專利名稱：包含微生物蛋白酶變體的組合物和方法
包含微生物蛋白酶變體的組合物和方法發(fā)明領(lǐng)域
本發(fā)明提供枯草桿菌蛋白酶變體和包含至少一種此處陳列的枯草桿菌蛋白酶變 體的組合物，以及使用這些變體和組合物的方法。具體的，本發(fā)明提供適于衣物清潔用途的 蛋白酶變體。
背景技術(shù)：
絲氨酸蛋白酶是包含多種酶類別的羰基水解酶亞組，具有多種特異性和生物學(xué)功 能。對(duì)枯草桿菌蛋白酶已經(jīng)進(jìn)行了大量研究，主要是出于其在清潔和飼料應(yīng)用中的用途。其 他工作則著眼于在各種應(yīng)用中可以負(fù)面影響這些酶的功能的不良環(huán)境條件(例如，暴露于 氧化劑、螯合劑、極端的溫度和/或PH)。盡管如此，本領(lǐng)域仍然需要這樣的酶系統(tǒng)，所述酶 系統(tǒng)能夠抵抗這些不良條件，并且與本領(lǐng)域目前已知的酶系統(tǒng)相比，保留了活性或具有提 高的活性。發(fā)明_既述本發(fā)明提供枯草桿菌蛋白酶變體和包含至少一種此處陳列的枯草桿菌蛋白酶變 體的組合物，以及使用這些變體和組合物的方法。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供適于衣物 清潔用途的蛋白酶變體。本發(fā)明提供分離的枯草桿菌蛋白酶變體，包含以下取代組中的至 少一組G97A-G128A-Y217Q、 G97A-L126A-G128A、 G97A-L126A-G128A-Y217Q、 G97A-L126A-Y217Q、 G97A-M124V_G128A、 G97A-M124V-G128A-Y217Q、 G97A-M124V-L126A、 G97A_M124V-L126A-G128A、 G97A_M124V-L126A-Y217Q、 G97A-M124V-Y217Q、 G97A-N123G_G128A、 G97A-N123G-G128A-Y217Q、 G9 7A-N123G-L126A、 G97A_N123G_L126A-G128A、 G9 7A-N12 3G-L126A-Y217Q、 G9 7A-N123G-M124V、 G97A_N123G-M124V-G128A、 G97A_N123G-M124V-L126A、 G97A-N123G-M124V-Y217Q、G97A-N123G-Y217Q、L 1 26A-G128A-Y217Q、 L96T-G128A-Y217Q、 L96T-G97A-G128A、 L96T-G97A-G128A-Y217Q、 L96T-G97A-L126A、 L96T-G97A-L126A-G128A、 L96T_G97A-L126A-Y217Q、 L96T_G97A-M124V、 L96T-G97A-M124V-G128A、 L96T-G97A-M124V-L126A、 L96T-G97A-M124V-Y217Q、 L96T-G97A-N123G、 L96T_G97A-N123G_G128A、 L96T_G97A-N123G_L126A、 L96T-G97A-N123G-M124V、 L96T_G97A-N123G-Y217Q、 L96T-G97A-Y217Q、 L96T-L126A-G128A、L96T-L126A-G128A-Y2 1 7Q、L96T-L126A-Y217Q、 L96T-M124V-G128A、L96T-M124V-G128A-Y2 1 7Q、L96T-M124V-L126A、 L96T-M124V-L126A-G128A、 L96T-M124V-L126A-Y217Q、 L96T-M124V-Y217Q、 L96T-N123G-G128A、L96T-N 123G-G128A-Y217Q、L96T-N 123G-L126A、 L96T-N123G-L126A-G128A、 L96T-N123G-L126A-Y217Q、 L96T-N123G-M124V、 L96T-N123G-M124V-G128A、 L96T-N123G-M124V-L126A、 L96T-N123G-M124V-Y217Q、 L96T-N123G-Y217Q、M 1 24 V-G128A-Y 217Q, M 1 24 V-L126A-G128A, M124V-L126A-G128A-Y217Q、M124V-L126A-Y217Q、N123G_G128A-Y217Q、7N123G-L126A-G128A、N1 23G_L126A-G128A-Y217Q、N123G_L126A-Y217Q、 N123G-M124V-G128A、N1 23G_M124V-G128A-Y217Q、N123G_M124V-L126A、 N123G-M124V-L126A-G128A、 N123G-M124V-L126A-Y217Q、 Nl23G-M124V-Y217Q、 N62Q-G128A-Y217Q、N62Q-G97A-G128A、N62Q-G97A-G128A-Y217Q、N62Q-G97A-L126A、 N62Q-G97A-L126A-G128A、 N62Q-G97A-L126A-Y217Q、 N62Q-G97A-M124V、 N62Q-G97A-M124V-G128A、N62Q-G97A-M124V-L126A、N62Q-G97A-M124V-Y217Q、 N62Q-G97A-N123G、 N62Q-G97A-N123G_G128A、 N62Q-G97A-N123G_L126A、 N62Q-G97A-N123G-M124V、 N62Q-G97A-N123G-Y217Q、 N62Q-G97A-Y217Q、 N62Q-L126A-G128A、N62Q-L126A-G128A-Y217Q、N62Q-L126A-Y217Q、N62Q-L96T-G128A、 