專利名稱：滿天星種苗的繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地，涉及一種植物滿天星(Gypsophilapaniculata)種苗的繁殖方法。
背景技術(shù)：
滿天星(Gypsophila paniculata)又名絲石竹，它非常適合作插花材料，在消費(fèi)市場上，與玫瑰、康乃馨、郁金香等齊名，是重要的切花品種。滿天星觀賞品種難收種，扦插繁殖系數(shù)低、速度慢，利用組織培養(yǎng)技術(shù)繁殖其種苗，對(duì)于它的切花規(guī)模化生產(chǎn)、保持品種優(yōu)良特性都是及其重要的。滿天星組培技術(shù)已有報(bào)道，但存在著滿天星試管苗玻璃化，根系不發(fā)達(dá)，規(guī)模化生產(chǎn)方法復(fù)雜，難操作等缺點(diǎn)，本發(fā)明旨克服已有技術(shù)存在的不足，提供一種控制及無糖介質(zhì)生根的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種滿天星種苗的繁殖方法，本方法在不改變?cè)瓉砼囵B(yǎng)條件下，僅對(duì)MS培養(yǎng)基進(jìn)行改良，就能克服滿天星試管苗玻璃化；用珍珠巖替代瓊脂作生根基質(zhì)，加入適量稀薄營養(yǎng)液，不加糖，也無須通入CO2氣體，小苗在有限的密閉空間范圍內(nèi)，在原有培養(yǎng)室的條件下生根培養(yǎng)15-16d，效果遠(yuǎn)好于MS瓊脂固化培養(yǎng)基，它發(fā)根整齊，根系發(fā)達(dá)，有利于后期的移栽成活。此方法簡單、好操作、易推廣，為簡化滿天星種苗規(guī)?；a(chǎn)程序，降低生產(chǎn)成本提供了依據(jù)。
為了達(dá)到本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案滿天星種苗的繁殖方法，利用組織培養(yǎng)技術(shù)繁殖滿天星種苗，在改良MS培養(yǎng)基中，附加激素BA0.8-1.5mg/L，NAA0.2mg/L和馬鈴薯提取汁，并用0.7％的瓊脂固化，按蔗糖30g/L，在PH值5.8-6、培養(yǎng)室溫度26±2℃、光照強(qiáng)度1500-2000LX、光照時(shí)間12h/d下培養(yǎng)，用珍珠巖替代瓊脂作生根基質(zhì)，加入營養(yǎng)液。不加糖，也不通入CO2氣體。
上述方法的改良MS培養(yǎng)基為在MS中補(bǔ)加NaH2PO4.H2O150mg/L，Ca(NO3)2.4H2O500mg/L，添加馬鈴薯提取汁200g/L。
上述方法珍珠巖消毒方法采用未使用過的珍珠巖直接使用；使用過的珍珠巖先將其中的雜質(zhì)揀出，然后在清水中清洗、浸泡，取出曬干之后放入高壓滅菌鍋內(nèi)，125℃持續(xù)滅菌30分鐘后用作生根基質(zhì)。
上述方法中營養(yǎng)液為1/4MS無機(jī)鹽添加1ppmNAA。
上述方法中馬鈴薯提取汁是取新鮮馬鈴薯，洗干凈、去皮、切片，用蒸餾水和馬鈴薯的比例為2∶1煮開10分鐘，紗布過濾后的汁液即可。
本發(fā)明的具體方法為改良MS培養(yǎng)基是以MS中補(bǔ)加NaH2PO4.H2O150mg/L，Ca(NO3)2.4H2O500mg/L，以及馬鈴薯汁液200g/L，馬鈴薯汁液是取新鮮馬鈴薯，洗干凈、去皮、切片，用蒸餾水和馬鈴薯的比例為2∶1煮開10分鐘，過濾即可，然后附加激素BA0.8-1.5mg/L，NAA0.2mg/L，并用0.7％的瓊脂固化，按蔗糖30g/L，在PH值5.8-6、培養(yǎng)室溫度26±2℃、光照強(qiáng)度1500-2000LX、光照時(shí)間12h/d下培養(yǎng)，用珍珠巖替代瓊脂作生根基質(zhì)，使用過的珍珠巖先將其中的雜質(zhì)揀出，然后在清水中清洗、浸泡，取出曬干之后放入高壓滅菌鍋內(nèi)，125℃持續(xù)滅菌30分鐘進(jìn)行消毒，用作生根基質(zhì)，并加入1/4MS無機(jī)鹽和1ppmNAA的營養(yǎng)液，不加糖，不通入CO2氣體。
具體實(shí)施例方式下面用本發(fā)明的實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明內(nèi)容不以
