本發(fā)明涉及食品加工技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種利用魚溶漿生產(chǎn)蛋白小肽的方法。

背景技術(shù)：

魚溶漿是魚粉生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的壓榨廢水。早期魚粉生產(chǎn)工藝過程中，魚溶漿通常不經(jīng)回收直接向環(huán)境中排放，造成了嚴重的環(huán)境污染。魚溶漿中含有豐富的優(yōu)質(zhì)蛋白，據(jù)p.j.bechtel，univ.ofalaska報道，魚溶漿含蛋白6%，胃蛋白酶消化率大于95%，可溶性蛋白占70%，采用適當方法回收后的魚溶漿蛋白可以用于飼料工業(yè)，用作動物飼料的原料。近年來，有關(guān)魚溶漿回收利用的方法已有較多研究，如把魚溶漿加入魚粉中烘干(中國專利cn200710030735.9)，或經(jīng)脫油、脫粘多糖處理后干燥成魚溶漿蛋白粉(中國專利cn200710120346.5)等。由于魚溶漿含魚體組織中的可溶性蛋白和游離氨基酸，可將魚溶漿加工成蛋白粉。但魚溶漿中蛋白質(zhì)分子量較大，并有較強的魚腥氣味，需要分解成小分子蛋白并去腥。

現(xiàn)有技術(shù)如授權(quán)公告號為cn102994601b的中國發(fā)明專利一種利用海洋膠原蛋白酶mcp-01制備膠原蛋白小肽的方法，包括如下步驟：（1）將海洋膠原蛋白酶mcp-01溶于tris-hcl緩沖液中，配成酶濃度為0.3～0.5mg/ml的酶液；（2）將牛肌腱i型不可溶膠原蛋白加入酶液中，在水浴鍋中反應(yīng)，在4℃條件下，離心后超濾，制得膠原蛋白小肽。該方法生產(chǎn)的膠原蛋白小肽分子量小但小肽的生物活性不強，功能性較弱。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種能得到分子量小、無腥味、活性高的蛋白小肽，原料利用率高的利用魚溶漿生產(chǎn)蛋白小肽的方法。

本發(fā)明針對背景技術(shù)中提到的問題，采取的技術(shù)方案為：一種利用魚溶漿生產(chǎn)蛋白小肽的方法，包括以下步驟：

脫脂：在魚溶漿中加入有機溶劑，采用索氏提取法脫脂，有機溶劑為丙酮和乙醇混合物，體積比為1:1~3，魚溶漿與有機溶劑體積比為1:2~3。反應(yīng)溫度為70~85℃，反應(yīng)時間為2~3h，重復(fù)2~4次。利用相似相容原理，魚溶漿中脂肪溶解于有機溶劑中，同時蛋白質(zhì)不溶于有機溶劑，脂肪隨有機溶劑蒸餾，與蛋白質(zhì)分離開來，得到脫脂后的魚溶漿；

分步酶解：在魚溶漿中加入復(fù)合蛋白酶，復(fù)合蛋白酶為木瓜蛋白酶、枯草桿菌中性蛋白酶和胰蛋白酶，體積比為1:0.4~0.8：0.6~1.0。采用紅外線控溫，酶解，復(fù)合酶添加量0.6~1.4%，ph為6.8~7.8，酶解溫度為50~55℃，酶解時間為10~15min。酶解結(jié)束后滅酶，復(fù)合蛋白酶中不同蛋白酶對魚勻漿中蛋白質(zhì)的酶切位點不同，幾種蛋白酶相互協(xié)作，酶解效率高且得到的蛋白質(zhì)分子量小，容易被人體消化吸收。調(diào)節(jié)ph后再加入胃蛋白酶酶解，采用紅外線控溫，胃蛋白酶加入量為0.2~0.4%，ph為2.0~3.5，溫度為37~39℃，酶解時間為4~7min。復(fù)合蛋白酶酶切后的蛋白質(zhì)暴露了很多胃蛋白酶的酶切位點，胃蛋白酶對上述蛋白質(zhì)繼續(xù)酶解，進一步減小蛋白質(zhì)的分子量。沸水浴滅酶3~7min，過濾取濾液；

