專利名稱：不含黃曲霉毒素的印楝素干粉的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及農(nóng)藥制備領(lǐng)域，尤其印楝素干粉的制備。
背景技術(shù)：
印楝(Azadirachta indica A.Juss)原產(chǎn)于印度、巴基斯坦、斯里蘭卡和非洲部分地區(qū)，目前，在我國海南、云南和四川局部地區(qū)均有大面積的種植。印楝含有以印楝素(azadirachtin)為主的80余種殺蟲活性物質(zhì)，可防治10目400余種農(nóng)林、倉庫和衛(wèi)生害蟲，其種籽抽提物被認(rèn)為是一種廣譜殺蟲劑。
早在1968年就分離出了印楝素，然而，由于印楝素易水解和光解，直到1985年才出現(xiàn)第1個印楝殺蟲劑產(chǎn)品，目前國外也有印楝素微乳劑、可濕性粉劑、懸浮劑或其它一些水基型制劑，但是，由于不能解決印楝素的穩(wěn)定性問題，實際用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的還是印楝素乳油制劑，并且乳油制劑的持效期比較短。
黃曲霉毒素(AFT)是農(nóng)產(chǎn)品霉變產(chǎn)生的對人體有害的主要物質(zhì)，是農(nóng)產(chǎn)品進(jìn)出口檢驗的主要對象之一，其急性毒性是氰化鉀的10倍，黃曲霉毒素B1更是已知致癌物中致癌力最強(qiáng)的一種。與大多數(shù)農(nóng)產(chǎn)品一樣，在貯存過程中，由于曲霉菌(Aspergillus niger)的侵染，印楝種籽也含有大量的黃曲霉毒素(aflatoxins)，目前我國印楝素原藥的制備方法均沒有去除黃曲霉毒素，因此，其中的黃曲霉毒素不僅危害人畜的健康，還會影響我國農(nóng)產(chǎn)品的出口。
中國發(fā)明專利CN 1049091C和CN 1233399A公布了高含量印楝素的提取工藝，它們是通過硅膠柱或吸付層析來實現(xiàn)的，其制備工藝復(fù)雜，成本太高，并且均沒有涉及到印楝素原藥的穩(wěn)定性問題和除去黃曲霉毒素的步驟。
技術(shù)內(nèi)容為了克服我國印楝原藥的不足，本發(fā)明提供了一種不含黃曲霉素且穩(wěn)定性好的印楝素干粉的制備方法，該干粉適于作為多種印楝素制劑的原藥，并且除去了黃曲霉毒素。
本方法的目的是這樣實現(xiàn)的將烘干的印楝種籽去殼后，壓榨種仁，除去印楝油，得到印楝餅，用極性溶劑浸提印楝餅，溶劑與印楝餅的重量比為5～10∶1，浸提12～24小時，過濾除去濾渣，真空蒸餾濾液除去溶劑，得到干的抽提物，用甲醇溶解抽提物，甲醇與抽提物的重量比為1∶6～15，在抽提物的甲醇溶液中加入水，邊加邊振蕩，使?jié)饪s液與水的體積比為5～20∶13，出現(xiàn)絮狀沉淀，過濾濾除沉淀，用飽和鹽水稀釋濾液，飽和鹽水與濾液體積比為0.5～1∶1，用不溶于水的有機(jī)溶劑萃取稀釋液，不溶于水的有機(jī)溶劑與稀釋液的體積比為1～10∶1，收集有機(jī)溶劑層并真空濃縮，在濃縮液中加入堿性氧化劑溶液，堿性氧化劑溶液與濃縮液的體積比為1∶10～20，60℃水浴加熱2～30分鐘，冷卻至室溫，加入脫水劑除去水分，脫水劑與有機(jī)溶液的重量比為1∶15～25，過濾除去脫水劑，將有機(jī)溶劑濃縮至干即得印楝素干粉。所加入堿性氧化劑的目的是除去黃曲霉毒素。
上述飽和鹽水中的鹽為硫化物、鹵化物、硫酸鹽、碳酸鹽、硝酸鹽、碳酸氫鹽、磷酸鹽、磷酸二氫鹽和磷酸氫鹽中的任一種，如NaNO3、Mg(NO3)2、KNO3、Ca(NO3)2、Zn(NO3)2、NaCl、MgCl2、KCl、CaCl2、ZnCl2、NH4Cl、Na2SO4、MgSO4、K2SO4、(NH4)2SO4、Na2CO3或K2CO3中的任一種。