實(shí)施例1本發(fā)明采用以MS中補(bǔ)加NaH2PO4.H2O150mg/L，Ca(NO3)2.4H2O500mg/L，添加馬鈴薯提取汁即取新鮮馬鈴薯，洗干凈、去皮、切片，用蒸餾水和馬鈴薯的比例為2∶1煮開10分鐘，紗布過濾后的汁液200g/L為改良MS培養(yǎng)基，附加激素BA0.8-1.5mg/L，NAA0.2mg/L，并用0.7％的瓊脂固化，按蔗糖30g/L，在PH值5.8-6、培養(yǎng)室溫度26±2℃、光照強(qiáng)度1500-2000LX、光照時(shí)間12h/d下培養(yǎng)，用珍珠巖替代瓊脂作生根基質(zhì)，使用過的珍珠巖先將其中的雜質(zhì)揀出，然后在清水中清洗、浸泡，取出曬干之后放入高壓滅菌鍋內(nèi)，125℃持續(xù)滅菌30分鐘進(jìn)行消毒，用作生根基質(zhì)，并加入1/4MS無機(jī)鹽和1ppmNAA的營養(yǎng)液，不加糖，也不通入CO2氣體。
下面用本發(fā)明的詳細(xì)試驗(yàn)過程和結(jié)果來闡述本發(fā)明。
1、材料和方法用剪刀取8-10cm長健壯的滿天星(Gypsophila paniculata)嫩枝，剝?nèi)ト~片，不要損傷到葉芽和頂芽，常規(guī)消毒后，用解剖刀將頂芽切下，莖桿切割為帶一對(duì)葉芽的小段，接入改良培養(yǎng)基中，放在培養(yǎng)室培養(yǎng)。
改良培養(yǎng)基為MS中補(bǔ)加NaH2PO4.H2O150mg/L，Ca(NO3)2.4H2O500mg/L，添加馬鈴薯提取汁200g/L，然后用0.7％的瓊脂固化、蔗糖30g/L、PH值5.8-6。培養(yǎng)室溫度26±2℃，光照強(qiáng)度1500-2000LX，光照時(shí)間12h/d。馬鈴薯提取汁的制法稱新鮮馬鈴薯，洗干凈后去皮、切片，用蒸餾(蒸餾水和馬鈴薯的比例為2∶1)煮開10min，紗布過濾后的汁液即可。
珍珠巖消毒方法新買來的珍珠巖可直接使用，無須消毒。使用過的必須消毒，首先將珍珠巖中的雜質(zhì)揀出，然后裝入編織袋，扎緊袋口，放入清水中清洗、浸泡，取出曬干之后放入高壓滅菌鍋內(nèi)，125℃持續(xù)滅菌30min即可，取出備用。營養(yǎng)液為1/4MS無機(jī)鹽添加1ppmNAA。
2、結(jié)果和討論2-1、芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)外植體接種在(1)MS+BA1+NAA0.2、(2)改良MS+BA1+NAA0.2，培養(yǎng)基上誘導(dǎo)培養(yǎng)，它們使外植體隱芽萌動(dòng)、伸長的能力基本相同，接種5天，肉眼就能看到，芽明顯伸長，10天伸長2cm；21天伸長5-6cm，頂芽萌發(fā)8-12個(gè)不定芽，莖段萌發(fā)約8個(gè)不定芽。兩種培養(yǎng)基上培養(yǎng)出的苗有差異，(1)誘導(dǎo)出透明狀玻璃化試管苗的比例大，隨著繼代次數(shù)增加，正常苗趨于0，(2)誘導(dǎo)出的表現(xiàn)健壯正常，玻璃化苗在2％以下。將小苗切割為4-5段，用(2)或(3)改良MS+BA0.8+NAA0.2，繼代增殖培養(yǎng)，每段組織能培養(yǎng)出8-12不定芽。如此循環(huán)增殖擴(kuò)大，按25天為一個(gè)培養(yǎng)周期，每個(gè)周期增殖8倍計(jì)算，理論上，培養(yǎng)5個(gè)頂芽，半年后可獲得一百多萬苗。在繼代培養(yǎng)中，增加BA的濃度，叢芽數(shù)會(huì)增加(表1)，但每個(gè)芽的生長勢或粗壯程度會(huì)被削弱，從而影響下一次繼代繁殖；在增殖培養(yǎng)過程中，可根據(jù)苗的生長勢適當(dāng)調(diào)整BA的濃度，經(jīng)長期試驗(yàn)，BA濃度控制在0.8-1.5mg/l為佳。
表1不同濃度的激素水平對(duì)不定芽形成的影響

改變培養(yǎng)基成分，添加馬鈴薯汁，玻璃化苗能控制在2％以下，通過調(diào)節(jié)激素配比、增加糖、瓊脂濃度，調(diào)配光照強(qiáng)度、時(shí)間、培養(yǎng)溫度以及封口膜通氣狀況等綜合措施與已有技術(shù)比較，方法更簡便、易學(xué)，經(jīng)濟(jì)上也更合理。
