專利名稱：：高產(chǎn)泌乳奶牛蛋白飼料及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種動物飼料，尤其涉及一種高產(chǎn)泌乳奶牛的蛋白飼料，本發(fā)明還涉及該蛋白飼料的制備方法，屬于奶牛飼料領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：從改善飼料加工工藝角度研究高能高蛋白植物性飼料原料祠喂高產(chǎn)奶牛對牛乳脂中多不飽和脂肪酸(PolyunsaturatedFattyAcids,簡稱PUFAs)含量的影響是未來奶牛營養(yǎng)和乳品科學(xué)研究的重點。PUFAs是一類重要的營養(yǎng)物質(zhì)，n-3系列和n-6系列PUFAs在反芻動物體內(nèi)發(fā)揮著重要的作用，包括脂類代謝、心血管功能調(diào)節(jié)、免疫調(diào)節(jié)、對骨質(zhì)形成的調(diào)控等各個方面。研究表明，反芻動物體內(nèi)瘤胃孩i生物在氫化PUFAs過程中形成的重要中間產(chǎn)物共軛亞油酸(ConjugatedLinoleicAcids,簡稱CLA)具有抗擊動月永粥樣石更化、抗癌、降低血液和肝臟中膽固醇含量、抑制脂肪沉積等多種生物學(xué)活性；可提高飼料轉(zhuǎn)化率，提高動物生產(chǎn)性能，有效改善乳品品質(zhì)。因此乳脂中PUFAs的含量及結(jié)構(gòu)尤其CLA含量是衡量奶牛乳品品質(zhì)的重要指標(biāo)。全脂大豆富含多不飽和脂肪酸，是n-3系列和n-6系列PUFAs最經(jīng)濟(jì)的來源之一。生大豆內(nèi)由于含有胰蛋白酶抑制因子、尿素酶、血球凝集素等不利于動物消化的抗?fàn)I養(yǎng)因子，不適宜直接飼喂反芻家畜。膨化全脂大豆(ExtrudedFull-fatSoybean,簡稱EFFSB)是目前最靈活、最普遍、經(jīng)濟(jì)上最有吸引力的熱處理技術(shù)之一，因此，對稚齡的反芻動物和泌乳前期母牛，是一種既經(jīng)濟(jì)又方^更的營養(yǎng)來源。動物養(yǎng)殖業(yè)被認(rèn)為是環(huán)境污染的重要來源之一。利用血清或乳中尿素氮含量以及乳蛋白含量評估奶牛群體能量和蛋白質(zhì):f聶入狀況在歐洲(Nagel，1994)、美國(Hutjens和Barmore，1995)、日本(0ugi,1994)和臺灣省(H麗ang等，2000)進(jìn)行了大量研究和應(yīng)用。蛋白飼料是所有日糧組成中成本最高的，在基礎(chǔ)曰糧中添加適量的膨化全脂大豆，既可以避免蛋白質(zhì)飼喂過量，減少氮的排放，又能最大限度的增加氮的利用效率，在降低飼料成本的同時，還能促進(jìn)奶牛的生長，提高牛奶的品質(zhì)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明以膨化全脂大豆為原料進(jìn)行奶牛補(bǔ)飼試驗，通過測定乳脂中PUFAs的相對含量，摸索出奶牛基礎(chǔ)日糧中膨化全脂大豆最適添加量，進(jìn)而為改善曰糧中PUFAs的組成，為通過營養(yǎng)調(diào)控提高乳產(chǎn)品質(zhì)量提供科學(xué)依據(jù)。本發(fā)明的目的提供一種高產(chǎn)泌乳奶牛蛋白飼料，按干物質(zhì)計算，該奶牛蛋白飼料含有7.5-22.5wt。/。的膨化全脂大豆(EFFSB),余量為奶?；A(chǔ)日糧(TMR);優(yōu)選的，該奶牛蛋白詞料含有15wt。/。的膨化全脂大豆(EFFSB)，余量為奶?；A(chǔ)曰糧(TMR);其中，所述的基礎(chǔ)日4泉可以由精料和粗料4安照6.5:3.5的重量比例所組成；所述的精料可以由玉米、麩皮、棉粕等組成；所述的粗料可以由玉米秸稈、東北羊草、苜蓿草或青貯等組成。將膨化全脂大豆摻入到精料中與粗料混合均勻即得本發(fā)明的奶牛蛋白飼料；本發(fā)明首先通過試驗發(fā)現(xiàn)添加膨化全脂大豆能夠明顯改善牛乳中長鏈不飽和脂肪酸的含量，能夠顯著提高奶牛產(chǎn)奶量及乳脂率、乳蛋白。這與膨化全脂大豆富含不飽和脂肪酸有關(guān)，同時也說明調(diào)整日糧結(jié)構(gòu)能夠通過PUFAs含量改善牛乳品質(zhì)。添加膨化全脂大豆能夠提高多不飽和脂肪酸C18:2中CLA的含量，即能夠提高C18:l在A9脫氬酶作用下的轉(zhuǎn)化作用，但A9脫氬酶對C18:1的轉(zhuǎn)化作用有一定的范圍，膨化全脂大豆對改善牛乳品質(zhì)特別提高功能性CLA含量有一定的添加劑量范圍，也說明膨化全脂大豆對牛乳品質(zhì)的改善必須在一定的添加比例，不是添加越多越好。本發(fā)明在奶牛正常的飼養(yǎng)條件下(TMR)額外補(bǔ)飼膨化全脂大豆，結(jié)果發(fā)現(xiàn)添加膨化全脂大豆對奶牛增產(chǎn)具有明顯的功效，-f旦膨化全脂大豆達(dá)到一定的添加量后對奶牛的增產(chǎn)效果有限甚至有下降的趨勢，這可能與膨化全脂大豆除了富含脂肪酸外還具有優(yōu)質(zhì)的蛋白質(zhì)有關(guān)，過量添加會導(dǎo)致營養(yǎng)過剩。