專利名稱：：杉木體細胞胚誘導所需球果的采集處理方法
技術(shù)領域：
：本發(fā)明屬于生物
技術(shù)領域：
，具體是指杉木體細胞胚誘導所需球果的采集處理方法。
背景技術(shù)：
：杉木(Cunninghamialanceolata(lamb.)Hook)為杉科植物，在長江以南大部分地區(qū)均有分布，因其生長快、產(chǎn)量高、材性好、用途廣，是國內(nèi)重要的商品材樹種。但由于杉木是異花授粉樹種，用種子繁殖，個體分化大，難以保持杉木母體的性狀，同時種子結(jié)實率低，杉木高世代種子園營建時間長，難以滿足日益增長的市場需求；采用常規(guī)的扦插、壓條或嫁接等無性繁殖方法，繁育速度慢；而采用組織培養(yǎng)方法，生產(chǎn)成本高，且由于針葉植物通過組織培養(yǎng)手段生產(chǎn)的苗木種植后容易發(fā)生側(cè)枝效應，不利于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)；因此需要探索杉木體細胞胚胎技術(shù)，而杉木體細胞胚誘導球果采集時間及處理方法作為決定杉木體胚能否成功的關(guān)鍵因素，目前在我國尚未見報道。體細胞胚胎是指由植物孢子體或配子體的細胞通過無性繁殖產(chǎn)生的一禾中類似于合子胚的結(jié)構(gòu)。本發(fā)明人經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，采用植物體細胞胚胎技術(shù)，既可以保持母體的優(yōu)良性狀，保證植物細胞的全能性，又可以提高雜種后代的繁殖速度，提高生產(chǎn)效率，有效節(jié)約生產(chǎn)成本，從而緩解目前杉木苗木的供需矛盾。本案油然而生。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供杉木體細胞胚誘導所需球果的采集處理方法，以提供最佳的杉木球果采集時間，保證杉木球果內(nèi)幼胚的發(fā)育質(zhì)量，促進種子內(nèi)代謝的轉(zhuǎn)化及幼胚的生長，提高誘導率，確保體細胞胚誘導成功。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的解決方案是-杉木體細胞胚誘導所需球果的采集處理方法，在杉木雜交授粉后的第107—149天，采集未成熟球果，將采集的球果用濕布包好，密封后放置于溫度控制在4-8。C的冰箱內(nèi)冷藏處理0-50天，然后將冷藏處理的球果取出，并從球果中取出種子進行消毒，將消毒后的種子吸干水分，去掉種皮，即可用于接種到杉木體胚誘導的培養(yǎng)基上，誘導形成ESM(胚性細胞團)。所述未成熟杉木球果的采集時間為種子授粉后的第120—130天。所述采集后的未成熟球果的冷藏處理時間為20-30天。所述消毒方法是用濃度為70%的酒精消毒20秒后，在無菌水下沖洗1-3次；再用濃度為0.1%的HgCl,消毒8分鐘，置于無菌水下沖洗4-5次。采用上述杉木體細胞胚誘導所需球果的采集處理方法后，本發(fā)明可以保證杉木球果內(nèi)幼胚的質(zhì)量，同時冷藏處理后促進了種子內(nèi)代謝的轉(zhuǎn)化及幼胚的生長，提高誘導率，確保體胚誘導成功，為杉木體胚產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)奠定了基礎。具體實施例方式下面通過具體實驗來說明本發(fā)明杉木體細胞胚誘導所需球果采集處理方法。本發(fā)明選取的材料是優(yōu)良杉木家系雜交授粉后的未成熟球果，先在杉木雜交授粉后的第100—149天，分8個批次對8個不同種源的未成熟球果進行采集，每批次每個種源號采集8個球果，每個球果中約有40粒未成熟種子。再將采集后的球果用濕沙布包好(濕沙布的含水量的控制將沙布在自來水浸濕后用手擰干至不出水為止)，濕沙布外套上塑料袋密封后放置于冰箱，冷藏溫度控制在4-8°C，冷藏處理0-50天。然后，分別將8個種源號不同時間采集的球果都經(jīng)冷藏處理25天后球果取出，從球果中取出種子進行消毒，消毒后開展誘導，探索球果最佳采集時間。(詳見表l)表l8個種源不同采集時間對誘導頻率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>表1所用的種子來自不同時間段采集經(jīng)冷藏處理25天后的球果，每個種源號用50粒種子做實驗。