專利名稱：三倍體山銀花及其培育方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物育種技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及三倍體山銀花及其培育方法。
背景技術(shù)：
山銀花為忍冬科忍冬屬植物灰氈毛忍冬Lonicera macranthoides Hand.-Mazz.、 χ 1/1 S.# Lonicera hypoglauca Miq. > S.# Lonicera confuseDC.
Lonicera fulvotomentosa Hsu et S. C. Cheng的干燥花蕾或帶初開的花，為2010年版《中 國藥典》所收載，其主要成分為綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙、川續(xù)斷皂苷乙，是清熱解毒、抗 菌消炎良藥，并具有很好的保健作用。與同屬植物金銀花相比，其花蕾無絨毛，適用面廣；綠 原酸含量高，是提取綠原酸單體的首選原料；上市早，恰逢醫(yī)藥、食品行業(yè)用季，搶占了市場 先機(jī)。因此，山銀花被廣泛用于醫(yī)藥、食品、日用化工、獸藥等領(lǐng)域，市場供不應(yīng)求。但是，常 規(guī)山銀花的花蕾較短、花蕾期短、易開放、花壁薄，采摘不便，制成干品后外觀差，多數(shù)植株 的產(chǎn)量較低，種植經(jīng)濟(jì)效益低。前人已從常規(guī)山銀花植株(染色體核型指數(shù)為2η = 18)中選育出成花早、花蕾 長、綠原酸含量高、豐產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)的品種，但花蕾期短，易開放，采摘不便，制成干品后外觀差，如 廣西馬山縣的紅腺忍冬，約在每年的4月1日開始進(jìn)入綠蕾期，從綠蕾期到銀花期只有10 天；也選育出花冠一直不開裂、花期長的品種，但花壁薄，綠原酸含量低，上市晚，如廣西資 源縣的灰氈毛忍冬，每年的6月20日才進(jìn)入綠蕾期。前人對同科同屬植物金銀花植株進(jìn) 行了多倍體誘導(dǎo)，育成的同源四倍體植株(染色體核型指數(shù)為4η = 36)，枝葉粗大，花蕾數(shù) 增多，花壁增厚，綠原酸含量增高，豐產(chǎn)性增強(qiáng)；但花蕾期短，易開放，呈對生狀花序，采摘不 便。迄今為止，三倍體山銀花(染色體核型指數(shù)為3η = 27)及培育方法還未見有公開報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種三倍體山銀花及其培育方法。由這種方法培 育出的三倍體山銀花抗逆性強(qiáng)、枝葉粗壯、成花早、花蕾大、無絨毛、花壁厚、花期長、花冠一 直不開裂、有效成分含量高、豐產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)、采收加工方便、外形美觀。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明三倍體山銀花的培育方法，包括以下步驟1)選擇二倍體紅腺忍冬和灰氈毛忍冬的成年植株作為原始親本，分別按常規(guī)技術(shù) 種植，并以兩者互為雜交授粉對應(yīng)植株；2)在上述親本的花蕾剛進(jìn)入綠蕾期時，用化學(xué)誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)其花蕾，使之形成二倍 體大花粉；3)采摘經(jīng)誘導(dǎo)且處于白蕾期的花，取出花藥，干燥，篩選出二倍體大花粉，低溫保 存；4)將二倍體大花粉與對應(yīng)植株的單倍體卵細(xì)胞雜交，植株結(jié)實后得到雜交種子；5)將雜交種子繁殖成完整植株，篩選出三倍體植株；6)將三倍體植株按常規(guī)技術(shù)種植，現(xiàn)蕾后得到三倍體山銀花。
