專利名稱：：一種微生態(tài)發(fā)酵蛋白飼料及其制備方法一種微生態(tài)發(fā)酵蛋白飼料及其制備方法(一)
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種微生態(tài)發(fā)酵蛋白飼料及其制備方法。(二)
背景技術(shù)：
：有關(guān)"促進(jìn)幼齡動物生長"的問題一直是養(yǎng)殖科技工作者關(guān)注的熱點(diǎn)，為了滿足幼齡動物的特殊生理生長需要,飼料配制者往往在飼料中添加大量的與母體來源相近或易于消化吸收的原料，如魚粉、肉骨粉、血漿蛋白粉，乳清粉等。但這些原料的應(yīng)用使得配方詞料的價格較高，影響?zhàn)B殖業(yè)的效益，更是由于魚粉作為一種亞稀缺資源，已經(jīng)在各主要產(chǎn)地國受到嚴(yán)格的限產(chǎn)保護(hù)、血漿蛋白粉等也由于生物安全問題而被禁止使用。動物性蛋白飼料的限制使用，而優(yōu)質(zhì)飼料蛋白原料的需求日趨增大，正是目前飼料優(yōu)質(zhì)蛋白原料面臨的尷尬處境。為了尋找優(yōu)質(zhì)的蛋白原料，人們重新把目光轉(zhuǎn)移到植物性原料豆粕上。豆粕作為一種重要的植物性蛋白源，其中粗蛋白質(zhì)含量為43~48%,并有較平衡的氨基酸組成，尤其是賴氨酸含量達(dá)2.5~2.8%。但是飼用豆粕含有抑制蛋白質(zhì)消化利用的因子如抗胰蛋白酶、抗麋蛋白酶、凝集素等；含有影響碳水化合物消化的因子如寡糖、酚類物質(zhì)、丹寧等；含有降低礦物元素利用率的因子如植酸等；含有抗維生素因子如抗維生素A、E、B12等因子；含有增加食麋黏度、干擾養(yǎng)分消化吸收的因子有非淀粉多糖；其他因子還有致曱狀腺腫因子、皂甙、異黃酮、升氰糖甙等。因此對豆粕加以改良，提高其消化率，降低其抗?fàn)I養(yǎng)因子，將是使豆粕成為一種優(yōu)質(zhì)飼料蛋白的有效途徑。許多人在這方面作了大量工作，如用物理法、化學(xué)法、生物育種法等來消除或降低豆粕中的抗?fàn)I養(yǎng)因子，這些方法雖有一定效4果，但存在或成本高、或殘留化學(xué)試劑、或破壞某些營養(yǎng)成份或仍殘留較多抗?fàn)I養(yǎng)因子缺點(diǎn)，另外，還缺少動物蛋白經(jīng)消化后潛在的特有的生物活性肽，因此未能^艮好應(yīng)用。
發(fā)明內(nèi)容針對上述存在的問題，本發(fā)明將豆粕和蠶蛹組合采用多菌種聯(lián)合發(fā)酵生產(chǎn)一種微生態(tài)發(fā)酵蛋白飼料。不但消除了豆粕中的抗?fàn)I養(yǎng)因子，而且豆粕和蠶蛹經(jīng)發(fā)酵后含有多種活性肽，充分發(fā)揮豆粕和蠶蛹活性肽的組合效應(yīng)，能完全替代魚粉、血漿蛋白粉等動物性蛋白飼料。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種微生態(tài)發(fā)酵蛋白飼料，所述的飼料是由豆粕和蠶蛹以9098:210質(zhì)量比混合后加水蒸煮制得固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，并在固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基上接種枯草芽孢桿菌(丑ac/〃wwZ^/zW酉良酒酵母(5bcc/zaraw^cescewv/w'ae)、乳酸軒菌(丄flcto6(3c/〃船5p.)和少孑包才艮審(i/z/zo/mso//gospon)混合菌種，再于3337。C下共混發(fā)酵培養(yǎng)3045小時，發(fā)酵結(jié)束后將發(fā)酵產(chǎn)物干燥、粉碎制得到所述微生態(tài)發(fā)酵蛋白飼料。優(yōu)選所述的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基按如下方法制得豆粕和蠶蛹以9098:210質(zhì)量比混合后，加入質(zhì)量為豆粕和蠶蛹質(zhì)量之和0.65-1.0倍的水，于0.120.15MPa壓力下蒸煮30~40min得到固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基。