添加膨化全脂大豆能夠明顯提高乳脂率，這可能與膨化全脂大豆富含脂肪酸有關(guān)。與對照組(不添加膨化全脂大豆)相比，奶牛蛋白飼料含有7.5-22.5wt。/。的膨化全脂大豆能夠明顯提高奶牛乳脂率，達(dá)到極顯著水平(P<0.01)，但膨化大豆添加量超過22.5%時，乳脂率明顯下降，這可能膨化全脂大豆添加量過高，因為膨化全脂大豆富含脂肪酸，過多的脂肪酸影響了瘤胃的纖維消化，導(dǎo)致瘤胃顯微消化率下降，導(dǎo)致乳脂率下降。大豆經(jīng)過膨化明顯改善了脂肪酸的結(jié)構(gòu)與利用效率。與乳脂率相比較，乳蛋白呈現(xiàn)逐步增加的趨勢，奶牛蛋白飼料含有15wt%的膨化全脂大豆時與對照組相比，乳蛋白差異顯著(P<0.05),但隨添加量的增加，乳蛋白保持穩(wěn)定，差異不顯著。在添加不同比例全脂膨化大豆的處理組間，對中鏈飽和脂肪酸分析表明，添加15°/。的膨化全脂大豆可顯著降低乳脂中C14:Q、C16:G的相對含量。對長鏈不飽和脂肪酸C18:ln9、C18:2n9分析表明，在全脂膨化大豆添加量為15%的水平下其相對含量最高。添加15%的膨化全脂大豆可顯著增加乳脂中C18:ln9的相對含量。添加15%與22.55%的膨化全脂大豆相比，雖然二者之間沒有顯著差異，但15%水平下的C18:2n9相對含量較高，22.5°/。水平下略有下降。試驗結(jié)果表明，添加7.5%、15%、22.5°/。的膨化全脂大豆的不同處理組間，添加15%的膨化全脂大豆飼喂高產(chǎn)泌乳奶牛最佳，而添加超過22.5%在一定程度上造成了飼料的浪費(fèi)。從脂肪酸含量變化的角度看，高產(chǎn)泌乳奶牛日糧中添加15%膨化全脂大豆處理組效果最好。從奶牛產(chǎn)奶性能分析可以看出，奶牛補(bǔ)飼膨化全脂大豆，可以顯著提高奶牛產(chǎn)奶量、乳脂與乳蛋白，差異達(dá)到極顯著與顯著水平。圖1CLA含量在不同膨化添加水平下變化曲線圖。圖2不同試驗階段奶牛MUN變化規(guī)律。圖3MUN與BUN相關(guān)關(guān)系曲線。具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例來進(jìn)一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點和特點將會隨著描述而更為清楚。但這些實施例僅是范例性的，并不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。試驗例1l試驗材料與方法1.1材料1.1.1試驗材料干法膨化全脂大豆購自北京宏富天綠高科技發(fā)展中心，干法膨化全脂大豆粗蛋白含量36-38%,粗脂肪含量17-19%。1.1.2試驗動物及飼養(yǎng)管理選#^北京南邵京北奶牛場胎次、體重相近，產(chǎn)犢50天左右的12頭泌乳高峰期中國荷斯坦奶牛，隨機(jī)分為四組，每組3頭。試驗?zāi)膛１３峙稣５娘曫B(yǎng)管理條件，每天飼喂三次飼料，擠三次奶。1.1.3奶牛基礎(chǔ)日糧(TMR)的組成見表1。日糧一次性備齊，使得各種成分水平一致。表l奶牛TMR基礎(chǔ)日糧配方及營養(yǎng)水平項目配比(％)營養(yǎng)水平It.emPercentageNutrientlevel精料192DM玉米Gorn125CP^禾白Soybeanmeal25ASH棉粕30ADF麩皮Wheatbran50NDF預(yù)混料Premix2.5磷酸氫鈣CaHP046.25P粗料415青貯料Silage180酒糟150棉籽Cotton25食鹽Salt3.751.2試驗設(shè)計采用4x4拉丁方設(shè)計，以消除動物不同個體之間的差異，保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。4種處理如下對照組飼p畏基礎(chǔ)日4泉；處理1組基礎(chǔ)日糧+膨化全脂大豆(_^出日糧與膨化全脂大豆的重量比例為92.5:7.5);處理2組基礎(chǔ)日糧+膨化全脂大豆(基礎(chǔ)日糧與膨化全脂大豆的重量比例為85:15);處理3組基礎(chǔ)日糧+膨化全脂大豆(基礎(chǔ)日糧與膨化全脂大豆的重量比例為77.5:22.5)。每天分3次送入T魔攪拌車中，現(xiàn)拌現(xiàn)喂。試驗共分四期進(jìn)行，每個試驗期持續(xù)3周，前2周為預(yù)飼期。每期試驗第三周1、3、5、7天耳又奶樣50ml，第七天取血樣。在各試一驗期的D15、D17、D19、D21記錄產(chǎn)奶量并:f又奶樣進(jìn)行DHI測定。奶樣及血樣用便攜式冰箱4。C條件下運(yùn)輸保存。置于-20。C冷凍保存并用GC/MS測定脂肪酸及CLA。1.3儀器及試劑美國Agilent公司氣相色i普6890N，美國Agilent公司質(zhì)譜HP5973N,毛細(xì)管色鐠柱HP-5(30mxO.25mmxO.25iam)，搖床，電熱恒溫鼓風(fēng)千燥箱，冰箱，車載便攜式水箱。