上述方法中，步驟1)中，作為原始親本的二倍體紅腺忍冬的成年植株是指從染色體核型指數(shù) 為2η = 18的紅腺忍冬中選擇具有開花早、花蕾長、有效成分含量高、呈團(tuán)狀花序、豐產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn) 性狀特征的成年植株，如產(chǎn)于廣西馬山縣的具有上述性狀特征的紅腺忍冬的成年植株；作 為原始親本的二倍體灰氈毛忍冬的成年植株是指從染色體核型指數(shù)為2η = 18的灰氈毛 忍冬中選擇具有花期長、花冠一直不開裂、有效成分含量高、呈團(tuán)狀花序、豐產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)性狀特 征的成年植株，如產(chǎn)于廣西資源縣的具有上述性狀特征的灰氈毛忍冬的成年植株。步驟2)中，化學(xué)誘導(dǎo)劑為秋水仙素或戊炔草胺，其中秋水仙素的質(zhì)量濃度為 0.01 1.0%的，戊炔草胺的摩爾濃度為150ymol/L 300ymol/L。具體的誘導(dǎo)方法可 以是用保濕透氣性好的材料將整個花蕾包裹， 滴入秋水仙素或戊炔草胺，每天滴3 6mL， 連續(xù)滴5 7天，去掉包裹材料；或者是用微量注射器將上述藥液沿花蕾縱軸方向注入花蕾 中，每天注射2次，每次40 50 μ L，連續(xù)注射3 5天。步驟3)中，干燥的方式為常溫下用干燥劑干燥或真空冷凍干燥。選用常溫干燥 時，干燥劑為無水氯化鈣或無水硫酸鎂或硅膠等，干燥的時間為36 48小時；選用真空冷 凍干燥時，干燥的溫度為-40 _70°C，真空度為400 500Pa，干燥的時間為8 15小時。 篩選出的二倍體大花粉應(yīng)在冷藏條件下保存，一般在0 _4°C保存。步驟4)中，雜交的方法為選擇對應(yīng)植株上由綠蕾期生長至白蕾期需時最長的花 朵，將花蕾去雄、套袋，于次日上午把二倍體大花粉涂于去雄花蕾的花柱上即可。本發(fā)明還包括由上述方法培育得到的三倍體山銀花。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所述方法先將花粉干燥，使篩選二倍體大花粉更容易，進(jìn) 行低溫保存，能長期保持花粉活力，有效解決雜交花期不遇的難題，顯著縮短育種時間，操 作簡便易行；由該方法培育得到的三倍體植株，融合了兩個植株的優(yōu)良特性，具有抗逆性 強(qiáng)、枝葉粗壯、直立性強(qiáng)、成花早、花蕾大、無絨毛、花壁厚、花期長、花冠一直不開裂、呈團(tuán)狀 花序、有效成分含量高、豐產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)、采收加工方便、外形美觀等特點，遺傳優(yōu)勢高于二倍體和 四倍體植株，種植經(jīng)濟(jì)效益高。
具體實施例方式下面以實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明并不局限于這些實施例。為方便描述，以下實施例中用“植株A”表示“從染色體核型指數(shù)為2η = 18的紅 腺忍冬中選擇的具有開花早、花蕾長、有效成分含量高、呈團(tuán)狀花序、豐產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)性狀特征的 成年植株”；用“植株B”表示“從染色體核型指數(shù)為2η = 18的灰氈毛忍冬中選擇具有花期 長、花冠一直不開裂、有效成分含量高、呈團(tuán)狀花序、豐產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)性狀特征的成年植株”。