一種微生態(tài)發(fā)酵蛋白飼料的制備方法，所述方法是將枯草芽孢桿菌(5acz7/wssw6f/to)、酉良酒酵母((S"cc/wrawycascerev/w'ae)、專'L酉臾才干菌(丄"ctokc/〃ws5p.)和少孑包才艮霉(i/2/zo/ws0〃gaspon/50混合菌種才妄種至固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，于3337。C下共混發(fā)酵培養(yǎng)3045小時，發(fā)酵結(jié)束后將發(fā)酵產(chǎn)物干燥、粉碎，得到所述微生態(tài)發(fā)酵蛋白飼料(粗蛋白248%,乳酸桿菌^0.5xl0s個/g,酵母細(xì)胞數(shù)^6xl()S個/g);所述固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基由豆粕和蠶蛹以9098:2~10質(zhì)量比混合后加水蒸煮得到。各菌種接種量可不受限制，通常選擇其常規(guī)接種量即可。優(yōu)選的，所述混合菌種接種量為以種子液或種曲質(zhì)量占固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基干重質(zhì)量百分比計，枯草芽孢桿菌種子液為0.1%~2%,釀酒酵母種曲為5%12%,乳酸桿菌種子液為0.4%~1.2%，少孢根霉種曲12%。所述枯草芽孢桿菌種子液由如下方法制備得到枯草芽孢桿菌接種至本領(lǐng)域常規(guī)適用于枯草芽孢桿菌的液體種子培養(yǎng)基，3537°C、220r/min搖床培養(yǎng)2426小時，得到枯草芽孢桿菌種子液；所述釀酒酵母種曲由如下方法制備得到釀酒酵母接種至本領(lǐng)域常規(guī)適用于釀酒酵母的液體種子培養(yǎng)基，3032。C培養(yǎng)18~20小時，得到釀酒酵母種曲；所述乳酸桿菌種子液由如下方法制備得到乳酸桿菌接種至本領(lǐng)域常規(guī)適用于乳酸桿菌的液體種子培養(yǎng)基，2527°C、220r/min培養(yǎng)2426小時，得到乳酸桿菌種子液；所述少孢才艮霉種曲由如下方法制備得到少孢根霉接種至本領(lǐng)域常規(guī)適用于少孢根霉的液體種子培養(yǎng)基，35~37°C、220r/min培養(yǎng)2426小時，收獲菌絲體，粉碎，滅菌，得到少孢根霉種曲。優(yōu)選的，所述枯草芽孢桿菌為Sac/〃wsw&/feACCC01185，由中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心提供。優(yōu)選的，所述釀酒酵母為Sacc/wramj^Mcev/w'aeACCC20042，由中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心提供。優(yōu)選的，所述乳酸桿菌為actok^7/wACCC11026,由中國農(nóng)業(yè)4鼓生物菌種保藏管理中心提供。優(yōu)選的，所述少孢根霉為/^/zo/wo//gos^omyACCC30496，由中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心提供。優(yōu)選的，所述固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基由豆粕和蠶蛹以9098:210質(zhì)量比混合后，加入質(zhì)量為豆粕和蠶蛹質(zhì)量之和0.65~1.0^f咅的水，于0.120.15MPa壓力下蒸煮3040min得到。具體的，所述方法如下(1)Sac/〃wwto'toACCC01185接種至常規(guī)適用于枯草芽孢桿菌的液體種子培養(yǎng)基，3537°C、220r/min搖床培養(yǎng)2426小時，得到枯草芽孢桿菌種子液；(2)Sacc/zarawycescweWs/aeACCC20042接種至常規(guī)適用于釀酒酵母的種子培養(yǎng)基，3032。