2-2、生根和移栽將小苗帶頂芽切下2cm，轉(zhuǎn)入以下培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)試驗(yàn)，(4)MS+NAA0.2、(5)MS+NAA0.2、(6)MS+NAA0.2+IBA0.2、(7)MS+NAA0.2+IBA0.2，7天后可觀察到，部分小苗莖桿上開始有白色根尖長出，生根情況不很整齊，20天后觀察統(tǒng)計(jì)，結(jié)果表明這四組培養(yǎng)基，后兩組比前兩組稍好，(7)比(6)稍好，其生根率約89％。根大多為氣生根，生長在培養(yǎng)基上方，長在培養(yǎng)基里的很少，根又細(xì)又長相互纏繞，每條長2.5cm以上，出瓶時(shí)非常容易拉斷或受傷，沖洗培養(yǎng)基時(shí)，再次受傷，此時(shí)進(jìn)行移栽，感染死亡非常嚴(yán)重，成活率很低。為此，產(chǎn)生了用珍珠巖作基質(zhì)，進(jìn)行生根試驗(yàn)的想法。
從國外引入無糖培養(yǎng)微繁殖和閉鎖型種苗生產(chǎn)的理念后，已有技術(shù)在非洲菊、綠巨人、玫瑰等花卉上進(jìn)行了探索。其方法是去除培養(yǎng)基中的糖，從而降低污染率；用塑料泡沫、蛭石、珍珠巖、巖棉、陶粒、纖維素等多孔無機(jī)材料做培養(yǎng)基質(zhì)；培養(yǎng)室采用閉鎖型，以便控制溫度、光照、濕度，提高CO2利用率，防止病菌進(jìn)入。其創(chuàng)新之處在于，CO2代替糖作為碳源，降低微生物污染，促使培養(yǎng)物從異養(yǎng)到自養(yǎng)；用多孔無機(jī)材料作培養(yǎng)基質(zhì)，改善了根區(qū)周圍的小環(huán)境，有利于發(fā)根。但該方法要求培養(yǎng)室密閉，需要一套CO2供氣系統(tǒng)，其前期投入較高。
在此原理基礎(chǔ)上，為了降低生產(chǎn)成本，本發(fā)明對(duì)滿天星進(jìn)行了無糖介質(zhì)生根方法的簡化(簡稱為簡化無糖培養(yǎng))試驗(yàn)，該方法使用珍珠巖消毒后用作滿天星試管苗的生根基質(zhì)，容器可選用無色透明塑料盒，或類似材質(zhì)的容器，高不低于7cm，7-10cm之間較好，長、寬在30cm以內(nèi)，以便于操作，本實(shí)施例采用的容器外型長、寬、高分別為30cm、20cm、8cm。把珍珠巖倒入盒中鋪平，厚2.5cm，將試管苗從瓶中輕輕取出，用自來水洗干凈，摘下3-4節(jié)，約3cm長的小枝條，扦插入珍珠巖中，插入深度0.8-1cm，株行距間隔為2×2cm，之后，澆營養(yǎng)液，營養(yǎng)液用量掌握在以珍珠巖吸水100％為好，用蓋子蓋嚴(yán)、密閉，放入培養(yǎng)室中培養(yǎng)(培養(yǎng)室為普通培養(yǎng)室，無CO2通氣裝置)，7d后拔出小苗就可看到與珍珠巖接觸的地方以及切口處，有白色根尖長出，約有5個(gè)以上；15d后，拔出小苗就可以觀察到，它已發(fā)育為須根系，上面沾滿了珍珠巖，手拿小苗根莖部分，量根冠長、寬約為2×1.5cm，地上部分為2-3cm。此時(shí)，可將小苗直接移栽到營養(yǎng)土中，注意遮蔭、保溫、澆水，成活率在95％以上。
小苗在14-16d內(nèi)移栽較合適，此時(shí)，根系和地上部的生長勢處于最佳，20d后，小苗開始抽長、拔高，苗的品質(zhì)及移栽成活率開始下降，全過程容器內(nèi)濕度基本不變，基質(zhì)中不加糖和其他有機(jī)物質(zhì)，污染率趨于0；生根苗只要掌握在16d內(nèi)移栽，就可以保證較高的移栽成活率，從生產(chǎn)成本角度看，它節(jié)省了時(shí)間、節(jié)約了能源；它具備了無糖微培養(yǎng)的優(yōu)勢和意義，節(jié)省了閉鎖培養(yǎng)室和CO2供氣裝置的投資。此外，本發(fā)明簡化無糖培養(yǎng)可以在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行，方法簡單，勞動(dòng)強(qiáng)度低，與培養(yǎng)基生根比較，生根率高、根系發(fā)育好、出苗時(shí)不傷根，有利于移栽成活(表2)。
表2滿天星在瓊脂固化培養(yǎng)基與簡化無糖培養(yǎng)中生根及移栽后的情況比較