脫腥：在濾液中加入脫腥液，脫腥液成份及其重量份為：氯化鈉10~15份、碳酸氫鈉8~12份、紫蘇水10~18份、檸檬酸6~10份、乳酸6~10份、活性蛋白肽0.1~0.3份和水80~100份，其中活性蛋白肽的氨基酸序列為hshacasysryyvsvcgyyvshrgrcyrclrcrvlhpgklcvcvncsr。攪拌均勻，靜置。魚糜中腥味成分主要由氧化三甲胺降解、脂肪氧化、含硫氮前體物質(zhì)轉(zhuǎn)化等途徑產(chǎn)生。上述脫腥液既可與蛋白質(zhì)中已產(chǎn)生的腥味物質(zhì)反應(yīng)，達到去腥的效果，還能抑制蛋白氧化，使蛋白粉產(chǎn)品在保質(zhì)期內(nèi)始終保持無腥味狀態(tài)。活性蛋白肽可促進脫腥液中其他成分與腥味物質(zhì)的反應(yīng)，且可有效掩蓋腥味；

超濾：將去腥后的濾液超濾，超濾膜規(guī)格為1~2kda，取濾過液。通過超濾可去除分子量大的雜質(zhì)，對魚蛋白進行純化，提高產(chǎn)品質(zhì)量；

脫鹽：將濾過液通過離子交換樹脂脫鹽，得到脫鹽液體；

噴霧干燥：將脫鹽液體噴霧干燥得到蛋白小肽產(chǎn)品。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于：1）本發(fā)明以魚溶漿為原料，既保護了環(huán)境，又對資源進行了合理運用，增加了魚溶漿的附加值；2）本發(fā)明制備的蛋白小肽，分子量小，無腥味，蛋白純度和活性高，產(chǎn)品質(zhì)量優(yōu)異；3）本發(fā)明脫腥液既可與蛋白質(zhì)中已產(chǎn)生的腥味物質(zhì)反應(yīng)，達到去腥的效果，還能抑制蛋白氧化，使蛋白粉產(chǎn)品在保質(zhì)期內(nèi)始終保持無腥味狀態(tài)；4）本發(fā)明酶解時采用紅外線控溫，大大縮短生產(chǎn)周期，減少時間成本和人力成本，加工方法簡單，重現(xiàn)性高，適合大規(guī)模生產(chǎn)。

具體實施例

下面通過實施例對本發(fā)明方案作進一步說明：

實施例1：

一種利用魚溶漿生產(chǎn)蛋白小肽的方法，包括以下步驟：

1）脫脂：在魚溶漿中加入有機溶劑，采用索氏提取法脫脂，有機溶劑為丙酮和乙醇混合物，體積比為1:1~3，魚溶漿與有機溶劑體積比為1:2~3。反應(yīng)溫度為70~85℃，反應(yīng)時間為2~3h，重復(fù)2~4次。利用相似相容原理，魚溶漿中脂肪溶解于有機溶劑中，同時蛋白質(zhì)不溶于有機溶劑，脂肪隨有機溶劑蒸餾，與蛋白質(zhì)分離開來，得到脫脂后的魚溶漿；

2）分步酶解：在魚溶漿中加入復(fù)合蛋白酶，復(fù)合蛋白酶為木瓜蛋白酶、枯草桿菌中性蛋白酶和胰蛋白酶，體積比為1:0.4~0.8：0.6~1.0。采用紅外線控溫，酶解，復(fù)合酶添加量0.6~1.4%，ph為6.8~7.8，酶解溫度為50~55℃，酶解時間為10~15min。酶解結(jié)束后滅酶，復(fù)合蛋白酶中不同蛋白酶對魚勻漿中蛋白質(zhì)的酶切位點不同，幾種蛋白酶相互協(xié)作，酶解效率高且得到的蛋白質(zhì)分子量小，容易被人體消化吸收。調(diào)節(jié)ph后再加入胃蛋白酶酶解，采用紅外線控溫，胃蛋白酶加入量為0.2~0.4%，ph為2.0~3.5，溫度為37~39℃，酶解時間為4~7min。復(fù)合蛋白酶酶切后的蛋白質(zhì)暴露了很多胃蛋白酶的酶切位點，胃蛋白酶對上述蛋白質(zhì)繼續(xù)酶解，進一步減小蛋白質(zhì)的分子量。沸水浴滅酶3~7min，過濾取濾液；

