專利名稱：對蝦人工誘變方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種人工誘變方法，尤其是涉及一種通過60Co-γ射線對各種經(jīng)濟對蝦進(jìn)行人工誘變的方法。
背景技術(shù)：
電離輻射的生物學(xué)效應(yīng)極其復(fù)雜多樣，它能致癌又能治癌；能引起基因突變亦能誘導(dǎo)生物系統(tǒng)對DNA損傷的修復(fù)功能；能破壞核酸、蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，抑制其生物合成，引起膜損傷和酶的失活，抑制細(xì)胞分裂甚至導(dǎo)致細(xì)胞和機體死亡；同時，輻射也能刺激核酸與蛋白質(zhì)的合成，酶活性的提高，加速細(xì)胞分裂，促進(jìn)生物的生長發(fā)育并提高產(chǎn)量等等。
經(jīng)過半個多世紀(jì)的發(fā)展，人工誘變技術(shù)在作物育種方面已經(jīng)得到了長足的發(fā)展，結(jié)合了基本的人工選育以及現(xiàn)代分子標(biāo)記技術(shù)成為一種現(xiàn)代化的育種技術(shù)，在基礎(chǔ)研究和育種實踐中都取得了豐碩的成果，為提高育種效率、促進(jìn)農(nóng)業(yè)增產(chǎn)發(fā)揮了重要作用。已有的育種實踐表明，盡管誘變手段和誘變源不斷擴展和完善，但是輻射誘變技術(shù)仍然是誘變育種的主要手段，其中以γ射線的應(yīng)用更為廣泛，據(jù)統(tǒng)計，人工誘變育成的作物品種中用γ射線輻射的占75％～84.2％。
盡管輻射誘變技術(shù)在植物育種研究中得到廣泛的應(yīng)用，但是在動物育種研究中，國內(nèi)外現(xiàn)在還鮮見報道，郭光榮等報道了有關(guān)60Co-γ輻射用于水稻育種的研究(郭光榮，詹慶才，曾曙珍，等.60Co-γ輻射和外源總DNA導(dǎo)入相結(jié)合用于水稻育種的研究I.對水稻遺傳變異的影響[J].湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，1999，414-16)，而有關(guān)60Co-γ射線應(yīng)用于對蝦的人工誘變育種技術(shù)至今未見到相關(guān)的研究報道。有關(guān)農(nóng)作物方面的人工誘變方法一般如下取作物的種子、種芽或愈傷組織等生長分裂旺盛的組織或器官置于紫外線、X射線或γ射線下進(jìn)行適宜劑量的照射，通過人工選育對具有優(yōu)良性狀的變異個體進(jìn)行篩選以培育新品系。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對已有的對蝦誘變方法所存在的不足，提供一種新的適宜于各種經(jīng)濟對蝦的最佳誘變劑量，在保持對蝦的生命活力的前提下，最大程度地提高對蝦的抗逆性、存活率和生長率，最終達(dá)到創(chuàng)造新種質(zhì)、培育新品種的人工誘變方法。
本發(fā)明的步驟為1、篩選海區(qū)經(jīng)過交配，性腺成熟，活力良好即將進(jìn)行產(chǎn)卵的親蝦，以保證受精卵質(zhì)量；2、將篩選好的親蝦置于網(wǎng)箱及水盆中，并通過網(wǎng)箱上的氣頭進(jìn)行充氣，以確保誘變過程中親蝦的活力以及誘變的效果；3、將網(wǎng)箱及水盆放置于輻射裝置的輻射范圍內(nèi)，進(jìn)行人工誘變，輻射面積保持在1000～1600cm2之間，人工誘變的劑量為10～3000cGy，最佳劑量為100～1500cGy，以確保親蝦的安定以及輻射的效率；4、達(dá)到預(yù)計的誘變劑量后停止誘變，以減低60Co-γ射線對親蝦的傷害作用；5、將經(jīng)過誘變的親蝦放入育苗池中等待產(chǎn)卵，進(jìn)行蝦苗的培育，以防止在此之前流產(chǎn)；6、對孵化出來的蝦苗進(jìn)行檢測，確定變異程度。
人工誘變過程中水溫在18～25℃之間，最好為20～24℃。
對孵化出來的蝦苗可進(jìn)行DNA(脫氧核糖核酸)的提取，利用不同引物進(jìn)行PCR反應(yīng)(多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))后，通過電泳技術(shù)進(jìn)行檢測，將數(shù)據(jù)輸入電腦進(jìn)行統(tǒng)計從而確定變異程度，對誘變產(chǎn)生的效果進(jìn)行評估，以結(jié)合人工選育技術(shù)縮短育種時間。