N62Q-L96T-G128A-Y217Q、 N62Q-L96T-G97A、 N62Q-L96T-G97A-G128A、 N62Q-L96T-G97A-L126A、 N6 2Q-L96T-G97A-M124V、 N6 2Q-L96T-G97A-N123G、 N62Q-L96T-G97A-Y217Q、 N62Q-L96T-L126A、 N62Q-L96T-L126A-G128A、 N62Q-L96T-L126A-Y217Q、 N62Q-L96T-M124V、 N62Q-L96T-M124V-G128A、 N62Q-L96T-M124V-L126A、 N62Q-L96T-M124V-Y217Q、 N62Q-L96T-N123G、 N62Q-L96T-N123G-G128A、N62Q-L96T-N123G-L126A、N62Q-L96T-N123G-M124V、 N62Q-L96T-N123G-Y217Q、N62Q-L96T-Y 217Q、N62Q-M 1 24V-G 1 28A、 N6 2Q-M124V-G128A-Y217Q、N62Q-M124V-L126A、N62Q-M124V-L126A-G1 28A、 N62Q-M124V-L126A-Y217Q、N62Q-M124V-Y217Q、N62Q-N 123G-G128A、 N6 2Q-N12 3G-G128A-Y217Q、 N62Q-N123G_L126A、 N62Q-N123G-L126A-G128A、 N6 2Q-N123G-L126A-Y217Q、 N62Q-N123G-M124V、 N62Q-N123G-M124V-G128A、 N62Q-N123G-M124V-LU6A、N62Q-N123G-M124V-Y217Q、和 N62Q-N123G-Y217Q，其中取代位于 SEQ ID NO 1中陳列的BPN，枯草桿菌蛋白酶位置的等同位置。 本發(fā)明還提供分離的枯草桿菌蛋白酶變體，包含以下取代組中 的至少一組G97N-G128A-Y217M、G97G-G128S-Y217E、G97A-G128A-Y217Q、 G97M-G128S-Y217E、 G97A-G128S-Y217Q、 G97D-G128S-Y217Q、 G97M-G128G-Y217M、 G97G-G128S-Y217Q、G97S-G128S-Y217Q、G97G-G128A-Y217Q、G97S-G128A-Y217E、 G97A-G128S-Y217L、G97A-G128A-Y217N、G97Q-G128S-Y217L、G97A-G128A-Y217M、 G97A-G128A-Y217S、G97D-G128A-Y217Q、G97M-G128S-Y217Q、G97Q-G128G-Y217D-S87Y、 G97S-G128A-Y217N、G97A-G128S-Y217T、G97D-G128S-Y217E、G97D-G128A-Y217L、 G9 7G-G128S-Y217E-S78P-A2 7 2T、G97T_G128S_Y217D、G97D_G128A-Y217 I、 G97Q-G128S-Y217Q、 G97G-G128A-Y217D、 G97Q-G128A-Y217N、 G97S-G128A-Y217M、 G97S-G128S-Y217N、G97S-G128S-Y217M、G97E-G128S-Y217M、G97S-G128P-Y217Q、 G97T-G128S-Y217Q、G97D-G128S-Y217Q-A73T、G97E-G128S-Y217N、G97G-G128A-Y217I、 G97Q-G128A-Y217D、G97Q-G128S-Y217M、G97R-G128T-Y217Q-S162P、G97S-G128S-Y217D、 G97T-G128P-Y217I、G97Q-G128G-Y217E、G97C-G128G-Y217N、G97D-G128S-Y217H、 G97M-G128S-Y217L、G97M-G128S-Y217N、G97S-G128S-Y217E、G97M-G128S-Y217I、 G97A-G128P-Y217A、G97R-G128S-Y217D、G97D-G128A-Y217D、G97V-G128G-Y217D、 G97V-G128G-Y217E、 G97A-G128G-Y217T、 G97G-G128N-Y217L、 G97D-G128A-Y217T、 G97M-GU8A-Y217E、和 G97M-GU8A-Y217N，其中取代位于 SEQ ID NO 1 中陳列的 BPN，枯草桿菌蛋白酶位置的等同位置。 本發(fā)明還提供分離的枯草桿菌蛋白酶變體，包含以下取代組中 的至少一組S24R-S87D-Q206E、P40E-A144K-K213L、N61E-P129E-S159K、 S87D-S162K-K265N、S87D-T242R-Q275E、N61E-Q103E-N240K、S87D-T242R-K265N、 N62R-K265N-Q275E、 P129E-S145D-N240K、 P129E-P239R-K265N、 Q103E-P129E-T242R、P40E-N6 1 E--S8 7D-S162K--T242R、S24R-N62R--S8 7D-S 145D--K26 5N、P40E-N62R--S87D-Q103E-S 1 6 2K、S24R-P40E-S 1 45D--S 1 59K.