C培養(yǎng)1820小時，得到釀酒酵母種曲；(3)Zacto6"c/〃ww.ACCC11026接種至常規(guī)適用于乳酸桿菌的液體種子培養(yǎng)基，25~27°C、220r/min培養(yǎng)2426小時，得到乳S殳桿菌種子液；(4)i/z/zopwo/^o^omsACCC30496接種至常規(guī)適用于少孢根霉的液體種子培養(yǎng)基，3537°C、220r/min培養(yǎng)2426小時，收獲菌絲體，粉碎，滅菌，得到少孢根霉種曲；(5)豆粕和蠶蛹以90~98:210質(zhì)量比混合后，力口入質(zhì)量為豆粕和蠶蛹質(zhì)量之和0.65-1.0倍的水，于0.120.15MPa壓力下蒸煮30~40min得到固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，將所述固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基冷卻至33~35°C，接種質(zhì)量分別為固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基干重0.1%~2%的枯草芽孢桿菌種子液、5%12%的釀酒酵母種曲、0.4%1.2%的乳酸桿菌種子液、1%2%的少孢根霉種曲，3337。C共混發(fā)酵培養(yǎng)3045小時；(6)發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束后，干燥至含水量小于10%,烘干、粉>碎，即得到所述微生態(tài)發(fā)酵蛋白祠料。本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在本發(fā)明微生態(tài)發(fā)酵蛋白祠料抗?fàn)I養(yǎng)因子被降解95%以上，消化吸收效率達(dá)90%以上，含有多種生物活性肽，小肽含量達(dá)22%以上，有助消化和促進(jìn)生長；經(jīng)多種有益微生物發(fā)酵，經(jīng)低溫干燥而成，富含乳酸桿菌、酵母菌，有利于調(diào)控動物腸道有益微生物菌群；具有天然的發(fā)酵香味，適口性好，具有良好誘食效果，促進(jìn)幼齡動物采食；含有大豆異黃酮0.05%以上，能顯著提高機(jī)體免疫力，提高動物生產(chǎn)性能；還可減輕糞便排泄物的臭味；能完全替代魚粉、血漿蛋白粉等動物性蛋白飼料。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此實(shí)施例1:1、菌種的種曲制備(l)枯草芽孢桿菌(^m/〃wh^^:sACCC01185,中國農(nóng)業(yè)樣么生物菌種保藏管理中心提供)斜面培養(yǎng)基為蛋白胨lg、牛肉提取物0.3g、NaCl0.5g、瓊脂2.0g、蒸餾水100ml，pH值7.0。接種5ac/〃wswto7/sACCC01185,37。C培養(yǎng)24h,得到斜面菌種；液體種子培養(yǎng)基為葡萄糖0.2g,NaC10.5g,酵母膏0.5g,蛋白胨lg,蒸餾水100mL,pH7.0。液體種子培養(yǎng)每300ml三角瓶裝量50ml液體種子8培養(yǎng)基，在120。C條件下滅菌30min,降溫后從斜面接一環(huán)菌苔至種子培養(yǎng)基，置37。C控溫?fù)u床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速220r/min,培養(yǎng)24h,活菌量密度22.5xl01Gcfo/mL，即為枯草芽孢桿菌種子液。(2)少孢根霉RT-3(i/zizo/ayo/^os/wmyACCC30496,中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心提供)PDA培養(yǎng)基斜面保藏菌種。將孢子接種于基礎(chǔ)培養(yǎng)液基(豆芽1000g加入1000ml水煮沸30min，紗布過濾。濾汁加入葡萄糖30g，(NH4)2S044g，MgS04,7H202.5g和KH2P04lg，溶解并補(bǔ)水至1000ml,用乳酸調(diào)pH5~5.5,分裝，0.1MPa滅菌30min),少孢根霉的接種量為100ml基礎(chǔ)培養(yǎng)液接種1.0g菌絲體(濕重)，37。C振蕩培養(yǎng)24h，收獲菌絲體，用滅過菌的粉碎機(jī)絞碎，即為少孢根霉菌種曲，48'C保存?zhèn)溆谩?3)釀酒酵母(&cc/wrow_ycesce^v/w'aeACCC20042，中國農(nóng)業(yè)孩t生物菌種保藏管理中心提供)原菌試管--J、三角瓶種子(麥芽糖糖液100ml，糖度7~8°Be,30°C保溫培養(yǎng)12h——轉(zhuǎn)入大三角瓶(麥芽糖糖液600ml，糖度7~8°Be),30。