與已有的相關(guān)技術(shù)相比，本發(fā)明的突出優(yōu)點是1、利用60Co-γ射線進(jìn)行照射的技術(shù)相當(dāng)成熟，操作簡單可行，安全可靠；2、通過60Co-γ射線對甲殼類對蝦屬各種經(jīng)濟對蝦進(jìn)行誘變，可造成大量變異，從中得到的具有優(yōu)良性狀的變異可以直接或間接應(yīng)用于生產(chǎn)，大大縮短對各種對蝦的優(yōu)良性狀進(jìn)行人工選育的時間，創(chuàng)造巨大的經(jīng)濟效益。
本發(fā)明為采用60Co-γ射線對甲殼類對蝦屬中各種經(jīng)濟對蝦如長毛對蝦(Penaeuspenicillarus)、日本對蝦(Penaeus.japonicus)、斑節(jié)對蝦(Penaeus.monodon)等進(jìn)行人工誘變，人為地造成物種的基因突變，打破基因連鎖，促進(jìn)各種對蝦產(chǎn)生大量變異，從中篩選優(yōu)良性狀進(jìn)而培育抗逆性強、生長快的對蝦養(yǎng)殖新品種，其市場需求潛力巨大，推廣之后的經(jīng)濟效益將相當(dāng)可觀。
具體實施例方式
實施例1從捕撈到的野生長毛對蝦(Penaeus penicillarus)群體中篩選30～40尾活力較好的親蝦按比例分別放置7～10尾于自制的容器之中，共設(shè)計3個實驗組，調(diào)整水溫為20～24℃，輻射面積保持在1000～1600cm2之間，誘變劑量保持在250～500cGy，經(jīng)過誘變的親蝦放入育苗池育苗，對孵化出來的無節(jié)幼體通過隨機擴增多態(tài)DNA(RAPD)技術(shù)進(jìn)行遺傳差異的檢測。實驗結(jié)果表明，孵化率≥60％，存活率≥70％，遺傳相似系數(shù)≥0.9，同正常未經(jīng)誘變的后代相比，遺傳差異并不顯著。
實施例2從捕撈到的野生日本對蝦(Penaeus.japonicus)群體中篩選70～80尾活力較好的親蝦按比例分別放置6～8尾于自制的容器之中，共設(shè)計3個實驗組，調(diào)整水溫為19～22℃，誘變劑量保持在800～1200cGy，經(jīng)過誘變的親蝦放入育苗池育苗，對孵化出來的無節(jié)幼體通過RAPD技術(shù)進(jìn)行遺傳差異的檢測。實驗結(jié)果表明，孵化率≥15％，存活率≥50％，遺傳相似系數(shù)≥0.7，同正常未經(jīng)誘變的后代相比，遺傳差異較為顯著。
實施例3與實施例1類似，其不同在于誘變劑量增加到1000～1500cGy，調(diào)整水溫為18～22℃。實驗結(jié)果表明，孵化率≥25％，存活率≥45％，遺傳相似系數(shù)≥0.8，同正常未經(jīng)誘變的后代相比，遺傳差異較為顯著。
實施例4與實施例2類似，調(diào)整誘變劑量為100～500cGy之間，水溫為21～24℃。實驗結(jié)果表明，孵化率≥30％，存活率≥55％，遺傳相似系數(shù)≥0.75，同正常未經(jīng)誘變的后代相比，遺傳差異較為顯著。
實施例5與實施例1類似，其不同在于選用斑節(jié)對蝦(Penaeus.monodon)，誘變劑量為500～800cGy，水溫為22～25℃。
實施例6與實施例1類似，其不同在于選用斑節(jié)對蝦(Penaeus.monodon)，誘變劑量為10～100cGy，水溫為21～22℃。
權(quán)利要求
1.對蝦人工誘變方法，其特征在于其步驟為1)篩選海區(qū)經(jīng)過交配，性腺成熟，活力良好即將進(jìn)行產(chǎn)卵的親蝦；2)將篩選好的親蝦置于網(wǎng)箱及水盆中，并通過網(wǎng)箱上的氣頭進(jìn)行充氣；3)將網(wǎng)箱及水盆放置于輻射裝置的輻射范圍內(nèi)，進(jìn)行人工誘變；4)達(dá)到預(yù)計的誘變劑量后停止誘變；5)將經(jīng)過誘變的親蝦放入育苗池中等待產(chǎn)卵，進(jìn)行蝦苗的培育；6)對孵化出來的蝦苗進(jìn)行檢測，確定變異程度。
2.如權(quán)利要求1所述的對蝦人工誘變方法，其特征在于在步驟3)中，輻射的面積為1000～1600cm2。
3.如權(quán)利要求1所述的對蝦人工誘變方法，其特征在于在步驟3)中，輻射的劑量為10～3000cGy。
4.如權(quán)利要求3所述的對蝦人工誘變方法，其特征在于在步驟3)中，輻射的劑量為100～1500cGy。
5.如權(quán)利要求1所述的對蝦人工誘變方法，其特征在于人工誘變過程中水溫為18～25℃。
6.如權(quán)利要求5所述的對蝦人工誘變方法，其特征在于人工誘變過程中水溫為20～24℃。
全文摘要
對蝦人工誘變方法，涉及一種人工誘變方法，尤其是涉及一種通過
文檔編號A01K61/00GK1745625SQ20051010742
公開日2006年3月15日 申請日期2005年9月30日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月30日
發(fā)明者劉波, 柯才煥, 王德祥 申請人:廈門大學(xué)