-K2 1 3L、S24R--S87D-A144K--K265N--Q275E、N6 IE-P129E--S162K--K2 13L-N240K、N6 IE--S145D-S162K-K213L-T242R、S87D--A144K-S145D-S159K-Q275E、S24R--P129E-Q206E-N240K-K265N、N6 IE-Q103E--A144K--K213L-T242R、N62R--S159K-Q206E-K265N--Q275E、S24R-Q103E--P129E--N240K-K265N、N6 IE-Q103E--P129E--P239R--N240K、P129E--S145D-N240K-T242R-K265N、Q103E-S162K-Q206E-K213L-P239R、P40E-N61E-N62R-S87D-S159K-S162K-K265N、S24R-P40 E-N61E-A144K-Q206E-K213L-T242R、P40E-N61E-S87D-P129E-S159K-S162K-T242R、P40E-N6 2R-S87D-S145D-S159K-S162K-Q275E、P40E-N62R-S87D-Q103E-A144K-S159K-Q275E、P40E-N 62R-S87D-S159K-S162K-K265N-Q275E、P40E-N61E-P129E-A144K-S162K-K213L-N240K、P40E -N61E-Q103E-A144K-S159K-S162K-Q275E,P40E-N61E-Q103E-S159K-S162K-K213L-P239R,P 40E-N61E-Q103E-S159K-S162K-K213L-N240K, N62R-S87D-P129E-S145D-S159K-S162K-Q275 E、S24R-N61E-Q103E-P129E-K213L-N240K-T242R、P40E-N62R-S145D-S159K-S162K-Q206E-Q 275E,N62R-S87D-S145D-S159K-S162K-K265N-Q275E,N61E-S87D-Q103E-S159K-S162K-K213 L-T242R、S24R-N61E-Q103E-P129E-Q206E-P239R-N240K、S24R-N62R-P129E-S145D-P239R-K 265N-Q275E、S24R-N62R-P129E-Q206E-N240K-K265N-Q275E、P40E-S145D-S159K-S162K-K21 3L-P239R-Q275E、N61E-Q103E-A144K-Q206E-K213L-N240K-T242R、S24R-Q103E-P129E-S145 D-P239R-N240K-K265N、N61E-Q103E-P129E-K213L-P239R-N240K-T242R、N61E-Q103E-Q206E -K213L-P239R-N240K-T242R,S24R-P40E-N61E-S87D-Q103E-S159K-S162K-K213L-N240K.N6 1E-N62R-S87D-Q103E-S159K-S162K-K213L-T242R-Q275E、P40E-N62R-S87D-S145D-S159K-S 162K-N240K-K265N-Q275E、N62R-S87D-S145D-S159K-S162K-K213L-N240K-K265N-Q275E、S2 4R-N61E-Q103E-P129E-Q206E-K213L-P239R-N240K-T242R、S24R-N61E-Q103E-P129E-S145D -P239R-N240K-T242R-K265N、N61E-S87D-Q103E-P129E-S159K-S162K-K213L-N240K-T242R, P40E-N61E-Q103E-P129E-A144K-K213L-P239R-N240K-T242R、S24R-Q103E-P129E-S145D-Q2 06E-P239R-N240K-T242R-K265N、N61E-Q103E-P129E-A144K-Q206E-K213L-P239R-N240K-T2 42R, S24R-P40E-N61E-S87D-Q103E-P129E-A144K-K213L-P239R-N240K-T242R,S24R-P40E-N 61E-Q103E-P129E-A144K-K213L-P239R-N240K-T242R-K265N, S24R-P40E-N61E-Q103E-P129 E-A144K-Q206E-K213L-P239R-N240K-T242R、S24R-P40E-N61E-Q103E-P129E-A144K-S145D-K213L-P239R-N240K-T242R、S24R-N61E-S87D-Q103E-P129E-A144K-Q206E-K213L-P239R-N2 40K-T242R、P40E-N61E-S87D-Q103E-S145D-S159K-S162K-K213L-P239R-N240K-T242R、S24R -P40E-N61E-Q103E-P129E-S162K-Q206E-K213L-P239R-N240K-T242R、S24R-N61E-Q103E-P1 29E-A144K-S145D-Q206E-K213L-P239R-N240K-T242R、P40E-N61E-Q103E-P129E-A144K-S16 2K-Q206E-K213L-P239R-N240K-T242R、S24R-N61E-Q103E-P129E-A144K-Q206E-K213L-P239R-N240K-T242R-K265N、和 S24R-P40E-N61E-S87D-Q103E-P129E-A144K-S162K-Q206E-K213L -P239R-N240K-T242R，其中所述取代位于SEQ ID NO 1中陳列的BPN，枯草桿菌蛋白酶位置 的等同位置。本發(fā)明還提供包含G97A/G128A/Y217Q取代和另外包含上述取代組中至少一組的 枯草桿菌蛋白酶變體，其中位置對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO 1中的BPN’枯草桿菌蛋白酶的位置。