C保溫培養(yǎng)12h——轉(zhuǎn)入卡氏罐內(nèi)(糖水12kg,糖度78。Be擴(kuò)大培養(yǎng))30。C培養(yǎng)12h——將卡氏罐酵母種子在酒母缸擴(kuò)培(培養(yǎng)基為每缸放清水300kg，谷粉30kg，麩皮10kg)20h,即為酵母種曲。(4)乳酸桿菌(Z^cto&d〃ww.ACCC11026，中國農(nóng)業(yè)孩i生物菌種保藏管理中心提供)菌種斜面保藏培養(yǎng)基酵母味素10g，葡萄糖15g,碳酸鈣15g,瓊脂15g,蒸餾水1000mL。發(fā)酵種子培養(yǎng)基蛋白胨5g,胰蛋白胨5g,酵母味素10g，蒸餾水1000mL,pH6.8。種子培養(yǎng)方法將斜面菌種分別接種于液體種子培養(yǎng)基中，于25°C,220r/min,培養(yǎng)24h,即為乳酸桿菌種子液。2、發(fā)酵原料處理豆粕900g和蠶蛹100g混合，加入lOOOg水，在0,12Mpa壓力下蒸煮35min進(jìn)行滅菌，滅菌后關(guān)閉進(jìn)汽閥，悶料35min出料，得到固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基。3、接種上述經(jīng)預(yù)處理的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，通風(fēng)吹冷至33~35°C，分別接種枯草芽孢桿菌種子液lg,釀酒酵母種子液50g,乳酸桿菌種子液4g,少孢根霉RT-3種曲10g，在35~37。C發(fā)酵培養(yǎng)40h。發(fā)酵主要管理好發(fā)酵溫度。開啟溫度自控儀，接上風(fēng)機(jī)電源，溫度控制上限為37。C,下限為33。C。勤觀察，勤測試。溫控儀探頭落點(diǎn)要正確，深度要達(dá)到10cm(可邊上插溫度計做對比)，主要防止探頭，溫控儀及連接儀表故障，一般6h后開始升溫，前期可用室內(nèi)風(fēng)巡回，當(dāng)天氣氣溫較高或料溫升溫過猛，可開啟室外風(fēng)門，達(dá)到調(diào)節(jié)生長溫度之目的。經(jīng)40h發(fā)酵完畢，可加大風(fēng)門，開啟門戶，不使料溫超過40。C,等待出房干燥。5、干燥采用低溫干燥，前期料溫控制在38。C內(nèi)，后期料溫控制在45。C內(nèi)，水分小于10。/。即可出房。烘干后粉碎到細(xì)度60目以上，得到水分^10%、，粗蛋白248%,乳酸桿菌^).5xl0S個/g,酵母細(xì)胞數(shù)26xi()S個/g的微生態(tài)發(fā)酵蛋白飼料。6、應(yīng)用歲丈果選擇28日齡斷奶三元雜交仔豬120頭，按窩別、性別、體重相近的原則分為4組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)10頭豬。對照組組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗I、試驗II、試驗III組分別用5%、10%和15%的本實(shí)施例的微10生態(tài)發(fā)酵蛋白飼料替代基礎(chǔ)日糧中等量的豆粕。試驗期從28日齡到56日齡。應(yīng)用效果見表l。表1:不同梯度微生態(tài)發(fā)酵蛋白飼料對斷奶仔豬生產(chǎn)性能的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>由表1可以看出，微生態(tài)發(fā)酵蛋白伺料添加量為5%、10%和15%的試驗組日增重分別比對照組提高6.48%(P<0.05)、10.5%(P<0.05)和11.9%(P<0.05)。實(shí)施例2:1、菌種的種曲制備(1)枯草芽孢桿菌(5ac/〃^wto7^ACCC01185，中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心提供)斜面培養(yǎng)基為蛋白胨lg、牛肉提取物0.3g、NaC10.5g、瓊脂2.0g、蒸餾水100ml，pH值7.0。接種Sac/〃ww^7^ACCC01185,37。C培養(yǎng)24h，得到斜面菌種；液體種子培養(yǎng)基為葡萄糖0.2g,NaC10.5g,酵母膏0.5g,蛋白胨lg,蒸餾水100mL，pH7.0。液體種子培養(yǎng)每300ml三角瓶裝量50ml液體種子培養(yǎng)基，在120。