上述不溶于水的有機(jī)溶劑為三氯甲烷、二氯甲烷、甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸乙酯和丁酸乙酯中的任一種。
上述氧化劑為H2O2、MgO2、CaO2、BaO2、ZnO2、Na2O2、K2O2、過氧化物異丁烷、過硼酸中的任一種。
上述堿性溶液為NaHCO3、KHCO3、Mg(HCO3)2、Ca(HCO3)2飽和溶液中的任一種。
本發(fā)明的堿性氧化劑溶液首選H2O2+飽和NaHCO3溶液。
上述吸水劑為Na2SO4、Mg2SO4、Cu2SO4、Ca(Cl)2、MgO、硅膠中的任一種。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點干粉易干燥，含水量少，干粉體積小，有利于貯存運輸。干粉中不含黃曲霉毒素?；钚晕镔|(zhì)更穩(wěn)定，有利于制備多種印楝素制劑。
實例一(1)非穩(wěn)定性印楝素干粉的制備稱量300g印楝種籽，去殼壓榨除油，得到印楝餅，在常溫下用800ml甲醇浸提印楝餅12～24小時，再分別用300ml甲醇提取2次，每次12小時，過濾濾除殘渣，合并濾液，真空濃縮濾液至250g，將濃縮物與500g飽和食鹽水和500g乙酸乙酯(1∶1，v/v)混合，振蕩30分鐘，再將混合液于分液漏斗中分離，收集乙酸乙酯層，將5gMg2SO4加入到乙酸乙酯層中吸收水份，濾除Mg2SO4，將濾出液真空蒸發(fā)至干即得到4g含量為10％的印楝素干粉。(2)穩(wěn)定性好的含11.3％印楝素干粉的制備用乙酸乙酯溶解1g(1)制備的干粉，再加入0.5～3g飽和NaHCO3溶液和0.1～0.9g30％H2O2，邊加邊振蕩，60℃下水浴加熱30分鐘，混合物冷卻至室溫后置于分液漏斗中，除去下層的水相，在乙酸乙酯相中加入2gMg2SO4，攪拌20分鐘，常壓過濾濾除Mg2SO4，濾液真空濃縮蒸發(fā)至干即得到0.8g含量為11.3％印楝素干粉。實例二穩(wěn)定性好的含32％印楝素干粉的制備將320g印楝種籽去殼壓榨去油，得到140g印楝餅，在常溫下將印楝餅加入到700g甲醇中，浸提12～24小時，常壓過濾濾除殘渣，真空濃縮濾液至36g。再將60g水加到濃縮液中，邊加邊攪拌，完畢后繼續(xù)攪拌30分鐘，真空過濾濾除沉淀物，用108g飽和食鹽水稀釋濾液后，用572g乙酸乙酯萃取濾液，再用202g乙酸乙酯萃取1次，合并乙酸乙酯層，真空將其濃縮至3.1g，在濃縮液中加入2.7g飽和NaHCO3和0.5g35％H2O2，邊加邊攪拌，于60℃水浴中加熱30分鐘，混合物冷卻至室溫后置于分液漏斗中，除去下層的水相，在乙酸乙酯相中加入0.5g Na2SO4，攪拌20分鐘，常壓過濾濾除Na2SO4，將濾液真空濃縮蒸發(fā)至干即得到1.2g含量為32％印楝素干粉。穩(wěn)定性檢測將實例一(1)、(2)和實例二中的印楝素干粉置于安培瓶中，密封后于54℃貯存，貯前和貯后14天與28天用HPLC測定干粉中的印楝素含量。試驗結(jié)果如下。
熱貯后印楝素干粉中的含量

液相色譜法檢測干粉中黃曲霉毒素B1(AFT B1)被檢樣為實例一(1)、(2)和實例二中所制備的印楝素干粉。色譜柱46mm i.d.×15cm不銹鋼柱Luna5μC18流動相甲醇+水(3∶7v/v)檢測波長激發(fā)波長365nm，發(fā)射波長455nm流速1ml/min印楝素干粉中黃曲霉毒素B1(AFT B1)的含量