本發(fā)明還提供分離的枯草桿菌蛋白酶變體，包含以下取代組中的至少一組: S53G-F58G、S53G-S78N、S53G-Y104N、S53G-I111V、S53G-A114G、S53G-N117S、S53G-S125A、 S53G-S132N、S53G-P239V、F58G-S78N、F58G-Y104N、F58G-111IV、F58G-A114G、F58G-N117S、 F58G-S125A、 F58G-S132N、 F58G-P239V、 S78N-Y104N、 S78N-I111V、 S78N-A114G、 S78N-N117S、 S78N-S125A、 S78N-S132N、 S78N-P239V、 Y104N-I111V、 Y104N-A114G、 Y104N-N117S、Y104N-S125A、Y104N-S132N、Y104N-P239V、I111V-A114G、I111V-N117S、 I111V-S125A、I111V-S132N、I111V-P239V、A114G-N117S、A114G-S125A、A114G-S132N、 A114G-P239V、N117S-S125A、N117S-S132N、N117S-P239V、S125A-S132N、S125A-P239V、 S132N-P239V、S53G-F58G-S78N、S53G-F58G-Y104N、S53G-F58G-I111V、S53G-F58G-A114G、S53G--F58G-N117S、S53G--F58G-S125A、S53G--F58G-S132N、S53G--F58G-P239V、S53G--S78N-Y104N、S53G--S78N-I111V、S53G--S78N-A114G、S53G--S78N-N117S、S53G--S78N-S125A、S53G-S78N-S132N、S53G-S78N-P239V、 S53G-Y104N-I111V、S53G-Y104N--A114G、S53G-Y104N--N117S、S53G-Y104N--S125A、S53G-Y104N--S132N、S53G-Y104N--P239V、S53G-IlllV--A114G、S53G-IlllV--N117S、S53G-IlllV--S125A、S53G-IlllV--S132N、S53G-IlllV--P239V、S53G-A114G--N117S、S53G-A114G--S125A、S53G-A114G--S132N、S53G-A114G--P239V、S53G--N117S--S125A、S53G--N117S--S132N、S53G--N117S--P239V、S53G-S125A--S132N、S53G--S125A--P239V、S53G--S132N--P239V、F58G--S78N- 104Ν、F58G--S78N-I111V、F58G--S78N-A114G、F58G--S78N-N117S、F58G--S78N-S125A、F58G--S78N-!S132N、F58G-S78N-P239V、]F58G-Y104N--I111V、F58G--Y104N--A114G、F58G--Y104N--N117S、F58G--Y104N--S125A、F58G--Y104N--S132N、F58G-Y104N--P239V、F58G-IlllV--A114G、F58G-HllV--N117S、F58G-HllV--S125A、F58G-HllV--S132N、F58G-HllV--P239V、F58G--A114G--N117S、F58G--A114G--S125A、F58G--A114G--S132N、F58G-A114G--P239V、F58G--N117S--S125A、F58G--N117S--S132N、F58G--N117S--P239V、F58G--S125A--S132N、F58G--S125A--P239V、F58G--S132N--P239V、S78N--Y104N--I111V、S78N--Y104N--A114G、S78N--Y104N--N117S、S78N--Y104N--S125A、S78N--Y104N--S132N、S78N--Y104N--P239V、S78N--IlllV--A114G、S78N--IlllV屮 117S、S78N-IlllV--S125A、S78N-IlllV--S132N、S78N-HllV--P239V、S78N-A114G--N117S、S78N-A114G--S125A、S78N-A114G--S132N、S78N--A114G--P239V、S78N--N117S--S125A、S78N--N117S--S132N、S78N--N117S--P239V、S78N--S125A--S132N、S78N--S125A--P239V、S78N-S132N-P239V、Y104N--IlllV--A114G、Y104N--IlllV--N117S、Y104N-IlllV-S125A、Y104N-IlllV-S132N、Y104N-IlllV-P239V、Y104N-Al14G-N117S、Y104N-A114G-S125A、Y104N-A114G-S132N、Y104N-A114G-P239V、Y104N-N117S--S125A、Y104N-N117S--S132N、Y104N-N117S-P239V、Y104N-S125A.-S132N、Y104N-S125A--P239V、Y104N-S132N--P239V、IlllV-A114G-N117S、IlllV-A114G.