實施例11)將產(chǎn)于廣西馬山縣的具有開花早、花蕾長、有效成分含量高、呈團(tuán)狀花序、豐產(chǎn) 穩(wěn)產(chǎn)性狀特征的紅腺忍冬的成年植株(簡稱植株1)、產(chǎn)于廣西資源縣的具有花期長、花冠 一直不開裂、有效成分含量高、呈團(tuán)狀花序、豐產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)性狀特征的灰氈毛忍冬的成年植株 (簡稱植株2)分別按常規(guī)技術(shù)種植；2)當(dāng)植株1的花蕾剛進(jìn)入綠蕾期時，用脫脂棉分別將花蕾裹住，將質(zhì)量濃度為 0. 5%的秋水仙素滴入脫脂棉中，每天滴5次，第一次滴2mL，其余每次滴lmL，連續(xù)滴7天，然后去掉包裹材料；3)采摘植株1經(jīng)誘導(dǎo)且處于白蕾期的花，取出花藥平鋪在干凈的白紙上(每平方厘米不超過10?；ㄋ?，放置于盛有無水氯化鈣的干燥器內(nèi)，在常溫條件下密封干燥48小 時，收集干花粉，通過檢測不同粒徑花粉的染色體核型指數(shù)來確定二倍體大花粉的粒徑，然 后按常規(guī)技術(shù)篩選出二倍體大花粉，在0°C狀態(tài)下保存?zhèn)溆茫?)選擇植株2上由綠蕾期生長至白蕾期需時最長的花朵，將花蕾去雄、套袋，于次 日上午把二倍體大花粉涂于植株2去雄花蕾的花柱上，植株結(jié)實后得到雜交種子；5)將雜交種子繁育成苗，取其莖尖分生組織進(jìn)行染色體核型指數(shù)的檢測，篩選出 三倍體植株；6)將三倍體植株按常規(guī)技術(shù)種植，現(xiàn)蕾后得到三倍體山銀花。經(jīng)檢測，所培育出的山銀花的染色體核型指數(shù)為3η = 27，植株抗逆性強(qiáng)、枝葉粗 壯、直立性強(qiáng)、成花早、花蕾大、無絨毛、花壁厚、花期長、花冠一直不開裂、呈團(tuán)狀花序、制成 干品后外形美觀，干花中綠原酸的含量達(dá)8% (重量)(HPLC法測定)。實施例21)將植株Α、植株B分別按常規(guī)技術(shù)種植；2)當(dāng)植株A的花蕾剛進(jìn)入綠蕾期時，用脫脂棉分別將花蕾裹住，將摩爾濃度為 280 μ mol/L的戊炔草胺滴入脫脂棉中，每天滴3次，每次滴lmL，連續(xù)滴7天，然后去掉包裹 材料；3)采摘植株A經(jīng)誘導(dǎo)且處于白蕾期的花，取出花藥平鋪在干凈的白紙上(每平方 厘米不超過10?；ㄋ?，放置于裝有無水硫酸鎂的干燥器內(nèi)，在常溫條件下密封干燥40小 時，收集干花粉，通過檢測不同粒徑花粉的染色體核型指數(shù)來確定二倍體大花粉的粒徑，然 后按常規(guī)技術(shù)篩選出二倍體大花粉，在_2°C狀態(tài)下保存?zhèn)溆茫?)選擇植株B上由綠蕾期生長至白蕾期需時最長的花朵，將花蕾去雄、套袋，于次 日上午把二倍體大花粉涂于植株B去雄花蕾的花柱上，植株結(jié)實后得到雜交種子；5)將雜交種子繁育成苗，取其莖尖分生組織進(jìn)行染色體核型指數(shù)的檢測，篩選出 三倍體植株；6)將三倍體植株按常規(guī)技術(shù)種植，現(xiàn)蕾后得到三倍體山銀花。經(jīng)檢測，所培育出的山銀花的染色體核型指數(shù)為3η = 27，植株抗逆性強(qiáng)、枝葉粗 壯、直立性強(qiáng)、成花早、花蕾大、無絨毛、花壁厚、花期長、花冠一直不開裂、呈團(tuán)狀花序、制成 干品后外形美觀，干花中綠原酸的含量達(dá)7% (重量)(HPLC法測定)。實施例31)將產(chǎn)于廣西馬山縣的具有開花早、花蕾長、有效成分含量高、呈團(tuán)狀花序、豐產(chǎn) 穩(wěn)產(chǎn)性狀特征的紅腺忍冬的成年植株(簡稱植株1)、產(chǎn)于廣西資源縣的具有花期長、花冠 一直不開裂、有效成分含量高、呈團(tuán)狀花序、豐產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)性狀特征的灰氈毛忍冬的成年植株 (簡稱植株2)分別按常規(guī)技術(shù)種植；2)當(dāng)植株2的花蕾剛進(jìn)入綠蕾期時，用微量注射器將摩爾濃度為150 μ mol/L的戊 炔草胺溶液沿花蕾縱軸方向注入到花蕾基部，每天注射2次，每次50μ L，連續(xù)注射3天；3)采摘植株2經(jīng)誘導(dǎo)且處于白蕾期的花，取出花藥薄攤在臺式真空冷凍干燥器的 擱物盤中(每平方厘米不超過10?