3）脫腥：在濾液中加入脫腥液，脫腥液成份及其重量份為：氯化鈉10~15份、碳酸氫鈉8~12份、紫蘇水10~18份、檸檬酸6~10份、乳酸6~10份、活性蛋白肽0.1~0.3份和水80~100份，其中活性蛋白肽的氨基酸序列為hshacasysryyvsvcgyyvshrgrcyrclrcrvlhpgklcvcvncsr。攪拌均勻，靜置。魚糜中腥味成分主要由氧化三甲胺降解、脂肪氧化、含硫氮前體物質(zhì)轉(zhuǎn)化等途徑產(chǎn)生。上述脫腥液既可與蛋白質(zhì)中已產(chǎn)生的腥味物質(zhì)反應(yīng)，達到去腥的效果，還能抑制蛋白氧化，使蛋白粉產(chǎn)品在保質(zhì)期內(nèi)始終保持無腥味狀態(tài)?；钚缘鞍纂目纱龠M脫腥液中其他成分與腥味物質(zhì)的反應(yīng)，且可有效掩蓋腥味；

4）超濾：將去腥后的濾液超濾，超濾膜規(guī)格為1~2kda，取濾過液。通過超濾可去除分子量大的雜質(zhì)，對魚蛋白進行純化，提高產(chǎn)品質(zhì)量；

5）脫鹽：將濾過液通過離子交換樹脂脫鹽，得到脫鹽液體；

6）噴霧干燥：將脫鹽液體噴霧干燥得到蛋白小肽產(chǎn)品。

實施例2：

一種利用魚溶漿生產(chǎn)蛋白小肽的方法，包括以下步驟：

1）脫脂：在魚溶漿中加入有機溶劑，采用索氏提取法脫脂，有機溶劑為丙酮和乙醇混合物，體積比為1:2，魚溶漿與有機溶劑體積比為1:2.4。反應(yīng)溫度為76℃，反應(yīng)時間為2.6h，重復(fù)2次。利用相似相容原理，魚溶漿中脂肪溶解于有機溶劑中，同時蛋白質(zhì)不溶于有機溶劑，脂肪隨有機溶劑蒸餾，與蛋白質(zhì)分離開來，得到脫脂后的魚溶漿；

2）分步酶解：在魚溶漿中加入復(fù)合蛋白酶，復(fù)合蛋白酶為木瓜蛋白酶、枯草桿菌中性蛋白酶和胰蛋白酶，體積比為1:0.6：0.9。采用紅外線控溫，酶解，復(fù)合酶添加量1%，ph為7.0，酶解溫度為53℃，酶解時間為14min。酶解結(jié)束后滅酶，復(fù)合蛋白酶中不同蛋白酶對魚勻漿中蛋白質(zhì)的酶切位點不同，幾種蛋白酶相互協(xié)作，酶解效率高且得到的蛋白質(zhì)分子量小，容易被人體消化吸收。調(diào)節(jié)ph后再加入胃蛋白酶酶解，采用紅外線控溫，胃蛋白酶加入量為0.3%，ph為2.7，溫度為38℃，酶解時間為5min。復(fù)合蛋白酶酶切后的蛋白質(zhì)暴露了很多胃蛋白酶的酶切位點，胃蛋白酶對上述蛋白質(zhì)繼續(xù)酶解，進一步減小蛋白質(zhì)的分子量。沸水浴滅酶3min，過濾取濾液；

3）脫腥：在濾液中加入脫腥液，脫腥液成份及其重量份為：氯化鈉13份、碳酸氫鈉10份、紫蘇水13份、檸檬酸8份、乳酸8份、活性蛋白肽0.2份和水90份，其中活性蛋白肽的氨基酸序列為hshacasysryyvsvcgyyvshrgrcyrclrcrvlhpgklcvcvncsr。攪拌均勻，靜置。魚糜中腥味成分主要由氧化三甲胺降解、脂肪氧化、含硫氮前體物質(zhì)轉(zhuǎn)化等途徑產(chǎn)生。上述脫腥液既可與蛋白質(zhì)中已產(chǎn)生的腥味物質(zhì)反應(yīng)，達到去腥的效果，還能抑制蛋白氧化，使蛋白粉產(chǎn)品在保質(zhì)期內(nèi)始終保持無腥味狀態(tài)?；钚缘鞍纂目纱龠M脫腥液中其他成分與腥味物質(zhì)的反應(yīng)，且可有效掩蓋腥味；