試劑包括正己烷、甲醇、氯仿、無水乙醇、無水硫酸鈉、氫氧化鈉等均為分析純；高純氮(99.999%);高純氦氣(99.999°/。)。1.4分析指標(biāo)及測定方法1.4.1奶樣中脂肪酸的提取取2mL奶樣，加入正己烷2mL,兩次萃取收集有機(jī)相(如有泡沫可加入數(shù)滴無水乙醇消泡)，再加入2mL0.5mol/LKOH-甲醇溶液，于恒溫振蕩搖床50。C搖30min。冷卻后，靜置分層，收集正己烷層，加入干燥劑無水硫酸鈉，水箱冷8藏靜置12小時以上后，過0.45um微孔濾膜進(jìn)行過濾，并取1nL注入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(Gaschromatography-Massspectrometer,GC-MS)進(jìn)行GC/MS分析。1.4.2色譜條件釆用程序升溫，HP-5毛細(xì)管色譜柱30mx0.25mmx0.25|um,載氣為高純氦氣(99.999%),氦氣流速為1.GmL/min。進(jìn)樣口溫度為25(TC，起始柱溫為150°C，保持lmin,以15。C/min升溫至200°C，以2。C/min升溫至250°C,保持5min。共需34.33min。1.4.3質(zhì)譜條件釆用電子轟擊方式或化學(xué)電離方式進(jìn)行離子化，El電離能量為70eV,離子源為250,四極桿溫度150。C,電壓為1576V,質(zhì)量掃描范圍10-650m/z。1.4.4定性和定量以PUFAs及共軛亞油酸甲酯標(biāo)樣的保留時間為依據(jù)，結(jié)合質(zhì)鐠數(shù)據(jù)庫和有機(jī)物質(zhì)譜圖庫對共軛亞油酸和其他脂肪酸進(jìn)行定性鑒別。以面積歸一化法計算各脂肪酸的相對含量。1.5數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)采用MicrosoftExcel2000軟件初步整理，用SASV9.0軟件進(jìn)行方差統(tǒng)計分析及相關(guān)性分析。2試驗結(jié)果與分析2.1奶中PUFAs及CLA含量及多重比較結(jié)果見表2:表2奶中PUt'As及CLA含量及多重比較結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>處理3組960.47o/oab9.46%b0,98%a28.52%b20.32%a24.04%^2.54%b0.51%aSEM5.53E-060.0004996.76E-060.0016370.0009170.0017820.0003391.13E-06注A,B，C:P<0.01a,b,c:P<0.05Note:A，B,C:P<0.01a，b，c:P<0.05乂人表2中可以看出，在不同膨化全脂大豆添加水平下，C14:lnll在對照組組與處理l組見差異不顯著，而當(dāng)添加量達(dá)到15%時，含量明顯下降，達(dá)到顯著水平，^旦添加量達(dá)到22.5%時，含量又明顯增加并達(dá)到顯著水平。C14:lnl1含量的增加與某些疾病的發(fā)生有關(guān)，添加膨化全脂大豆能夠明顯改善C14:lnll的水平，^l必須在一定的添加范圍內(nèi)，添加量高或^[氐均會影響C14:lnll水平。隨膨化全脂大豆添加量的增加，C14:O含量呈明顯下降的趨勢，當(dāng)添加量達(dá)到15%時添加量下降達(dá)到顯著水平，全脂大豆添加量繼續(xù)增加，差異不顯著，說明添加膨化全脂大豆能夠明顯減低C14:0水平，但含量繼續(xù)增加，含量有增長的趨勢，但差異不顯著。不同添加水平下，C16:l含量不受影響，說明C16:1不受日糧改變的影響，在牛奶生產(chǎn)中比較穩(wěn)定。C16:O含量在添加膨化全脂大豆15%時，水平最低并于其他添加組差異均達(dá)到顯著水平，與對照組相比，分別下降近5.29%、12.42%和8.69%,C16:0與某些疾病的發(fā)生有關(guān),添加15%膨化全脂大豆達(dá)到明顯減低C16:0的作用。C18:G與C16:1表現(xiàn)同樣的變化趨勢，即含量不受日糧變化的影響。在不同的膨化全脂大豆水平添加水平下，在膨化全脂大豆添加量達(dá)到15°/以前，C18:1C9呈現(xiàn)極顯著的差異，與對照組相比，C18:ln9的相對含量分別增加了6.47°/、12.22%和4.46%,說明日糧中添加膨化全脂大豆能夠明顯提高牛乳中不飽和脂肪酸的水平，這與大豆富含亞油酸有關(guān)，但當(dāng)添加量達(dá)到15%時，差異不顯著，說明添加量達(dá)到一定水平即可改善牛乳品質(zhì)，過量添加對改善牛乳品質(zhì)無益。C18:2C9呈現(xiàn)與C18:1C9同樣的變化趨勢，隨膨化全脂大豆添加量的增加，C18:2C9含量增加，與對照組相比，C18:2n9的相對含量可分別增加了9.92%、22.53%和18.11%,達(dá)到15%時，差異顯著，^f旦繼續(xù)增加，差異不顯著。CLA含量隨膨化全脂大豆添加量的增加而增加，當(dāng)添加量達(dá)到7.5%時與對照組相比即達(dá)到顯著水平，但繼續(xù)增加，差異不顯著，CLA含量變化曲線圖見圖1。