；ㄋ?，在-60°c，真空度為478Pa的條件下干燥8小時，收集干花粉，通過檢測不同粒徑花粉的染色體核型指數(shù)來確定二倍體大花粉的粒徑，然 后按常規(guī)技術(shù)篩選出二倍體大花粉，在0°c狀態(tài)下保存?zhèn)溆茫?)選擇植株1由綠蕾期生長至白蕾期需時最長的花朵，將花蕾去雄、套袋，于次日 上午將二倍體大花粉涂于植株1去雄花蕾的花柱上，植株結(jié)實后得到雜交種子；
5)將雜交種子繁育成苗，取其根尖分生組織進(jìn)行染色體核型指數(shù)的檢測，篩選出 三倍體植株；6)將三倍體植株按常規(guī)技術(shù)種植，現(xiàn)蕾后得到三倍體山銀花。經(jīng)檢測，所培育出的山銀花的染色體核型指數(shù)為3η = 27，植株抗逆性強(qiáng)、枝葉粗 壯、直立性強(qiáng)、成花早、花蕾大、無絨毛、花壁厚、花期長、花冠一直不開裂、呈團(tuán)狀花序、制成 干品后外形美觀，干花中綠原酸的含量達(dá)7. 8% (重量)(HPLC法測定)。實施例41)將植株Α、植株B分別按常規(guī)技術(shù)種植；2)當(dāng)植株B的花蕾剛進(jìn)入綠蕾期時，用微量注射器將質(zhì)量濃度為0. 02%的秋水仙 素溶液沿花蕾縱軸方向注入到花蕾基部，每天注射2次，每次45 μ L，連續(xù)注射5天；3)采摘植株B經(jīng)誘導(dǎo)且處于白蕾期的花，取出花藥薄攤在臺式真空冷凍干燥器的 擱物盤中(每平方厘米不超過10?；ㄋ?，在-70°c，真空度為420Pa的條件下干燥8小 時，收集干花粉，通過檢測不同粒徑花粉的染色體核型指數(shù)來確定二倍體大花粉的粒徑，然 后按常規(guī)技術(shù)篩選出二倍體大花粉，在-4°C狀態(tài)下保存?zhèn)溆茫?)選擇植株A由綠蕾期生長至白蕾期需時最長的花朵，將花蕾去雄、套袋，于次日 上午將二倍體大花粉涂于植株A去雄花蕾的花柱上，套袋栽培，植株結(jié)實后得到雜交種子；5)將雜交種子繁育成苗，取其根尖分生組織進(jìn)行染色體核型指數(shù)的檢測，篩選出 三倍體植株；6)將三倍體植株按常規(guī)技術(shù)種植，現(xiàn)蕾后得到三倍體山銀花。經(jīng)檢測，所培育出的山銀花的染色體核型指數(shù)為3η = 27，植株抗逆性強(qiáng)、枝葉粗 壯、直立性強(qiáng)、成花早、花蕾大、無絨毛、花壁厚、花期長、花冠一直不開裂、呈團(tuán)狀花序、制成 干品后外形美觀，干花中綠原酸的含量達(dá)7. 5% (重量)(HPLC法測定)。
權(quán)利要求
三倍體山銀花的培育方法，其特征在于包括以下步驟1)選擇二倍體紅腺忍冬和灰氈毛忍冬的成年植株作為原始親本，分別按常規(guī)技術(shù)種植，并以兩者互為雜交授粉對應(yīng)植株；2)在上述親本的花蕾剛進(jìn)入綠蕾期時，用化學(xué)誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)其花蕾，使之產(chǎn)生二倍體大花粉；3)采摘經(jīng)誘導(dǎo)且處于白蕾期的花，取出花藥，干燥，篩選出二倍體大花粉，低溫保存；4)將二倍體大花粉與對應(yīng)植株的單倍體卵細(xì)胞雜交，植株結(jié)實后得到雜交種子；5)將雜交種子繁殖成完整植株，篩選出三倍體植株；6)將三倍體植株按常規(guī)技術(shù)種植，現(xiàn)蕾后得到三倍體山銀花。