4）超濾：將去腥后的濾液超濾，超濾膜規(guī)格為1.5kda，取濾過液。通過超濾可去除分子量大的雜質(zhì)，對魚蛋白進行純化，提高產(chǎn)品質(zhì)量；

5）脫鹽：將濾過液通過離子交換樹脂脫鹽，得到脫鹽液體；

6）噴霧干燥：將脫鹽液體噴霧干燥得到蛋白小肽產(chǎn)品。

實施例3：

一種利用魚溶漿生產(chǎn)蛋白小肽的方法，包括以下步驟：

1）脫脂：在魚溶漿中加入有機溶劑，采用索氏提取法脫脂，有機溶劑為丙酮和乙醇混合物，體積比為1:1.5，魚溶漿與有機溶劑體積比為1:2.7。反應(yīng)溫度為75℃，反應(yīng)時間為2.3h，重復(fù)3次。利用相似相容原理，魚溶漿中脂肪溶解于有機溶劑中，同時蛋白質(zhì)不溶于有機溶劑，脂肪隨有機溶劑蒸餾，與蛋白質(zhì)分離開來，得到脫脂后的魚溶漿；

2）分步酶解：在魚溶漿中加入復(fù)合蛋白酶，復(fù)合蛋白酶為木瓜蛋白酶、枯草桿菌中性蛋白酶和胰蛋白酶，體積比為1:0.6：0.7。采用紅外線控溫，酶解，復(fù)合酶添加量1.2%，ph為7.0，酶解溫度為53℃，酶解時間為14min。酶解結(jié)束后滅酶，復(fù)合蛋白酶中不同蛋白酶對魚勻漿中蛋白質(zhì)的酶切位點不同，幾種蛋白酶相互協(xié)作，酶解效率高且得到的蛋白質(zhì)分子量小，容易被人體消化吸收。調(diào)節(jié)ph后再加入胃蛋白酶酶解，采用紅外線控溫，胃蛋白酶加入量為0.3%，ph為2.7，溫度為38℃，酶解時間為6min。復(fù)合蛋白酶酶切后的蛋白質(zhì)暴露了很多胃蛋白酶的酶切位點，胃蛋白酶對上述蛋白質(zhì)繼續(xù)酶解，進一步減小蛋白質(zhì)的分子量。沸水浴滅酶3min，過濾取濾液；

3）脫腥：在濾液中加入脫腥液，脫腥液成份及其重量份為：氯化鈉14份、碳酸氫鈉10份、紫蘇水14份、檸檬酸8份、乳酸8份、活性蛋白肽0.3份和水100份，其中活性蛋白肽的氨基酸序列為hshacasysryyvsvcgyyvshrgrcyrclrcrvlhpgklcvcvncsr。攪拌均勻，靜置。魚糜中腥味成分主要由氧化三甲胺降解、脂肪氧化、含硫氮前體物質(zhì)轉(zhuǎn)化等途徑產(chǎn)生。上述脫腥液既可與蛋白質(zhì)中已產(chǎn)生的腥味物質(zhì)反應(yīng)，達到去腥的效果，還能抑制蛋白氧化，使蛋白粉產(chǎn)品在保質(zhì)期內(nèi)始終保持無腥味狀態(tài)?；钚缘鞍纂目纱龠M脫腥液中其他成分與腥味物質(zhì)的反應(yīng)，且可有效掩蓋腥味；

4）超濾：將去腥后的濾液超濾，超濾膜規(guī)格為1.3kda，取濾過液。通過超濾可去除分子量大的雜質(zhì)，對魚蛋白進行純化，提高產(chǎn)品質(zhì)量；

5）脫鹽：將濾過液通過離子交換樹脂脫鹽，得到脫鹽液體；

6）噴霧干燥：將脫鹽液體噴霧干燥得到蛋白小肽產(chǎn)品。

本發(fā)明的操作步驟中的常規(guī)操作為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知，在此不進行贅述。

以上所述的實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案進行了詳細說明，應(yīng)理解的是以上所述僅為本發(fā)明的具體實施例，并不用于限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的原則范圍內(nèi)所做的任何修改、補充或類似方式替代等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。

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