-S125A、IlllV-A114G--S132N、IlllV-A114G--P239V、10I111V-N117S-S125A、111IV-Nl17S-S132N、1111V-N117S-P239V、1111V-S125A-S132N、 I111V-S125A-P239V、1111V-S132N-P239V、Al14G-N117S-S125A、Al 14G-N117S-S132N、 A114G-N117S-P239V、Al 14G-S125A-S132N、Al14G-S125A-P239V、Al14G-S132N-P239V、 N117S-S125A-S132N、Nl 17S-S125A-P239V、Nl 17S-S132N-P239V、S125A-S132N-P239V、 N76D-D120H-K213N-M222Q，其中所述取代位于SEQ ID NO 1中陳列的BPN，枯草桿菌蛋白酶 位置的等同位置。本發(fā)明還提供包含G97A/G128A/Y217Q取代和另外包含上述取代組中至少一組的 枯草桿菌蛋白酶變體，其中位置對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO 1中的BPN’枯草桿菌蛋白酶的位置。本發(fā)明還提供編碼此處陳列的枯草桿菌蛋白酶變體的分離的核酸，以及包含這些 核酸的表達(dá)載體，和包含這些表達(dá)載體的宿主細(xì)胞。本發(fā)明還提供包含至少一種此處提供的枯草桿菌蛋白酶變體的清潔組合物。在一 些實(shí)施方案中，清潔組合物為衣物洗滌劑。在其他一些實(shí)施方案中，衣物洗滌劑為大容量 (heavy duty)液體衣物洗滌劑。在其他一些實(shí)施方案中，清潔組合物為餐具洗滌劑。在其他 一些實(shí)施方案中，清潔組合物為硬表面清潔組合物。在其他一些實(shí)施方案中，清潔組合物還 包含一種或多種其他酶或酶衍生物，所述酶或酶衍生物選自半纖維素酶、過(guò)氧化物酶、蛋白 酶、纖維素酶、木聚糖酶、脂肪酶、磷脂酶、酯酶、角質(zhì)酶、果膠酶、角蛋白酶、還原酶、氧化酶、 酚氧化酶、脂肪氧化酶、木質(zhì)酶、支鏈淀粉酶、鞣酸酶、戊聚糖酶、麥芽聚糖酶(malanases)、 β-葡聚糖酶、阿拉伯糖苷酶、透明質(zhì)酸酶、軟骨素酶、漆酶和淀粉酶，或其混合物。在一些 實(shí)施方案中，清潔組合物還包含至少一種穩(wěn)定劑。在另一些實(shí)施方案中，清潔組合物包含至 少0. 0001重量百分比的此處提供的至少一種枯草桿菌蛋白酶變體和任選的一種合適的輔 助成分。本發(fā)明還提供用于清潔的方法，包含以下步驟將包含織物的表面和/或物品與 此處提供的清潔組合物接觸；任選的洗滌和/或漂洗所述表面或物品。本發(fā)明還提供包含至少一種此處提供的枯草桿菌蛋白酶變體的動(dòng)物飼料。本發(fā)明 還提供包含至少一種此處提供的枯草桿菌蛋白酶變體的食物加工組合物。發(fā)明詳述本發(fā)明提供枯草桿菌蛋白酶變體和包含至少一種此處陳列的枯草桿菌蛋白酶變 體的組合物，以及使用這些變體和組合物的方法。具體的，本發(fā)明提供適于衣物清潔用途的 蛋白酶變體。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供制備具有多種商業(yè)用途的枯草桿菌蛋白酶變體的 方法，所述用途中期望多肽的降解或合成，包括清潔組合物、飼料組分和紡織品的加工、皮 革整理(finishing)、谷物加工、肉類加工、食物加工、及蛋白質(zhì)水解物、助消化劑、殺微生物 組合物、抑菌組合物、抑真菌組合物和個(gè)人護(hù)理產(chǎn)品(例如，口腔護(hù)理、頭發(fā)護(hù)理和/或皮膚 護(hù)理)的制備。本發(fā)明還提供酶組合物，所述酶組合物與目前使用的枯草桿菌蛋白酶相比具有相 當(dāng)?shù)幕蚋倪M(jìn)的洗滌性能。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含至少一種此處提供的枯草桿 菌蛋白酶變體的清潔組合物。在一些實(shí)施方案中，清潔組合物為衣物洗滌劑。在一些實(shí)施 方案中，衣物洗滌劑為冷水洗滌劑、低PH洗滌劑或濃縮(compact)洗滌劑。在其他實(shí)施方 案中，本發(fā)明提供清潔的方法，包含以下步驟將包含織物的表面和/或物品與包含至少一種枯草桿菌蛋白酶變體的清潔組合物接觸。清潔組合物本發(fā)明的清潔組合物在例如洗衣應(yīng)用中具有優(yōu)勢(shì)。的確，由于在較低溫度溶液中 有效性增加的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，本發(fā)明的酶理想地適用于洗衣應(yīng)用。此外，本發(fā)明的酶可應(yīng)用于顆 粒和液體組合物二者。本發(fā)明的蛋白酶變體還應(yīng)用于衣物清潔添加劑產(chǎn)品。在一些實(shí)施方案中，其應(yīng)用 于低溫溶液清潔用途。添加劑產(chǎn)品最簡(jiǎn)單的形式可為一種或多種蛋白酶。在一些實(shí)施方案 中，添加劑以劑量形式包裝以加入清潔過(guò)程。本發(fā)明可應(yīng)用任意合適的單獨(dú)劑量形式，包括 但不局限于丸劑、片劑、軟膠囊或其他單獨(dú)劑量單位例如預(yù)定量(pre-measured)的粉末或 液體。在一些實(shí)施方案中，也包括填充劑或載體材料以增加這些組合物的體積。合適的填 充劑或載體材料包括但不局限于各種硫酸鹽、碳酸鹽和硅酸鹽以及滑石、粘土等等。用于液 體組合物的合適填充劑或載體材料包括但不局限于水或低分子量伯醇和仲醇(包括多元 醇和二醇)。這些醇的示例包括但不局限于甲醇、乙醇、丙醇和異丙醇。在一些實(shí)施方案中， 組合物包含從約5%至約90%的這些材料。