本試驗結(jié)果表明，添加膨化全脂大豆能夠明顯改善牛乳中長鏈不飽和脂肪酸的含量，這與膨化全脂大豆富含不飽和脂肪酸有關(guān)，同時也說明調(diào)整日糧結(jié)構(gòu)能夠通過PUFAs含量改善牛乳品質(zhì)，本試^r結(jié)果也說明膨化全脂大豆對牛乳品質(zhì)的改善必須在一定的添加比例，不是添加越多越好。2.2血中PUFAs及CLA含量及多重比較結(jié)果見表3:表3:PUFAs及CLA含量及多重比較結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>乂人表3中可以看出，血液中脂肪酸含量除CLA含量外，CI6:0、C18:2n9等長鏈脂肪酸含量穩(wěn)定，說明血液循環(huán)系統(tǒng)具備非常穩(wěn)定的自我調(diào)節(jié)功能，改變?nèi)占Z結(jié)構(gòu)對血液脂肪酸的組成沒有顯著影響。但CLA含量在各處理組與對照組之間存在差異，當(dāng)膨化全脂大豆添加量低于7.5%時，血液中CLA含量差異不顯著，當(dāng)膨化全脂大豆添加量超過7.5%時，CLA含量明顯增加，與對照組及處理l組相比，含量分別增加50.56°/、30.63%,差異顯著，^旦當(dāng)添加量達(dá)到22.5°/時，CLA含量明顯下降達(dá)21.29%,差異達(dá)到顯著水平。本試驗表明添加膨化全脂大豆能夠提高多不飽和脂肪酸C18:2中CLA的含量，即能夠提高C18:1在A9脫氫酶作用下的轉(zhuǎn)化作用，但A9脫氫酶對C18:1的轉(zhuǎn)化作用有一定的范圍，膨化全脂大豆對改善牛乳品質(zhì)特別提高功能性CLA含量有一定的添加劑量范圍。3.3添加膨化全脂大豆對奶牛產(chǎn)奶量及乳品質(zhì)的影響見表4<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>根據(jù)奶牛生產(chǎn)性能測定(DHI)。從表3可以看出，添加膨化全脂大豆可以明顯提高奶牛產(chǎn)奶量，與對照組相比，處理1組、處理2組和處理3組的產(chǎn)奶量分別提高產(chǎn)奶量1.68kg、2.83kg、2.74kg，差異顯著(P<0.05)。Rakess等(1""和Schingoethe(1979)報道，經(jīng)熱處理的大豆飼喂奶牛，能提高奶產(chǎn)量和FCM奶產(chǎn)量。但處理2組和處理3組對增加產(chǎn)奶量差異不顯著，甚至有下降的趨勢。本試驗是在奶牛正常的飼養(yǎng)條件下(TMR)額外補(bǔ)飼膨化全脂大豆，說明添加膨化全脂大豆對奶牛增產(chǎn)具有明顯的功效，但膨化全脂大豆達(dá)到一定的添加量后對奶牛的增產(chǎn)效果有限甚至有下降的趨勢，這可能與膨化全脂大豆除了富含脂肪酸外，還具有優(yōu)質(zhì)的蛋白質(zhì)，過量添加導(dǎo)致營養(yǎng)過剩。添加膨化全脂大豆能夠明顯提高乳脂率，這可能與膨化全脂大豆富含脂肪酸有關(guān)。與對照組相比，處理1組和處理2組能夠明顯提高乳脂率，達(dá)到極顯著水平(P<0.01)，但膨化大豆添加量達(dá)到22.5%時，乳脂率明顯下降，這可能膨化全脂大豆添加量過高，因為膨化全脂大豆富含脂肪酸，過多的脂肪酸影響了瘤胃的纖維消化，導(dǎo)致瘤胃顯微消化率下降，導(dǎo)致乳脂率下降。大豆經(jīng)過膨化明顯改善了脂肪酸的結(jié)構(gòu)與利用效率。與乳脂率相比較，乳蛋白呈現(xiàn)逐步增加的趨勢，添加1%時與對照組相比，乳蛋白差異顯著(P<0.05)，但隨添加量的增加，乳蛋白保持穩(wěn)定，差異不顯著。3試^瞼結(jié)論3.1不同比例膨化全脂大豆對高產(chǎn)泌乳奶牛乳脂中不飽和脂肪酸含量影響添加膨化全脂大豆可顯著提高牛乳脂中PUFAs的含量，飼喂膨化全脂大豆能夠顯著提高奶牛產(chǎn)奶量及乳脂率本試驗研究結(jié)果顯示日糧中添加不同比例的膨化大豆對飽和脂肪酸的降低較明顯，且C14:0和C16:0的相對含量與對照組中相比差異顯著，C18:ln9、C18:2n9的含量也呈顯著性地增加，試驗結(jié)果顯示長鏈脂肪酸含量的增加可抑制乳腺中中短鏈脂肪酸的從頭合成。與對照組相比，添加膨化全脂大豆的處理組中，長鏈不飽和脂肪酸(C18:ln9,C18:2n9)的含量增加。牛乳中從C4:0到C14:0的所有脂肪酸和大約50%的C16:0都是由乳腺從頭合成的。膨化全脂大豆的脂肪含量為17%-19%，其含有豐富的必需脂肪酸、亞麻仁酸、蘇子油酸及豐富的卵磷脂等。在乳腺細(xì)胞中，外源性的脂肪酸即日糧中添加的脂肪酸與從頭合成的短鏈脂肪酸在脂化過程中發(fā)生相互竟?fàn)?，外源性的脂肪酸可使產(chǎn)脂酶發(fā)生負(fù)反饋作用，抑制了脂肪酸的從頭合成，從而降低了乳脂中短鏈脂肪酸的含量。添加的C18:ln9則優(yōu)先進(jìn)入乳脂中甘油三酯的sn-2位，并消耗了C16:0,有效地降低了C16:0的含量并增加了C18:1n9的含量。日糧中添加EFFSB可改變瘤胃微生物的發(fā)酵，減少乙酸的生成，從而抑制了短鏈脂肪酸的生成。