權(quán)利要求
1.印楝素干粉的制備方法將烘干的印楝種籽去殼后，壓榨種仁，除去印楝油，得到印楝餅，用極性溶劑浸提印楝餅，溶劑與印楝餅的重量比為5～10∶1，浸提12～24小時，過濾除去濾渣，真空蒸餾濾液除去溶劑，得到干的抽提物，用甲醇溶解抽提物，甲醇與抽提物的重量比為1∶6～15，在抽提物的甲醇溶液中加入水，邊加邊振蕩，使?jié)饪s液與水的體積比為5～20∶13，出現(xiàn)絮狀沉淀，過濾濾除沉淀，用飽和鹽水稀釋濾液，飽和鹽水與濾液體積比為0.5～10∶1，用不溶于水的有機(jī)溶劑萃取稀釋液，不溶于水的有機(jī)溶劑與稀釋液的體積比為1～10∶1，收集有機(jī)溶劑層并真空濃縮，在濃縮液中加入堿性氧化劑溶液，堿性氧化劑溶液與濃縮液的體積比為1∶10～20，60℃水浴加熱2～30分鐘，冷卻至室溫，加入脫水劑除去水分，脫水劑與有機(jī)溶液的重量比為1∶15～25，過濾除去脫水劑，將有機(jī)溶劑濃縮至干即得印楝素干粉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述印楝素干粉的制備方法，其特征在于飽和鹽水中的鹽為NaNO3、Mg(NO3)2、KNO3、Ca(NO3)2、Zn(NO3)2、NaCl、MgCl2、KCl、CaCl2、ZnCl2、NH4Cl；Na2SO4、MgSO4、K2SO4、(NH4)2SO4、Na2CO3或K2CO3中的任一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述印楝素干粉的制備方法，其特征在于不溶于水的有機(jī)溶劑為三氯甲烷、二氯甲烷、甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸乙酯或丁酸乙酯中的任一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述印楝素干粉的制備方法，其特征在于氧化劑為H2O2、MgO2、CaO2、BaO2、ZnO2、Na2O2、K2O2、過氧化物異丁烷、過硼酸中的任一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述印楝素干粉的制備方法，其特征在于堿性溶液為NaHCO3、KHCO3、Mg(HCO3)2或Ca(HCO3)2飽和溶液中的任一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述印楝素干粉的制備方法，其特征在于吸水劑為Na2SO4、Mg2SO4、Cu2SO4、Ca(Cl)2、MgO或硅膠中的任一種。
全文摘要
本發(fā)明涉及農(nóng)藥制備方法。用極性溶劑提取印楝種仁，真空濃縮除去有機(jī)溶劑，得到干的印楝種核抽提物，再用甲醇溶解種核抽提物，在抽提物的甲醇溶液中加入適量的水，出現(xiàn)絮狀沉淀，濾除沉淀，用飽和鹽水稀釋濾出液，用不溶于水的有機(jī)溶劑萃取稀釋液，收集有機(jī)相，除去有機(jī)相中部分溶劑得到濃縮液，在濃縮液中加入氧化劑和堿性溶液，水浴加熱，冷卻至室溫，在有機(jī)相中加入脫水劑除去水分，過濾濾除脫水劑，將有機(jī)相濃縮至干即得到印楝素干粉。
文檔編號A01N43/90GK1423939SQ0215209
公開日2003年6月18日 申請日期2002年12月2日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月2日
發(fā)明者徐漢虹, 張志祥 申請人:華南農(nóng)業(yè)大學(xué)