量高，又與歐亞葡萄種群無核品種親和性好，易于雜交，是抗病無核育種的寶貴資源，西北農(nóng)林科技大學(xué)園藝學(xué)院于2000年借助胚挽救技術(shù)用已有的培養(yǎng)基對(duì)歐洲無核葡萄作母本、中國野生葡萄作父本雜交的胚珠進(jìn)行培養(yǎng)，其成苗率電僅達(dá)到2.5％，其根本原因是缺少對(duì)胚珠進(jìn)行挽救培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是解決歐洲葡萄無核品種與抗病的中國野生葡萄雜交后，進(jìn)行葡萄胚挽救過程中因缺少適宜的培養(yǎng)基而使胚發(fā)育率及成苗率極低的問題，而發(fā)明了一種適宜抗病無核葡萄胚挽救培養(yǎng)及成苗培養(yǎng)的培養(yǎng)液。
本發(fā)明的組分及濃度配比為硝酸鈣 0.055％～0.065％硝酸鉀 0.015％～0.017％氯化鉀 0.006％～0.007％硝酸銨 0.035％～0.037％硫酸鎂 0.07％～0.08％硫酸鈉 0.018％～0.022％磷酸二氫鈉 0.002％～0.0023％硫酸鎂 2.8×10-4％～3.2×10-4％硼酸4.5×10-5％～5.5×10-5％硫酸鋅 4.5×10-5％～5.5×10-5％氯化鈷 2.0×10-6％～3.0×10-6％硫酸銅 2.0×10-6％～3.0×10-6％鉬酸鈉 2.0×10-6％～3.0×10-6％檸檬酸鐵8.0×10-4％～1.2×10-3％鹽酸硫胺素 2.2×10-5％～2.8×10-5％
鹽酸吡哆素2.2×10-5％～2.8×10-5％煙酸 2.2×10-4％～2.8×10-4％甘氨酸2.8×10-4％～3.2×10-4％肌醇 4.5×10-3％～5.5×10-3％水解酪蛋白0.045％～0.055％L-半胱氨酸鹽酸鹽 0.003％～0.004％活性炭0.1％～0.15％蔗糖 5.5％～6.5％其余為水本發(fā)明各組分的優(yōu)選濃度配比為硝酸鈣0.058％～0.062％硝酸鉀0.015％～0.016％氯化鉀0.006％～0.007％硝酸銨0.035％～0.037％硫酸鎂0.07％～0.08％硫酸鈉0.019％～0.020％磷酸二氫鈉0.002％～0.0022％硫酸鎂2.9×10-4％～3.1×10-4％硼酸 4.8×10-5％～5.2×10-5％硫酸鋅4.8×10-5％～5.2×10-5％氯化鈷2.4×10-6％～2.6×10-6％硫酸銅2.4×10-6％～2.6×10-6％鉬酸鈉2.4×10-6％～2.6×10-6％
檸檬酸鐵9.0×10-4％～1.1×10-3％鹽酸硫胺素 2.4×10-5％～2.6×10-5％鹽酸吡哆素 2.4×10-5％～2.6×10-5％煙酸2.4×10-4％～2.6×10-4％甘氨酸 2.9×10-4％～3.1×10-4％肌醇4.8×10-3％～5.2×10-3％水解酪蛋白 0.048％～0.052％L-半胱氨酸鹽酸鹽0.003％～0.004％活性炭 0.12％～0.15％蔗糖5.8％～6.2％其余為水本發(fā)明各組分的最佳濃度配比為硝酸鈣 0.06％硝酸鉀 0.016％氯化鉀 0.0065％ 硝酸銨 0.036％硫酸鎂 0.075％ 硫酸鈉 0.02％磷酸二氫鈉 0.00215％ 硫酸鎂 3.0×10-4％硼酸5.0×10-5％ 硫酸姓 5.0×10-5％氯化鈷 2.5×10-6％ 硫酸銅 2.5×10-6％鉬酸鈉 2.5×10-6％ 檸檬酸鐵 1.0×10-3％鹽酸硫胺素 2.5×10-5％ 鹽酸吡哆素 2.5×10-5％煙酸2.5×10-4％ 甘氨酸 3.0×10-4％肌醇0.005％ 水解酪蛋白 0.05％L-半胱氨酸鹽酸鹽0.003％ 活性炭 0.15％
蔗糖6.0％ 其余為水本發(fā)明組分合理，制作簡單，使用本發(fā)明所獲得的抗病無核葡萄胚發(fā)育整齊，畸形胚少，胚發(fā)育率高，成苗率高。以西北農(nóng)林科技大學(xué)葡萄種質(zhì)資源圃的中國野生葡萄雜種“北醇”為父本，以新疆葡萄瓜果開發(fā)研究中心葡萄品種資源圃的無核品種“底來特”作母本雜交，授粉48天，無菌剝?nèi)∨咧榻臃N于本發(fā)明中進(jìn)行胚珠培養(yǎng)，胚發(fā)育率為15.88％，成苗率達(dá)到12.38％。另以“愛莫無核”作母本，“北醇”作父本雜交，授粉48天～52天，接種于本發(fā)明中進(jìn)行胚珠培養(yǎng)，胚發(fā)育率達(dá)20.02％，成苗率達(dá)10.68％，處于目前世界領(lǐng)先水平。
本發(fā)明的配制方法是首先將各組分(除活性炭外)分別用水溶解，然后混合，再加入活性炭，制成培養(yǎng)液。
本發(fā)明的使用方法是在培養(yǎng)液中加0.55～0.7％的瓊脂粉，將其加熱至沸騰使瓊脂粉徹底溶解形成混合液，再趁熱將混合液分裝于培養(yǎng)瓶中，待其冷卻后形成培養(yǎng)基。將無核葡萄胚珠或剝?nèi)〉呐呓臃N于培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。