3.2膨化全脂大豆最佳用量分析在添加不同比例全脂膨化大豆的處理組間，對中鏈飽和脂肪酸分析表明，添加15%的膨化全脂大豆可顯著降低乳脂中C14:0、C16:0的相對含量。對長鏈不飽和脂肪酸C18:ln9、C18:2n9分析表明，在添加量為15°/的水平下其相對含量最高。添加15%的膨化全脂大豆可顯著增加乳脂中C18:ln9的相對含量。添加1/。與22.5%的膨化全脂大豆相比，雖然二者之間沒有顯著差異，但15%添加水平下的C18:2n9相對含量較高，22.5%水平下略有下降。試驗結(jié)果表明，添加7.5%、15°/"22.5%的膨化全脂大豆的不同處理組間，添加15。/。的膨化全脂大豆飼喂高產(chǎn)泌乳奶牛最佳，而添加22.5%在一定程度上造成了飼料的浪費(fèi)。從脂肪酸含量變化的角度看，高產(chǎn)泌乳奶牛日糧中添力。15%膨化全脂大豆處理組效果最好。從奶牛產(chǎn)奶性能分析可以看出，奶牛補(bǔ)飼膨化全脂大豆，可以顯著提高奶牛產(chǎn)奶量、乳脂與乳蛋白，差異達(dá)到極顯著與顯著水平。3,3膨化全脂大豆對PUFAs轉(zhuǎn)化CLA的影響CLA晃義芻動物體內(nèi)瘤胃微生物在氫化PUFAs過程中形成的中間產(chǎn)物。日并良中添加膨化全脂大豆后降低了反芻動物瘤胃微生物的加氫作用，從而使乳脂中PUFAs的含量明顯增加。本試驗結(jié)果也顯示添加EFFSB降低了乳脂中從頭合成的脂肪酸含量，其原因在于大豆油籽中的PUFAs影響瘤胃發(fā)酵模型，降低了乙酸和丙酸之比。反芻動物瘤胃亞油酸的加氫作用增加了乳脂中CLA的含量(McGuireeta1.，1996),其他脂肪酸可促進(jìn)CLA的生成，而且乳脂中trans-11C18:1與CLA之間存在著;f艮強(qiáng)的線性關(guān)系(R2=0.664,P<0.05)。由此可推斷出，PUFAs含量的增加可促進(jìn)CLA含量的增加。添加EFFSB降低了乳脂中易引起高膽固醇疾病的飽和脂肪酸含量，增加了CLA等有益脂肪酸的含量，改變了乳脂中的不飽和與飽和脂肪酸以及多不飽和與飽和脂肪酸相互之間的比值，且均是向著有利于人類健康的脂肪酸之比靠近。試馬全例21材料與方法1.1材料1.1.1試驗材料膨化全脂大豆由北京農(nóng)學(xué)院飼料研究所提供，營養(yǎng)成分見表5。1.1.2試驗動物與分組試驗選用北京昌平南邵京北奶牛場12頭基本條件相同的處于泌乳高峰期(泌乳50天)的中國荷斯坦奶牛，隨機(jī)分成四個處理，每個處理3個重復(fù)。試驗?zāi)膛１３峙稣５乃硼B(yǎng)管理條件，每天喂三次料，擠三次奶。1.1.3試-險日4泉與處理試驗前測定奶牛全混日糧營養(yǎng)成分，根據(jù)奶牛泌乳高峰期營養(yǎng)需要特點并參考服C(2004)奶牛營養(yǎng)需要推薦量確定膨化全脂大豆的添加量。在基礎(chǔ)日糧(TMR)中加入分別加入4種不同添加量的膨化全脂大豆，營養(yǎng)成分見表5。4種不同的添加量如下對照組飼喂基礎(chǔ)日糧+膨化全脂大豆0kg;試驗1組基礎(chǔ)日糧+膨化全脂大豆(基礎(chǔ)日糧與膨化全脂大豆的重量比例為92.5:7.5);試驗2組基礎(chǔ)日糧+膨化全脂大豆(基礎(chǔ)日糧與膨化全脂大豆的重量比例為85:15);試驗3組基礎(chǔ)日糧+膨化全脂大豆(基礎(chǔ)日糧與膨化全脂大豆的重量比例為77.5:22.5)。每日銅喂3次，膨化全脂大豆添加量平均分配。表5膨化全脂大豆菅養(yǎng)成分(單位g/kg、teal/kg)可消化蛋白粗脂肪粗纖維灰分鈣磷有效磷賴氨酸蛋氨酸水分粗蛋白代謝能4270表6奶牛TMR基礎(chǔ)日糧配方及T營養(yǎng)水平％項目配比(%)營養(yǎng)水平ItemPercentageNutrientlevel精料192DM玉米Corn125CPS禾白Soybeanmsal25ASH棉粕30ADF麩皮Wheatbran50NDF預(yù)混料Premix2.5Ca磷酸氫鈣CaHP046.25P粗料415青貯料Silage180酒糟150棉籽Cotton25食鹽Salt3.751.1.4試4企時間自2006年2月22日至5月25日止1.1.5試驗主要儀器設(shè)備奶樣提取及儲運(yùn)設(shè)備(便攜式冰桶4。C條件下保存)；血樣提取及儲運(yùn)設(shè)備(-20。C冰箱、3000xg離心機(jī)、286IU肝素抗;疑)。島津半自動凱氏定氮儀；日立7020生化分析儀；離心機(jī)；超聲波振蕩儀；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱；車載水箱(4。C);冰拒(-2(TC~4°C)。分析天平(千分精度)；消煮設(shè)備裝置(半自動凱氏定氮儀)；消煮爐；酸式滴定管10,25ml;凱式燒弁瓦250ml;容量并瓦100ml;錐形并瓦150，250ml;移液管2,5，10ml。1.1.6試^r所用試劑98°/。濃度濃硫酸；催化劑(無水CuS04);鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液(0.00999mol/L);硼酸標(biāo)準(zhǔn)液(0.lmol/L);沸石。