C條件下滅菌30min,降溫后從斜面接一環(huán)菌苔至種子培養(yǎng)基，置37。C控溫?fù)u床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速220r/min,至芽孢率達(dá)90%以上(約需24h)時停止，即為枯草芽孢桿菌種子液。(2)少孢根霉(RhizopusoligosporusACCC30496,中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心提供)PDA培養(yǎng)基斜面保藏菌種。將孢子接種于基礎(chǔ)培養(yǎng)液基(豆芽1000g加入1000ml水煮沸30min，紗布過濾。濾汁加入葡萄糖30g,(NH4)2S044g,MgS04'7H202.5g和KH2P04lg。溶解并補(bǔ)水至1000ml,用乳酸調(diào)pH5~5.5，分裝，0.1MPa滅菌30min)，少孢根霉的接種量為100ml基礎(chǔ)培養(yǎng)液接種2.0g菌絲體(濕重)，37。C振蕩培養(yǎng)24h,收獲菌絲體，用滅過菌的粉碎機(jī)絞碎，即為少孢根霉菌種曲，4-8。C保存?zhèn)溆谩?3)釀酒酵母(&cc/zaram_yc^cerev^aeACCC20042，中國農(nóng)業(yè)樣i生物菌種保藏管理中心提供)原菌試管--J、三角瓶種子(麥芽糖糖液100ml,糖度7~8°Be)30°C保溫培養(yǎng)10h——轉(zhuǎn)入大三角瓶(麥芽糖糖液600ml,糖度7~8。Be)，30。C保溫培養(yǎng)10h——轉(zhuǎn)入卡氏罐內(nèi)(糖水13kg,糖度78。Be擴(kuò)大培養(yǎng))30。C培養(yǎng)10h——將卡氏罐酵母種子在酒母缸擴(kuò)培(培養(yǎng)基為每缸放清水200kg,谷粉30kg，麩皮10kg)總培養(yǎng)時間20h，即為酵母種子液。(4)乳酸桿菌(Z^ctokcz7/w平ACCC11026,中國農(nóng)業(yè)4鼓生物菌種保藏管理中心提供)菌種斜面保藏培養(yǎng)基酵母味素10g，葡萄糖15g，碳酸4丐15g,瓊脂15g,蒸餾水1000mL。發(fā)酵種子培養(yǎng)基蛋白胨5g,胰蛋白胨5g,酵母味素10g,蒸餾水1000mL,pH6.8。種子培養(yǎng)方法將斜面菌種分別接種于液體種子培養(yǎng)基中，于25°C,220r/min,培養(yǎng)24h，即為乳S菱桿菌種子液。2、發(fā)酵原料處理豆粕980g和蠶蛹20g混合，加入650g水，在0.12Mpa壓力下蒸煮35min進(jìn)行滅菌，滅菌后關(guān)閉進(jìn)汽閥，悶料35min出料。123、接種經(jīng)預(yù)處理的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，通風(fēng)吹冷至33~35°C,分別接種枯草芽孢桿菌種子液20g，釀酒酵母菌種子液120g，乳酸桿菌種子液12g,少孢根霉RT-3種曲20g,在3337。C發(fā)酵培養(yǎng)45h。4、控溫發(fā)酵發(fā)酵主要管理好發(fā)酵溫度。開啟溫度自控儀，接上風(fēng)機(jī)電源，溫度控制上限為37°C,下限為33。C。勤觀察，勤測試。溫控儀探頭落點(diǎn)要正確，深度要達(dá)到10cm(可邊上插溫度計做對比)，主要防止探頭，溫控儀及連接儀表故障，一般6h后開始升溫，前期可用室內(nèi)風(fēng)巡回，當(dāng)天氣氣溫較高或料溫升溫過猛，可開啟室外風(fēng)門，達(dá)到調(diào)節(jié)生長溫度之目的。經(jīng)45h發(fā)酵完畢，可加大風(fēng)門，開啟門戶，不使料溫超過4(TC，等待出房干燥。5、千燥采用低溫干燥，前期料溫控制在38。C內(nèi)，后期料溫控制在45。C內(nèi)，水分小于10%即可出房。烘干后粉碎到細(xì)度60目以上，得到水分^10%、，粗蛋白^48%,乳酸桿菌20.5xl()S個/g，酵母細(xì)胞數(shù)^6xi()S個/g的微生態(tài)發(fā)酵蛋白飼料。6、應(yīng)用效果選取21日齡斷奶三元雜交仔豬108頭，按窩別、性別、體重相近的原則分為3組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)12頭豬。