酸性填充劑應(yīng)用于降低pH。可選的，清潔添加 劑包括如下面更充分描述的輔助成分。本清潔組合物和清潔添加劑需要有效量的至少一種此處提供的蛋白酶變體，單獨(dú) 或與其他蛋白酶和/或其他酶組合。通過(guò)加入一種或多種本發(fā)明的蛋白酶變體得到需要的 酶水平。通常本清潔組合物包含至少約0. 0001重量百分比、從約0. 0001至約1、從約0. 001 至約0. 5、或甚至從約0. 01至約0. 1重量百分比的至少一種本發(fā)明的蛋白酶變體。此處的清潔組合物一般配制為當(dāng)在水性清潔操作中使用時(shí)，洗滌水將具有從約 5. 0至約11. 0，或甚至從約7. 5至約10. 5的pH。液體產(chǎn)品制劑一般配制為具有從約3. 0至 約9. 0或甚至從約3至約5的凈pHfceat pH)。顆粒洗衣產(chǎn)品一般配制為具有從約9至約 11的PH。將pH控制在推薦的使用水平上的技術(shù)包括使用緩沖液、堿、酸，等等，這是本領(lǐng)域 技術(shù)人員所熟知的。合適的低pH清潔組合物一般具有從約3至約5的凈pH，一般不含在此pH環(huán)境下 水解的表面活性劑。這些表面活性劑包括含有至少一個(gè)環(huán)氧乙烷基或甚至(含有)從約1 至約16摩爾環(huán)氧乙烷的烷基硫酸鈉表面活性劑。這些清潔組合物一般包含足夠量的pH調(diào) 節(jié)劑，例如氫氧化鈉、單乙醇胺或鹽酸，以提供這些清潔組合物從約3至約5的凈pH。這些 組合物一般包含至少一種耐酸性的酶。在一些實(shí)施方案中，組合物為液體，而在另一些實(shí)施 方案中，它們?yōu)楣腆w。這些液體組合物的PH —般以凈pH測(cè)量。這些固體組合物的pH以所 述組合物的10%固體溶液測(cè)量，其中溶劑為蒸餾水。在這些實(shí)施方案中，所有pH在20°C測(cè) 量。在一些實(shí)施方案中，當(dāng)?shù)鞍酌缸凅w應(yīng)用于顆粒狀組合物或液體時(shí)，期望蛋白酶變 體為封裝的顆粒形式，以在貯藏期間保護(hù)蛋白酶變體免受顆粒狀組合物其他組分的破壞。 此外，封裝也是在清潔過(guò)程中控制蛋白酶變體可用性的方法。在一些實(shí)施方案中，封裝增 強(qiáng)蛋白酶變體和/或其他酶的性能。在這一點(diǎn)上，用本領(lǐng)域已知的任意合適的封裝材料封 裝本發(fā)明的蛋白酶變體。在一些實(shí)施方案中，封裝材料一般封裝本發(fā)明蛋白酶變體的至少 一部分催化劑。一般的，封裝材料為水溶性和/或水分散性的。在一些實(shí)施方案中，封裝材 料具有0°C或更高的玻璃轉(zhuǎn)化溫度(Tg)。玻璃轉(zhuǎn)化溫度在WO 97/11151中更詳細(xì)的描述。封裝材料選自碳水化合物、天然或合成樹(shù)膠、殼多糖、殼聚糖、纖維素和纖維素衍生物、硅酸 鹽、磷酸鹽、硼酸鹽、聚乙烯醇、聚乙二醇、石蠟和其組合。當(dāng)封裝材料為碳水化合物時(shí)，其一 般選自單糖、寡糖、多糖和其組合。一般的，封裝材料為淀粉。合適的淀粉描述于EP 0 922 499 ；US 4,977, 252 ；US 5，354，559，和US 5，935，826。在一些實(shí)施方案中，封裝材料為塑料 制成的微球，所述塑料為例如熱塑性塑料、丙烯腈、甲基丙烯腈、聚丙烯腈、聚甲基丙烯腈和 其混合物；可應(yīng)用的市售微球包括 EXPANCEL, (Stockviksverken, Sweden) JPPM 6545、 PM 6550,PM 7220, PM 7228、EXTENDOSPHERES 、LUXSIL ,⑧、Q-CEL ⑧，和 SPHERICEL φ (PQ Corp.，Valley Forge, PA)所提供的。如此處描述的，本發(fā)明的蛋白酶變體在衣物洗滌劑中特別有用。這些應(yīng)用將酶置 于多種環(huán)境壓力下。本發(fā)明的蛋白酶變體由于其在多種條件下的穩(wěn)定性，與多種目前使用 的酶相比提供了優(yōu)勢(shì)。的確，洗滌中涉及的蛋白酶暴露于多種洗滌條件，包括不同的洗滌劑配方、洗滌用 水體積、洗滌用水溫度和洗滌時(shí)間的長(zhǎng)度。此外，在不同地理區(qū)域使用的洗滌劑配方在洗滌 水中具有不同濃度的相關(guān)組分。例如，歐洲洗滌劑一般在洗滌水中具有約4500-5000ppm的 洗滌劑組分，而日本洗滌劑一般在洗滌水中具有約667ppm的洗滌劑組分。在北美洲，特別 是在美國(guó)，洗滌劑一般在洗滌水中具有約975ppm的洗滌劑組分。低濃度洗滌劑系統(tǒng)包括洗滌劑，其中洗滌水中存在低于約SOOppm的洗滌劑組分。 一般認(rèn)為日本洗滌劑為低濃度洗滌劑系統(tǒng)，因?yàn)槠湓谙礈焖芯哂屑s667ppm的洗滌劑組 分。中等濃度洗滌劑系統(tǒng)包含洗滌劑，其中洗滌水中存在約800ppm至約2000ppm的 洗滌劑組分。一般認(rèn)為北美洗滌劑是中等濃度洗滌劑系統(tǒng)，因?yàn)槠湓谙礈焖幸话憔哂屑s 975ppm的洗滌劑組分。巴西洗滌劑一般在洗滌水中具有約1500ppm的洗滌劑組分。高濃度洗滌劑系統(tǒng)包含洗滌劑，其中洗滌水中具有大于約2000ppm的洗滌劑組 分。一般認(rèn)為歐洲洗滌劑是高濃度洗滌劑系統(tǒng)，因?yàn)槠湓谙礈焖芯哂屑s4500-5000ppm的 洗滌劑組分。拉丁美洲洗滌劑通常是高泡磷酸增潔洗滌劑，拉丁美洲使用的洗滌劑范圍可落入 中洗滌劑濃度和高洗滌劑濃度之間，因?yàn)樗鼈冊(cè)谙礈焖械南礈靹┙M分范圍在1500ppm至 6000ppmo如上所述，巴西洗滌劑通常在洗滌水中含有約1500ppm的洗滌劑組分。