1.2方法1.2.1試驗設(shè)計本試驗釆用4x4復(fù)合拉丁方設(shè)計方法，試驗共分4期，每期21天，前14天為預(yù)試，在每個試驗期中，每組牛飼喂相同的基礎(chǔ)日糧，并記錄奶牛編號，分娩日期，305天產(chǎn)奶量，乳脂率，蛋白率以及胎次等。1.2.2樣品采集奶樣采集每個試驗期第3周第1、3、5、7天的奶樣，每份奶樣50ml。奶樣為一天三次取奶的平均混合樣。每次奶樣在4。C條件下保存及運(yùn)輸至實驗室。經(jīng)凱氏定氮后得出乳內(nèi)尿素氮含量及全氮比例。血樣于每個試驗期第3周第7天擠奶后立即從股動脈取血10ml，把血樣i文入內(nèi)含286IU肝素(用100jul生理鹽水溶解)的速凝管中，以4000xg離心25min獲得血清。將血清保存在-20。C水箱中，作BUN分析時再取出。1.2.3測定指標(biāo)MUNBUN1.2.4測定方法1.2,4.1MUN的測定奶樣選用凱氏定氮法測奶中全氮，分析儀器為北京農(nóng)學(xué)院中心試驗室島津半自動凱氏定氮儀。凱氏定氮法包含步驟①稱重以5ml移液管取3ml奶樣于分析天平(千分精度)上稱重，并記錄數(shù)據(jù)。②消化取樣后(3ml并取對照組)，于定氮管中加入催化劑(無水CuS(U、10ml濃硫酸(濃度98%)與沸石后，上16孔消煮爐進(jìn)行消煮，經(jīng)2~3小時逐漸增溫至420。C,煮至綠色透明。③定容把消煮后溶液經(jīng)23次潤洗，連洗液一起移入100ml容量瓶，待降至室溫，開始定容。④定氮取1Qml溶液至定氮管，于錐形并瓦中加10ml硼酸標(biāo)準(zhǔn)液，經(jīng)半自動凱氏定氮儀處理后，對錐形瓶內(nèi)試劑，以鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液滴定，記錄數(shù)據(jù)。⑤數(shù)據(jù)統(tǒng)計及分析1.2.4.2BUN的測定血樣選用兩點速率法測定，分析儀器為日立7020生化分析儀。上才幾前處理①離心將速凝管放入離心機(jī)中離心(4000xg;25min),分理出血清、膠原纖維、血沉三層。②取樣取l~2ml血清，移入微量試盒中，登記好編號，放入冰箱保存，準(zhǔn)備上機(jī)。③上機(jī)并記錄數(shù)據(jù)結(jié)果1.3數(shù)據(jù)處理所得數(shù)據(jù)通過SPSS13.Q統(tǒng)計分析軟件，經(jīng)one-way-AN0VA法進(jìn)行方差分析，并以LSD法檢測各處理平均數(shù)間的差異顯著性，差異顯著則進(jìn)行多重比較，若P〈0.01(差異極顯著)，P<0.05(差異顯著)時，則差異顯著繼續(xù)多重比較，并列出關(guān)系圖。1.3.1試驗計算公式BUN=MUN+UN+C(BUN——血中尿素氮MUN——乳中尿素氮UN——尿氮C——體循環(huán)未代謝尿素氮)奶牛氮利用率二MUN/BUNx100%N(%)=[(V-V0)*0.014]/W*6.25MUN=N*m/v*2.3077膨化全脂大豆添加比率=膨化全脂大豆添加量/日采食量(V——奶樣定氮所用鹽酸體積；V?！瞻讟佣ǖ浚籛——奶樣重；m/v——奶樣密度；N—一奶中全氮百分含量)；2試驗結(jié)果與分析2.1膨化全脂大豆對乳中尿素氮(MUN)含量的影響膨化全脂大豆不同添加水平對乳中尿素氮的影響及變化規(guī)律見圖2。奶牛小腸中吸收的蛋白質(zhì)數(shù)量和質(zhì)量直接影響奶的生產(chǎn)(Huhtanen，1998)，但過量飼喂蛋白質(zhì)會增加環(huán)境中氮的排放量(Castillo等，2000;FrankandSwensson,2002),影響繁殖性能(Shingfield等，1999)和生產(chǎn)性能(陸靜，2001),并且增加飼料成本。血尿素氮(BUN)和乳尿素氮(MUN)濃度都可作為奶牛蛋白質(zhì)代謝和才聶入的指示指標(biāo)(01tner等，1983;Roseler等，1993)。相比4交而言MUN的測定采樣較為方便。圖2分析可發(fā)現(xiàn)，對照組MUN含量隨泌乳期的延長呈直線下降的趨勢，說明在泌乳高峰期，奶牛對氮的需求量增大導(dǎo)致MUN的生成量下降，到泌乳第100天即泌乳高峰期即將結(jié)束時，M麗含量逐漸恢復(fù)正常水平。與對照組相比，試驗組的MUN含量的下降趨勢明顯減緩，試驗1組與試驗3組呈現(xiàn)相似的變化規(guī)律，但試驗2組的MUN含量與對照組的變化趨勢相反，在試驗第三期，試驗2組MUN的含量最大，然后逐漸下降。在等能狀況下，奶牛蛋白質(zhì)攝入量與MUN、BUN—般呈正相關(guān)(Hof等，1997)，乳尿素氮含量反映日糧蛋白質(zhì)的攝入的平衡狀況(Sato等1998;Hwang等2000)。本試驗表明，與對照組比較，添加膨化全脂大豆明顯提高乳尿素氮的水平，其中15%添加組對乳尿素氮的影響顯著。