本發(fā)明主要用于抗病無核葡萄胚挽救培養(yǎng)，若加入一定量的激素后可用于成苗培養(yǎng)。
本發(fā)明可用于抗病無核葡萄胚挽救培養(yǎng)及成苗培養(yǎng)；無核葡萄胚挽救培養(yǎng)及成苗的培養(yǎng)；極早熟葡萄胚的培養(yǎng)；葡萄無性胚狀體誘導(dǎo)的培養(yǎng)；轉(zhuǎn)基因植株的獲得；多倍體葡萄胚培養(yǎng)；部分核果類果樹胚的培養(yǎng)。
權(quán)利要求
1.一種用于抗病無核葡萄胚挽救培養(yǎng)及成苗培養(yǎng)的培養(yǎng)液，其特征在于它是由下述原料組分及濃度配比而成硝酸鈣0.055％～0.065％硝酸鉀0.015％～0.017％氯化鉀0.006％～0.007％硝酸銨0.035％～0.037％硫酸鎂0.07％～0.08％硫酸鈉0.018％～0.022％磷酸二氫鈉0.002％～0.0023％硫酸鎂2.8×10-4％～3.2×10-4％硼酸 4.5×10-5％～5.5×10-5％硫酸鋅4.5×10-5％～5.5×10-5％氯化鈷2.0×10-6％～3.0×10-6％硫酸銅2.0×10-6％～3.0×10-6％鉬酸鈉2.0×10-6％～3.0×10-6％檸檬酸鐵 8.0×10-4％～1.2×10-3％鹽酸硫胺素2.2×10-5％～2.8×10-5％鹽酸吡哆素2.2×10-5％～2.8×10-5％煙酸 2.2×10-4％～2.8×10-4％甘氨酸2.8×10-4％～3.2×10-4％肌醇 4.5×10-3％～5.5×10-3％水解酪蛋白0.045％～0.055％L-半胱氨酸鹽酸鹽 0.003％～0.004％活性炭0.1％～0.15％蔗糖 5.5％～6.5％其余為水
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于抗病無核葡萄胚挽救培養(yǎng)及成苗培養(yǎng)的培養(yǎng)液，其特征在于各原料組分的優(yōu)選濃度配比是硝酸鈣0.058％～0.062％硝酸鉀0.015％～0.016％氯化鉀0.006％～0.007％硝酸銨0.035％～0.037％硫酸鎂0.07％～0.08％硫酸鈉0.019％～0.020％磷酸二氫鈉0.002％～0.0022％硫酸鎂2.9×10-4％～3.1×10-4％硼酸 4.8×10-5％～5.2×10-5％硫酸鋅4.8×10-5％～5.2×10-5％氯化鈷2.4×10-6％～2.6×10-6％硫酸銅2.4×10-6％～2.6×10-6％鉬酸鈉2.4×10-6％～2.6×10-6％檸檬酸鐵 9.0×10-4％～1.1×10-3％鹽酸硫胺素2.4×10-5％～2.6×10-5％鹽酸吡哆素2.4×10-5％～2.6×10-5％煙酸 2.4×10-4％～2.6×10-4％甘氨酸 2.9×10-4％～3.1×10-4％肌醇 4.8×10-3％～5.2×10-3％水解酪蛋白 0.048％～0.052％L-半胱氨酸鹽酸鹽 0.003％～0.004％活性炭 0.12％～0.15％蔗糖 5.8％～6.2％其余為水
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于抗病無核葡萄胚挽救培養(yǎng)及成苗培養(yǎng)的培養(yǎng)液，其特征在于各原料組分的最佳濃度配比是硝酸鈣 0.06％ 硝酸鉀0.016％氯化鉀 0.0065％ 硝酸銨0.036％硫酸鎂 0.075％硫酸鈉0.02％磷酸二氫鈉 0.00215％ 硫酸鎂3.0×10-4％硼酸 5.0×10-5％ 硫酸姓5.0×10-5％氯化鈷 2.5×10-6％ 硫酸銅2.5×10-6％鉬酸鈉 2.5×10-6％ 檸檬酸鐵 1.0×10-3％鹽酸硫胺素 2.5×10-5％ 鹽酸吡哆素2.5×10-5％煙酸 2.5×10-4％ 甘氨酸3.0×10-4％肌醇 0.005％水解酪蛋白0.05％L-半胱氨酸鹽酸鹽 0.003％活性炭0.15％蔗糖 6.0％ 其余為水
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于抗病無核葡萄胚挽救培養(yǎng)及成苗培養(yǎng)的培養(yǎng)液，它是由有機(jī)營養(yǎng)、無機(jī)營養(yǎng)溶解配制而成，它是用于對(duì)雜交授粉后剝?nèi)〉呐咧檫M(jìn)行離體胚珠內(nèi)胚培養(yǎng)，以獲得大量雜交后代的胚挽救幼苗，使用本發(fā)明可使胚發(fā)育率達(dá)到20％，成苗率達(dá)到12％，且胚發(fā)育整齊，畸形胚少，加速了抗病無核葡萄的育種進(jìn)程，使其達(dá)到世界領(lǐng)先地位，本發(fā)明將為培育抗病無核葡萄新品種開創(chuàng)廣闊的前景。
文檔編號(hào)A01H4/00GK1397532SQ02139330
公開日2003年2月19日 申請(qǐng)日期2002年8月5日 優(yōu)先權(quán)日2002年8月5日
發(fā)明者王躍進(jìn), 潘學(xué)軍, 萬怡震, 張劍俠, 唐冬梅 申請(qǐng)人:西北農(nóng)林科技大學(xué)