然而，其 他高泡磷酸增潔洗滌劑地區(qū)，不限于其他拉丁美洲國(guó)家，具有高濃度洗滌劑系統(tǒng)，在洗滌水 中存在高達(dá)約6000ppm的洗滌劑組分。鑒于上述內(nèi)容，很顯然，典型的洗滌溶液中洗滌劑組合物的濃度在世界范圍內(nèi)變 動(dòng)，從低于約SOOppm的洗滌劑組合物(“低濃度洗滌劑系統(tǒng)”)，例如日本的約667ppm，到在 約800ppm至約2000ppm之間(“中等濃度洗滌劑系統(tǒng)”)，例如美國(guó)的約975ppm和巴西的約 1500ppm,到大于約2000ppm( “高濃度洗滌劑系統(tǒng)”)，例如歐洲的約4500ppm至約5000ppm， 以及高泡磷酸增潔洗滌劑地區(qū)的約6000ppm。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定典型洗滌溶液的濃度。例如，在美國(guó)，典型的洗衣機(jī)容納體積約 64. 4L的洗滌溶液。因此，為了獲得洗滌溶液中約975ppm的洗滌劑濃度，應(yīng)該向64. 4L洗滌 溶液中添加62. 79g的洗滌劑組合物。該量是消費(fèi)者利用洗滌劑提供的量杯量入洗滌水中 的典型量。
在另一實(shí)例中，不同地區(qū)使用不同的洗滌溫度。日本的洗滌水的溫度通常低于歐 洲使用的溫度。例如，北美和日本的洗滌水溫度可以在10至30°C (如，約20°C )，而歐洲洗 滌水溫度一般在30至60°C (如，約40°C )。在另一實(shí)例中，不同地區(qū)通常具有不同的水硬度。水硬度一般通過(guò)每加侖混合的 Ca2+/Mg2+的格令(grain)數(shù)來(lái)描述。硬度是水中鈣和鎂(Mg2+)的量的度量。美 國(guó)的多數(shù)水是硬水，但硬度值不同。中等硬度水(60-120ppm)至硬水(121-181ppm)具有60 至ISlppm的硬度礦物(ppm轉(zhuǎn)換成格令/美制加侖是ppm數(shù)除以17. 1等于格令/加侖)。
權(quán)利要求
1.分離的枯草桿菌蛋白酶變體，包含以下取代組中的至少一組G97A-G128A-Y217Q、 G97A-L126A-G128A、G97A-L126A-G128A-Y217Q, G97A-L126A-Y217Q、G97A-M124V-G128A、 G9 7A-M124V-G128A-Y217Q、 G97A_M124V-L126A、 G97A-M124V-L126A-G128A、 G97A-M124V-L126A-Y217Q、G97A_M124V-Y217Q、G97A-N 123G-G128A、 G9 7A-N12 3G-G128A-Y217Q、G97A-N12 3G-L126A、G97A-N123G-L126A-G128A、 G9 7A-N12 3G-L126A-Y217Q、 G97A_N123G-M124V、 G97A-N123G-M124V-G128A、 G9 7A-N123G-M124V-L126A、 G97A-N123G-M124V-Y217Q、 G97A-N123G-Y217Q、 L126A-G128A-Y217Q、L96T-G128A-Y217Q、L96T-G97A-G128A、L96T-G97A-G128A-Y217Q、 L96T-G97A-L126A、 L96T_G97A-L126A-G128A、 L96T_G97A-L126A-Y217Q、 L96T-G97A-M124V、 L96T_G97A-M124V-G128A、 L96T_G97A-M124V-L126A、 L96T-G97A-M124V-Y217Q、 L96T_G97A-N123G、 L96T_G97A-N123G_G128A、 L96T-G97A-N123G-L126A、 L96T-G97A-N123G-M124V、 L96T-G97A-N123G-Y217Q、 L96T-G97A-Y2 17Q、L96T-L126A-G128A、L96T-L126A-G128A-Y2 17Q、 L96T-L126A-Y217Q、 L96T-M124V-G128A、 L96T-M124V-G128A-Y217Q、 L96T-M124V-L126A、 L96T-M124V-L126A-G128A、 L96T-M124V-L126A-Y217Q、 L96T-M124V-Y217Q、L96T-N 123G-G128A、L96T-N 123G-G128A-Y217Q、 L96T-N12 3G-L126A、 L96T-N123G_L126A-G128A、 L96T-N12 3G-L126A-Y217Q、 L96T-N123G-M124V、 L96T-N123G_M124V-G128A、 L96T-N123G_M124V-L126A、 L96T-N123G-M124V-Y217Q、L96T-N 123G-Y217Q、M124V-G128A-Y2 1 7Q、 M124V-L126A-G128A、M124V-L126A-G128A-Y217Q、M124V-L126A-Y217Q、 N123G-G128A-Y217Q、N123G_L126A-G128A、N1 23G_L126A-G128A-Y217Q、 N123G-L126A-Y217Q、N123G_M124V-G128A、N1 23G_M124V-G128A-Y217Q、 N123G-M124V-L126A、 N123G-M124V-L126A-G128A、 N123G-M124V-L126A-Y217Q、 N123G-M124V-Y217Q、N62Q-G128A-Y217Q、N62Q-G97A-G128A、N62Q-G97A-G128A-Y217Q、 N62Q-G97A-L126A、 N62Q-G97A-L126A-G128A、 N62Q-G97A-L126A-Y217Q、 