但試驗3組的MUN含量曲線規(guī)律與試驗l類似，說明試驗3組蛋白質(zhì)含量顯著高于奶牛的生產(chǎn)需要，大量的尿素經(jīng)過再循環(huán)途徑從尿素中排出，造成蛋白質(zhì)浪費(fèi)。由試驗結(jié)果可見，膨化全脂大豆添加水平與MUN呈正弦曲線關(guān)系，拐點在膨化全脂大豆添加量15%。說明試驗2組的效果優(yōu)于試驗1組、試驗3組及對照組，同時也說明膨化全脂大豆對奶牛MUN的影響有一定的變化規(guī)律，膨化全脂大豆添加過量將造成蛋白質(zhì)的浪費(fèi)。本試驗結(jié)果表明膨化全脂大豆15°/。添加量較合適。2.1.1各膨化全脂大豆添加組間MUN值的多重比較，如表7各組間MUN值多重比較。表7不同添加水平下的組間MUN多重比較表(LSD)不同添加水平平均數(shù)平均數(shù)一2.61平均數(shù)一2.62平均數(shù)一2.6415%2.690.08**0.007*0.00522.5%2.640.03*0.0027.5%2.620.01對照組(0)2.61注在差數(shù)的右上方標(biāo)表示差異極顯著(P<0.01)，在差數(shù)的右上方標(biāo)"*"表示差異顯著(P<0.05)，未標(biāo)記表示差異不顯著(P〉0.05)。經(jīng)過方差分析表明，試驗結(jié)束時不同水平組間差異顯著，經(jīng)過多重比較處理表明，試驗2組祠養(yǎng)奶牛MUN值極顯著高于對照組(P<0.01)，顯著高于試驗3組(P<0.05),與試驗1組差異顯著(P<0.05);試驗3組詞養(yǎng)奶牛MUN值顯著高于對照組(P<0.05),與試驗1組差異顯著；試驗1組與對照組差異不顯著(P>0.05)。3.1.2各泌乳階段MUN值的多重比較，如表8表8各泌乳階段MUN值的多重比較(LSD)組別平均數(shù)平均數(shù)-25.4平均數(shù)-25.8平均數(shù)-26.4113d27.117**1.3*0.792d26.41.00.671d25.80.4對照組(50d)25.4注在差數(shù)的右上方標(biāo)表示差異極顯著(P<0.01),在差數(shù)的右上方標(biāo)表示差異顯著(P<0.05),未標(biāo)記表示差異不顯著(P>0.05)。經(jīng)過方差分析表明，不同泌乳階段MUN各組間差異顯著。經(jīng)過多重比較處理表明，泌乳期113d時奶牛的MUN差異極顯著于50d(對照組)，并顯著于71d時，與92d的差異不顯著；92d時與71d和對照組的差異不顯著；71d與對照組的差異不顯著。以泌乳期中期(113d)的M麗為最高。由于試驗周期很長(接近3個月)，對于試驗?zāi)膛５倪x擇，要排除較大的影響因素，如隨奶牛泌乳周期的改變泌乳曲線的變化等等。因而，選擇試驗牛時盡力避開了泌乳曲線增長迅速的前50d,而泌乳期50d后，泌乳曲線增長相對平緩，可以排除試驗牛本身產(chǎn)乳周期的影響。因此試驗可以證明，試驗長時間飼喂奶牛膨化全脂大豆對奶牛蛋白質(zhì)代謝有促進(jìn)作用。3.2膨化全脂大豆對奶牛BUN的影響添加不同水平的膨化全脂大豆對奶牛BUN的對比，見表9。表9添加不同水平的膨化全脂大豆對奶牛BUN的比較<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>注在差數(shù)的右上方標(biāo)"**"表示差異極顯著(？<0.01=,在差數(shù)的右上方標(biāo)""表示差異顯著(P"C0.05-,未標(biāo)記表示差異不顯著(PX).05)。從表9中可以看出試驗3組比對照組BUN值提高6.7%，試驗2組比對照組提高2.1%,而試驗l組比對照組提高0.8%。經(jīng)SPSS統(tǒng)計軟件分析得出結(jié)論，三個試驗組BUN含量與對照組相比差異極顯著(P<0.01=。從試驗結(jié)杲可以看出，隨膨化大豆添加量的提高，BUN的含量呈不斷增加的趨勢，即添加量與BUN含量呈正相關(guān)關(guān)系。3.2.1BUN值與MUN值的相關(guān)關(guān)系及最佳膨化全脂大豆添加量表10BUN值與MUN值的相對關(guān)系<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>如圖3所示，由于反芻動物受瘤胃影響，奶牛的蛋白質(zhì)代謝過程不能量化，但通過乳中尿素氮(MUN)和血中尿素氮(BUN)的檢測，可以/人側(cè)面了解奶牛機(jī)體對蛋白質(zhì)的代謝吸收狀況，從而量化奶牛飼料中蛋白質(zhì)飼料的添加量。BUN值雖然比MUN值更加準(zhǔn)確的反映奶牛的蛋白質(zhì)代謝狀況，卻由于血液采集不如奶樣采集更加簡便宜行。通過SAS分析程序，BUN=9.6278-0.589頂U(kuò)N(R=-0.0117),即BUN與MUN呈負(fù)相關(guān)。因而，檢測與BUN值密切相關(guān)的MUN值推斷BUN的變化曲線。從表ll中可看出，添加膨化全脂大豆的3個試驗組的氮利用率都要好于對照組，其中15%添加水平的使用狀況要好于7.5%與22.5%的添加水平，BUN與MUN含氮量相比，BUN增長趨勢與MUN增長趨勢大致相同。