對照組組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗I、試驗II組分別用本實(shí)施例的2.5%和5%的微生態(tài)發(fā)酵蛋白飼料替代基礎(chǔ)日糧中等量的魚粉。21-35日齡期間對斷奶仔豬腹瀉率的影響見表-2。表2:微生態(tài)發(fā)酵蛋白飼料對斷奶仔豬腹瀉率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>表2可知，微生態(tài)發(fā)酵蛋白飼料能明顯降低斷奶仔豬的腹瀉率，試驗I和試驗11分別比對照組降低44.5%(PO.05)和48.7%(PO.05)。實(shí)施例3:1、菌種的種曲制備(1)枯草芽孢桿菌(Sac/〃^^tofeACCC01185，中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心提供)斜面培養(yǎng)基為蛋白胨lg、牛肉提取物0.3g、NaC10.5g、瓊脂2.0g、蒸餾水100ml，pH值7.0。接種召ac/〃iwACCC01185,37。C培養(yǎng)24h，得到斜面菌種；液體種子培養(yǎng)基為葡萄糖0.2%,NaC10.5%,酵母膏0.5%,蛋白胨1%，pH7.0。液體種子培養(yǎng)每300ml三角瓶裝量50ml液體種子培養(yǎng)基，在120。C條件下滅菌30min,降溫后從斜面接一環(huán)菌苔至種子培養(yǎng)基，置37°C控溫?fù)u床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速220r/min，至芽孢率達(dá)90%以上(約需24h)時停止，即為枯草芽孢桿菌種子液。(2)少孢根霉(i/^opuso/^o^omyACCC30496,中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心提供)PDA培養(yǎng)基斜面保藏菌種。將孢子接種于基礎(chǔ)培養(yǎng)液基(豆芽1000g加入1000ml水煮沸30min,紗布過濾。濾汁加入葡萄糖30g,(NH4)2S044g，MgS04.7H202.5g和KH2P04lg,溶解并補(bǔ)水至1000ml,用乳酸調(diào)pH5~5.5,分裝，0.1MPa滅菌30min),少孢根霉的接種量為100ml基礎(chǔ)培養(yǎng)液接種2.0g菌絲體(濕重)，37。C振蕩培養(yǎng)24h,收獲菌絲體，用滅過菌的粉碎機(jī)絞碎，即為少孢根霉菌種曲，48。C保存。(S)釀酒酵母(Sflcc/zaramyc^cewv/w'aeACCC20042,中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心提供)原菌試管--J、三角瓶種子(葡萄糖糖液100ml,糖度78。Be)30。C保溫培養(yǎng)12h——轉(zhuǎn)入大三角瓶(麥芽糖糖液600ml，糖度7~8。Be),30。C保溫培養(yǎng)12h——轉(zhuǎn)入卡氏罐內(nèi)(糖水13kg,糖度78。Be擴(kuò)大培養(yǎng))30。C培養(yǎng)112h——將卡氏罐酵母種子在酒母缸擴(kuò)培(培養(yǎng)基為每缸放清水300kg，谷粉30kg,麩皮10kg)總培養(yǎng)時間20h,即為酵母種子液。(4)乳酸桿菌(丄acto^c/〃ww.ACCC11026,中國農(nóng)業(yè)孩i生物菌種保藏管理中心提供)菌種斜面保藏培養(yǎng)基酵母味素10g,葡萄糖15g,碳酸鈣15g,瓊脂15g,蒸餾水1000mL。發(fā)酵種子培養(yǎng)基蛋白胨5g，胰蛋白胨5g，酵母味素10g，蒸餾水1000mL,pH6.8。種子培養(yǎng)方法將斜面菌種分別接種于液體種子培養(yǎng)基中，于25°C,220r/min,培養(yǎng)24h,即為乳酸桿菌種子液。2、發(fā)酵原料處理豆粕9.4kg和蠶蛹0.6kg混合，加入水8.25kg混合均勻，在0.12Mpa壓力下蒸煮35min進(jìn)行滅菌，滅菌后關(guān)閉進(jìn)汽閥，悶料35min出料。