本發(fā)明結(jié)果表明以改良MS為基本培養(yǎng)基，附加激素BA0.8-1.5mg/L(單位下同)，NAA0.2，其培養(yǎng)效果最佳，玻璃化試管苗，可控制在2％以下。將小苗從試管中取出，洗去培養(yǎng)基，摘取3-4節(jié)約3cm長的枝條，插入事先準(zhǔn)備好的，盛有無糖介質(zhì)珍珠巖的無色透光塑料密閉容器中，澆稀薄營養(yǎng)液，放入普通培養(yǎng)室進(jìn)行生根培養(yǎng)，5-7d后小苗開始發(fā)根，16d根系發(fā)育完好，移到室外營養(yǎng)杯中栽培，注意保溫、遮蔭、澆水，成活率在95％以上。
權(quán)利要求
1.滿天星種苗的繁殖方法，利用組織培養(yǎng)技術(shù)繁殖滿天星種苗，其特征在于在改良MS培養(yǎng)基中附加激素BA0.8-1.5mg/L，NAA0.2mg/L和馬鈴薯提取汁，并用0.7％的瓊脂固化，按蔗糖30g/L，在PH值5.8-6、培養(yǎng)室溫度26±2℃、光照強(qiáng)度1500-2000LX、光照時(shí)間12h/d下培養(yǎng)，用珍珠巖替代瓊脂作生根基質(zhì)，加入營養(yǎng)液，不加糖，也不通入CO2氣體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于改良MS培養(yǎng)基為在MS中補(bǔ)加NaH2PO4.H2O150mg/L，Ca(NO3)2.4H2O500mg/L，并加馬鈴薯提取汁200g/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于未使用過的珍珠巖直接使用；使用過的珍珠巖先將其中的雜質(zhì)揀出，然后在清水中清洗、浸泡，取出曬干之后放入高壓滅菌鍋內(nèi)，125℃持續(xù)滅菌30分鐘后用作生根基質(zhì)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于營養(yǎng)液為1/4MS無機(jī)鹽添加1ppmNAA。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于馬鈴薯提取汁是取新鮮馬鈴薯，洗干凈、去皮、切片，用蒸餾水和馬鈴薯的比例為2∶1煮開10分鐘，紗布過濾后的汁液即可。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3或4或5所述的方法，其特征在于以MS中補(bǔ)加NaH2PO4.H2O150mg/L，Ca(NO3)2.4H2O500mg/L，添加馬鈴薯提取汁即取新鮮馬鈴薯，洗干凈、去皮、切片，用蒸餾水和馬鈴薯的比例為2∶1煮開10分鐘，紗布過濾后的汁液200g/L為改良MS培養(yǎng)基，附加激素BA0.8-1.5mg/L，NAA0.2mg/L，并用0.7％的瓊脂固化，按蔗糖30g/L，在PH值5.8-6、培養(yǎng)室溫度26±2℃、光照強(qiáng)度1500-2000LX、光照時(shí)間12h/d下培養(yǎng)，用珍珠巖替代瓊脂作生根基質(zhì)，使用過的珍珠巖先將其中的雜質(zhì)揀出，然后在清水中清洗、浸泡，取出曬干之后放入高壓滅菌鍋內(nèi)，125℃持續(xù)滅菌30分鐘進(jìn)行消毒，用作生根基質(zhì)，并加入1/4MS無機(jī)鹽和1ppmNAA的營養(yǎng)液，不加糖，也不通入CO2氣體。
全文摘要
滿天星種苗的繁殖方法，利用組織培養(yǎng)技術(shù)繁殖滿天星種苗，在改良MS培養(yǎng)基中，附加激素BA0.8－1.5mg/L，NAA0.2mg/L和馬鈴薯提取汁，并用0.7％的瓊脂固化，按蔗糖30g/L，在pH值5.8－6、培養(yǎng)室溫度26±2℃、光照強(qiáng)度1500－2000LX、光照時(shí)間12h/d下培養(yǎng)，用珍珠巖替代瓊脂作生根基質(zhì)，加入營養(yǎng)液。不加糖，也不通入CO
文檔編號(hào)A01G9/00GK1582625SQ20041002277
公開日2005年2月23日 申請(qǐng)日期2004年6月9日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月9日
發(fā)明者郭瑞賢, 胡虹, 羅桂芬, 王 華 申請(qǐng)人:中國科學(xué)院昆明植物研究所