由于22.5%添加水平與對照組相比雖有增長，但增長幅度4艮小，與15%添加組相比，明顯產(chǎn)生了負(fù)增長。7.5%添加水平到15%添加水平，牛機(jī)體的氮利用率較高，在15%添加水平左右達(dá)到峰值，之后由于超出了奶牛的代謝極限，影響了奶牛的正常氮代謝，BUN未轉(zhuǎn)化為MUN,而是隨尿N排出體外，產(chǎn)生了負(fù)增長。因而，全脂膨化全脂大豆的最佳添加量應(yīng)該是總飼料水平的15%左右，最佳蛋白比率為20.01%(匿)。表ii膨化全脂大豆最佳用量范圍分析表<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>氮利用率75.5%78.4%83.9%**75.5%注在差數(shù)的右上方標(biāo)"""表示差異極顯著(P<0.01),在差數(shù)的右上方標(biāo)表示差異顯著(P<0.05)，未標(biāo)記表示差異不顯著(P>0.05),4試驗結(jié)論4.1不同水平膨化全脂大豆對試驗?zāi)膛UN的影響雖然各試驗組內(nèi)MUN值與對照組相比差異不顯著(P>0.05),但是在試驗組間試驗2組與另兩個試驗組相比數(shù)據(jù)差異極顯著，這說明膨化全脂大豆15%添加量時奶牛對蛋白添加劑利用較佳。試驗1組比對照組MUN值提高了5.93%,方差分析表明差異顯著(P<0.05),和試驗2組相比，在添加量上有差別，可以想象，如果加大試驗l組添加量達(dá)到試驗2組的添加量時，可以提高蛋白利用效率效果，甚至達(dá)到試驗2組的飼喂效果。而試驗3組飼喂效果不如試l全2組理想。從這方面說，添加15%全脂膨化全脂大豆后如果再加大添加量不能達(dá)到提高蛋白利用效率的效果。4.2不同水平膨化全脂大豆對試—險奶牛BUN的影響從方差分析結(jié)果來看，各組與對照組間的BUN含量差異不顯著(P〉0.05)，試-險3組BUN值顯著高于其他三個組(P<0.05=。從測定數(shù)據(jù)可以看出，3個試驗組的BUN值要高于對照組，其中試驗3組的BUN值要高于其余三組，試驗1組含氮量比含氮量最低的對照組高4.1%,試驗2組的含氮量比含量最低的對照組高5.56%。試驗3組含氮量最高，比含氮量最低的對照組高8.61%。B麗與膨化全脂大豆添加量呈正比。綜合以上可見，高產(chǎn)奶牛日料中添加膨化全脂大豆對奶牛MUN值影響呈正弦曲線關(guān)系，試驗2組膨化全脂大豆添加水平祠喂效果最佳(P<0.01)。高產(chǎn)奶牛BUN值隨日料中膨化全脂大豆添加量增加而逐步增加，呈線型增長趨勢。氮利用率(MUN/BUN)呈正弦變化曲線。高產(chǎn)奶牛日糧添加15%水平膨化全脂大豆可取得最佳氮利用效率。權(quán)利要求1、一種高產(chǎn)泌乳奶牛蛋白飼料，其特征在于由奶?；A(chǔ)日糧和膨化全脂大豆組成。2、按照權(quán)利要求1所述的高產(chǎn)泌乳奶牛蛋白飼料，其特征在于按干物質(zhì)計算，該高產(chǎn)泌乳奶牛蛋白飼料含有7.5-22.5wt。/。的膨化全脂大豆，余量為奶牛基礎(chǔ)日糧。3、按照權(quán)利要求2所述的高產(chǎn)泌乳奶牛蛋白飼料，其特征在于該高產(chǎn)泌乳奶牛蛋白飼料含有15wt。/。的膨化全脂大豆，余量為奶?；A(chǔ)日糧。4、按照權(quán)利要求1所述的高產(chǎn)泌乳奶牛蛋白飼料，其特征在于所述的基礎(chǔ)日凈良由并奮料和粗料按照6.5:3.5的重量比例所組成。5、按照權(quán)利要求1所述的高產(chǎn)泌乳奶牛蛋白銅料，其特征在于所述的精料包括玉米、麩皮或棉粕；所述的粗料包括玉米秸稈、東北羊草、苜蓿草或青貯。6、一種制備權(quán)利要求1-5任何一項所述的高產(chǎn)泌乳奶牛蛋白飼料的方法，包括將膨化全脂大豆摻入到精料中與粗料混合均勻即得。7、權(quán)利要求1-5任何一項所述的高產(chǎn)泌乳奶牛蛋白飼料作為奶牛銅料的用途。全文摘要本發(fā)明公開了一種高產(chǎn)泌乳奶牛蛋白飼料及其制備方法，屬于動物飼料領(lǐng)域。該高產(chǎn)泌乳奶牛蛋白飼料由奶牛基礎(chǔ)日糧和膨化全脂大豆組成，優(yōu)選的，高產(chǎn)泌乳奶牛蛋白飼料含有7.5-22.5wt％的膨化全脂大豆，余量為奶?；A(chǔ)日糧。添加膨化全脂大豆能夠明顯改善牛乳中長鏈不飽和脂肪酸的含量，能夠顯著提高奶牛產(chǎn)奶量及乳脂率、乳蛋白。本發(fā)明通過試驗發(fā)現(xiàn)高產(chǎn)泌乳奶牛的基礎(chǔ)日糧中添加占其總重量1-5％的膨化全脂大豆時既可以避免蛋白質(zhì)飼喂過量，減少氮的排放，又能最大限度的增加氮的利用效率，在降低飼料成本的同時，還能促進(jìn)奶牛的生長，可顯著提高奶牛產(chǎn)奶量、乳脂與乳蛋白。文檔編號A23K1/18GK101564118SQ200910082609公開日2009年10月28日申請日期2009年4月21日優(yōu)先權(quán)日2009年4月21日發(fā)明者欣何,劉文奇,葉子弘,敏周,王占赫,蔣林樹,郭玉琴申請人:北京農(nóng)學(xué)院