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三倍體山銀花的培育方法，其特征在于步驟1)中，作為原 始親本的二倍體紅腺忍冬的成年植株是指從染色體核型指數(shù)為2η = 18的紅腺忍冬中選 擇具有開花早、花蕾長、有效成分含量高、呈團(tuán)狀花序、豐產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)性狀特征的成年植株；作為 原始親本的二倍體灰氈毛忍冬的成年植株是指從染色體核型指數(shù)為2η = 18的灰氈毛忍 冬中選擇具有花期長、花冠一直不開裂、呈團(tuán)狀花序、有效成分含量高、豐產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)性狀特征 的成年植株。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三倍體山銀花的培育方法，其特征在于步驟2)中，化學(xué)誘 導(dǎo)劑為秋水仙素或戊炔草胺，其中秋水仙素的質(zhì)量濃度為0. 01 1. 0%的，戊炔草胺的摩 爾濃度為 150 μ mol/L 300 μ mol/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的三倍體山銀花的培育方法，其特征在于步驟2)中，誘導(dǎo)的 方法為原始親本的花蕾剛進(jìn)入綠蕾期時，用保濕透氣性好的材料將整個花蕾包裹，滴入秋 水仙素或戊炔草胺，每天滴3 6mL，連續(xù)滴5 7天，去掉包裹材料；或者是用微量注射器 將上述藥液沿花蕾縱軸方向注入花蕾中，每天注射2次，每次40 50 μ L，連續(xù)注射3 5 天。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三倍體山銀花的培育方法，其特征在于步驟3)中，干燥的 方式為常溫下用干燥劑干燥或真空冷凍干燥。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三倍體山銀花的培育方法，其特征在于步驟4)中，雜交的 方法為選擇對應(yīng)植株上由綠蕾期生長至白蕾期需時最長的花朵，將花蕾去雄、套袋，于次 日上午把二倍體大花粉涂于去雄花蕾的花柱上。
7.權(quán)利要求1 6中任何一項所述的培育方法培育得到的三倍體山銀花。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種三倍體山銀花及其培育方法。包括以下步驟選擇二倍體紅腺忍冬和灰氈毛忍冬的成年植株作為原始親本，分別按常規(guī)技術(shù)種植，并以兩者互為雜交授粉對應(yīng)植株；在上述親本剛進(jìn)入綠蕾期時，誘導(dǎo)其形成二倍體大花粉；采摘經(jīng)誘導(dǎo)且處于白蕾期的花，取出花藥，干燥，篩選出二倍體大花粉低溫保存；將二倍體大花粉與對應(yīng)植株的單倍體卵細(xì)胞雜交，得到雜交種子；將雜交種子繁殖成完整植株，篩選出三倍體植株；將三倍體植株按常規(guī)技術(shù)種植，現(xiàn)蕾后得到三倍體山銀花。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明能更快地篩選出二倍體大花粉，并解決雜交花期不遇難題，顯著縮短育種時間，操作簡便易行，其遺傳優(yōu)勢高于二倍體或四倍體植株，種植經(jīng)濟(jì)效益高。
文檔編號A01H1/08GK101816285SQ20101017336
公開日2010年9月1日 申請日期2010年5月14日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月14日
發(fā)明者楊洪元, 羽運飛, 蔣劍剛, 蔣向軍, 覃吉勝, 覃慧慧 申請人:桂林亦元生現(xiàn)代生物技術(shù)有限公司