3、接種經(jīng)預(yù)處理的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，通風(fēng)吹冷至33~35°C,分別接種枯草芽孢桿菌種子液105g，釀酒酵母菌種曲850g，乳酸桿菌種子液80g,少孢根霉RT-3種曲150g，在33~37。C發(fā)酵培養(yǎng)40h。4、控溫發(fā)酵發(fā)酵主要管理好發(fā)酵溫度。開啟溫度自控儀，接上風(fēng)機(jī)電源，溫度控制上限為37。C，下限為33。C。勤觀察，勤測試。溫控儀探頭落點(diǎn)要正確，深度要達(dá)到10cm(可邊上插溫度計做對比)，主要防止探頭，溫控儀及連接儀表故障，一4殳6h后開始升溫，前期可用室內(nèi)風(fēng)巡回，當(dāng)天氣氣溫較高或料溫升溫過猛，可開啟室外風(fēng)門，達(dá)到調(diào)節(jié)生長溫度之目的。經(jīng)40h發(fā)酵完畢，可加大風(fēng)門，開啟門戶，不使料溫超過40。C，等待出房干燥。5、干燥采用低溫干燥，前期料溫控制在38。C內(nèi)，后期料溫控制在45。C內(nèi)，水分小于10%即可出房。烘干后粉碎到細(xì)度60目以上，得到水分^10%、，粗蛋白^48%，乳酸桿菌^0.5xl()S個/g,酵母細(xì)胞數(shù)^6xi()S個/g的微生態(tài)發(fā)酵蛋白飼料。6、應(yīng)用效果選擇l日齡AA肉仔雞360羽，隨機(jī)分成對照組和試-驗I、II、m組4個處理組。每組3個重復(fù)。每個重復(fù)30只。對照組組飼喂基礎(chǔ)日^f'良，試驗I、試驗n、試驗III組分別用5%、10%和15%本實(shí)施例的微生態(tài)發(fā)酵蛋白飼料替代基礎(chǔ)日糧中等量的豆粕。對肉雞平均體重、平均日增重和料重比的影響見表-3。表3:微生態(tài)發(fā)酵蛋白伺料對肉仔雞生長性能的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>表3表明日糧中添加微生態(tài)發(fā)酵蛋白飼料能顯著提高肉雞生長性能，121日齡和1~42日齡階段的平均日增重試驗I、試驗II、試驗III組分別比對照組提高5.0%(P<0.05),9.6%(P<0.05)，8.7%(P<0.05)和7.0%(P<0.05),11.50/o(P<0.05),9.30/o(P<0.05);121日齡和142日齡階段的料重比試驗i、試驗ii、試驗m組分別比對照組降低9.0%(P<0.05),10.20/o(P<0.05),13.30/o(P<0.05)#口8.10/。(P<0.05),12.10/0(PO.05),11.1%(PO.05)。權(quán)利要求1.一種微生態(tài)發(fā)酵蛋白飼料，所述的飼料是由豆粕和蠶蛹以90～98:2～10質(zhì)量比混合后加水蒸煮制得固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，并在固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基上接種枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)、釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、乳酸桿菌(Lactobacillussp.)和少孢根霉(Rhizopusoligosporus)混合菌種，再于33～37℃下共混發(fā)酵培養(yǎng)30～45小時，發(fā)酵結(jié)束后將發(fā)酵產(chǎn)物干燥、粉碎制得到所述微生態(tài)發(fā)酵蛋白飼料。2.如權(quán)利要求所述的微生態(tài)發(fā)酵蛋白飼料，其特征在于所述的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基按如下方法制得豆粕和蠶蛹以90-98:210質(zhì)量比混合后，加入質(zhì)量為豆粕和蠶蛹質(zhì)量之和0.651.0#"的水，于0.120.15MPa壓力下蒸煮3040min得到固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基。3.