經(jīng)過實驗顯示，授粉后121-128天的誘導頻率最高，誘導頻率分別達69.75%和72%。從實驗數(shù)據(jù)可以確定杉木體細胞胚的誘導頻率與授粉后球果采集時間有關(guān)。從實驗的數(shù)據(jù)可確定球果最佳采集時間為雜交授粉后的120—130天。接著，分別將授粉后第128天的球果按冷藏處理0、10、20、30、40、50天的球果取出，從球果中取出種子進行消毒，.具體消毒方式為用濃度為70%的酒精消毒20秒后，在無菌水下沖洗l-3次；再用濃度為0.1%的HgCl2消毒8分鐘，置于無菌水下沖洗4-5次。消毒后開展誘導，探索球果采集后最佳冷藏處理時間。(詳見表2)表28個種源的杉木種子不同冷藏處理時間對誘導頻率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>表2所用的種子為授粉后121天采集的球果內(nèi)的未成熟種子，每個種源號每個冷藏時間段都用50粒種子做實驗。實驗結(jié)果顯示，經(jīng)過冷藏處理20-30天時間后誘導，誘導頻率較高，分別高達73%和71.75%。從實驗的數(shù)據(jù)可確定要提高體細胞的誘導頻率，采集后球果冷藏處理時間為20至30天。冷藏處理的球果取出后，在超凈工作臺內(nèi)，將消毒后的種子吸干水分，去掉種皮接種到杉木誘導培養(yǎng)基上，經(jīng)過8-15天的誘導開始形成ESM(胚性細胞團)。綜上所述，本發(fā)明杉木體細胞胚誘導所需球果的來集處理方法，是在杉木雜交授粉后的第120—130天采集未成熟球果，用濕布包好并密封后放置于溫度控制在4-8t:的冰箱內(nèi)冷藏處理20-30天，再從球果中取出種子進行消毒，將消毒后的種子吸干水分，去掉種皮即可。本發(fā)明采集處理后的球果接種到杉木體胚誘導的培養(yǎng)基上，即可誘導形成ESM(胚性細胞團)?？傊寄厩蚬杉瘯r間是影響體胚誘導的關(guān)鍵因素，提供最佳的球果采集時間是本發(fā)明重點解決的問題；本發(fā)明揭示的杉木球果冷藏處理方法，可以促進球果內(nèi)的種子代謝轉(zhuǎn)化及幼胚的生長，從而有效提高誘導頻率。此技術(shù)完全可以滿足杉木體胚產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的要求。權(quán)利要求1、杉木體細胞胚誘導所需球果的采集處理方法，其特征在于在杉木雜交授粉后的第107-149天，采集未成熟球果，將采集的球果用濕布包好，密封后放置于溫度控制在4-8℃的冰箱內(nèi)冷藏處理0-50天，然后將冷藏處理的球果取出，并從球果中取出種子進行消毒，將消毒后的種子吸干水分，去掉種皮，即可用于接種到杉木體胚誘導的培養(yǎng)基上，誘導形成ESM。2、如權(quán)利要求1所述杉木體細胞胚誘導所需球果的采集處理方法，其特征在于未成熟杉木球果的采集時間為種子授粉后的第120—130天。3、如權(quán)利要求1所述杉木體細胞胚誘導所需球果的采集處理方法，其特征在于采集后的未成熟球果的冷藏處理時間為20-30天。全文摘要本發(fā)明公開一種杉木體細胞胚誘導所需球果的采集處理方法，在杉木雜交授粉后的第107-149天，采集未成熟球果，將采集的球果用濕布包好，密封后放置于溫度控制在4-8℃的冰箱內(nèi)冷藏處理0-50天，然后將冷藏處理的球果取出，并從球果中取出種子進行消毒，將消毒后的種子吸干水分，去掉種皮，即可用于接種到杉木體胚誘導的培養(yǎng)基上，誘導形成ESM。這樣可以獲得較高的誘導率，并與其它技術(shù)相結(jié)合，完全可以滿足杉木體胚產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的要求，即可實現(xiàn)杉木產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。文檔編號A01H4/00GK101189957SQ20061013524公開日2008年6月4日申請日期2006年11月22日優(yōu)先權(quán)日2006年11月22日發(fā)明者鵬馮,林良科,蘇智強,賴詩金,鄭仁華,陸利春申請人:廈門涌泉集團有限公司