—種微生態(tài)發(fā)酵蛋白飼料的制備方法，所述方法是將枯草芽孢桿菌(Bacz'〃ussmZ^7z、)、酉良酒酵母(6^cc/wram_ycascev/s/ae)、專'L酉臾斥干菌(丄actok"7/ws)和少孑包才艮霉(i/ziz<9/mso/ZgosporwiO混合菌種4妻種至固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，于3337。C下共混發(fā)酵培養(yǎng)3045小時，發(fā)酵結(jié)束后將發(fā)酵產(chǎn)物干燥至含水量小于10%,粉碎至40~60目即得到所述微生態(tài)發(fā)酵蛋白伺料；所述固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基由豆粕和蠶蛹以9098:2~10質(zhì)量比混合后加水蒸煮得到。4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述混合菌種接種量為以種子液或種曲質(zhì)量占固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基干重質(zhì)量百分比計，枯草芽孢桿菌種子液為0.1%~2%,釀酒酵母種曲為5%~12%,乳酸桿菌種子液為0.4%~1.2%，少孢根霉種曲1~2%;所述枯草芽孢桿菌種子液由如下方法制備得到枯草芽孢桿菌接種至適用于枯草芽孢桿菌的液體種子培養(yǎng)基，3537°C、220r/min搖床培養(yǎng)2426小時，得到枯草芽孢桿菌種子液；所述釀酒酵母種曲由如下方法制備得到釀酒酵母接種至適用于釀酒酵母的種子培養(yǎng)基，3032。C培養(yǎng)18~20小時，得到釀酒酵母種曲；所述乳酸桿菌種子液由如下方法制備得到乳酸桿菌接種至適用于乳酸桿菌的液體種子培養(yǎng)基，25~27°C、220r/min培養(yǎng)2426小時，得到乳酸桿菌種子液；所述少孢根霉種曲由如下方法制備得到少孢根霉接種至適用于少孢根霉的液體種子培養(yǎng)基，3537°C、220r/min培養(yǎng)2426小時，收獲菌絲體，粉碎，滅菌，得到少孢根霉種曲。5.如權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于所述枯草芽孢桿菌為^flc/〃MswZ/77/sACCC01185，酉良酒酵母為^Sacc/zaramycescerev/w'aeACCC20042，乳酸桿菌為丄acto6ac/〃wACCC11026,少孢根霉為i/izo/^o/ZgoyporwsACCC30496。6.如權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于所述固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基由豆粕和蠶蛹以9098:210質(zhì)量比混合后，力口入質(zhì)量為豆粕和蠶蛹質(zhì)量之和0.651.0倍的水，于0.120.15MPa壓力下蒸煮3040min得到。全文摘要本發(fā)明提供了一種微生態(tài)發(fā)酵蛋白飼料及其制備方法，所述的飼料是由豆粕和蠶蛹以90～98∶2～10質(zhì)量比混合后加水蒸煮制得固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，并在固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基上接種枯草芽孢桿菌、釀酒酵母、乳酸桿菌和少孢根霉混合菌種，再于33～37℃下共混發(fā)酵培養(yǎng)30～45小時，發(fā)酵結(jié)束后將發(fā)酵產(chǎn)物干燥、粉碎制得到所述微生態(tài)發(fā)酵蛋白飼料。本發(fā)明微生態(tài)發(fā)酵蛋白飼料含有多種生物活性肽，小肽含量達(dá)22％以上，有助消化和促進(jìn)生長；富含乳酸桿菌、酵母菌，有利于調(diào)控動物腸道有益微生物菌群；適口性好，具有良好誘食效果，促進(jìn)幼齡動物采食；含有大豆異黃酮0.05％以上，能顯著提高機(jī)體免疫力，提高動物生產(chǎn)性能；還可減輕糞便排泄物的臭味；能完全替代魚粉、血漿蛋白粉等動物性蛋白飼料。文檔編號A23K1/00GK101449739SQ20081016384公開日2009年6月10日申請日期2008年12月25日優(yōu)先權(quán)日2008年12月25日發(fā)明者徐張賢,楊彩梅,洪奇華,金妙仁,陳安國申請人:浙江大學(xué)