N62Q-G97A-M124V、N62Q-G97A-M124V-G128A、N62Q-G97A-M124V-L126A、 N62Q-G97A-M124V-Y217Q、 N62Q-G97A-N123G、 N62Q-G97A-N123G_G128A、 N62Q-G97A-N123G-L126A、 N62Q-G97A-N123G-M124V、 N62Q-G97A-N123G-Y217Q、 N62Q-G97A-Y217Q、N62Q-L126A-G128A、N62Q-L126A-G128A-Y217Q、N62Q-L126A-Y217Q、 N62Q-L96T-G128A、N62Q-L96T-G128A-Y217Q、N62Q-L96T-G97A、N62Q-L96T-G97A-G128A、 N62Q-L96T-G9 7A-L126A、 N62Q-L96T-G9 7A-M124V、 N62Q-L96T-G9 7A-N12 3G、 N62Q-L96T-G97A-Y217Q、N62Q-L96T-L126A、N6 2Q-L96T-L126A-G128A、 N62Q-L96T-L126A-Y217Q、 N62Q-L96T-M124V、 N62Q-L96T-M124V-G128A、 N62Q-L96T-M124V-L126A、 N62Q-L96T-M124V-Y217Q、 N62Q-L96T-N123G、 N62Q-L96T-N123G-G128A、 N62Q-L96T-N123G-L126A、 N62Q-L96T-N123G-M124V、 N62Q-L96T-N123G-Y217Q、N62Q-L96T-Y 217Q、N62Q-M124V-G128A、 N62Q-M124V-G128A-Y217Q、 N62Q-M124V-L126A、 N62Q-M124V-L126A-G128A、 N62Q-M124V-L126A-Y217Q、N62Q-M124V-Y217Q、N62Q-N123G-G128A、 N6 2Q-N123G-G128A-Y217Q、N62Q-N123G-L126A、N62Q-N123G-L126A-G128A、N6 2Q-N123G-L126A-Y217Q、 N62Q-N123G-M124V、 N62Q-N123G-M124V-G128A、 N62Q-N123G-M124V-L126A、N62Q-N123G-M124V-Y217Q、和 N62Q-N123G-Y217Q，其中所述取代 位于SEQ ID NO 1中陳列的BPN，枯草桿菌蛋白酶位置的等同位置。
2.分離的枯草桿菌蛋白酶變體，包含以下取代組中的至少一組G97N-G128A-Y217M、 G97G-G128S-Y217E、G97A-G128A-Y217Q、G97M-G128S-Y217E、G97A-G128S-Y217Q、 G97D-G128S-Y217Q、G97M-G128G-Y217M、G97G-G128S-Y217Q、G97S-G128S-Y217Q、 G97G-G128A-Y217Q、G97S-G128A-Y217E、G97A-G128S-Y217L、G97A-G128A-Y217N、 G97Q-G128S-Y217L、G97A-G128A-Y217M、G97A-G128A-Y217S、G97D-G128A-Y217Q、 G97M-G128S-Y217Q、G97Q-G128G-Y217D-S87Y、G97S-G128A-Y217N、G97A-G128S-Y217T、 G9 7D-G128S-Y217E、 G97D_G128A-Y217L、 G97G_G128S_Y217E-S78P-A272T、 G97T-G128S-Y217D、G97D-G128A-Y217I、G97Q-G128S-Y217Q、G97G-G128A-Y217D、 G97Q-G128A-Y217N、G97S-G128A-Y217M、G97S-G128S-Y217N、G97S-G128S-Y217M、 G97E-G128S-Y217M、G97S-G128P-Y217Q、G97T-G128S-Y217Q、G97D-G128S-Y217Q-A73T、 G97E-G128S-Y217N、G97G-G128A-Y217I、G97Q-G128A-Y217D、G97Q-G128S-Y217M、 G97R-G128T-Y217Q-S162P、G97S-G128S-Y217D、G97T-G128P-Y217I、G97Q-G128G-Y217E、 G97C-G128G-Y217N、G97D-G128S-Y217H、G97M-G128S-Y217L、G97M-G128S-Y217N、 G97S-G128S-Y217E、G97M-G128S-Y217I、G97A-G128P-Y217A、G97R-G128S-Y217D、 G97D-G128A-Y217D、G97V-G128G-Y217D、G97V-G128G-Y217E、G97A-G128G-Y217T、 G97G-G128N-Y217L、G97D-G128A-Y217T、G97M-G128A-Y217E、和 G97M-G128A-Y217N，其中所 述取代位于SEQ ID NO 1中陳列的BPN，枯草桿菌蛋白酶位置的等同位置。
3.分離的枯草桿菌蛋白酶變體，包含以下取代組中的至少一組SMR-S87D-Q206E、 P40E-A144K-K213L、N61E-P129E-S159K、S87D-S162K-K265N、S87D-T242R-Q275E、 N61E-Q103E-N240K、 S87D-T242R-K265N、 N62R-K265N-Q275E、 P129E-S145D-N240K、 P129E-P2 39R-K265N、 Q103E-P129E-T242R、 P40E-N61E-S87D-S16 2K-T242R、S24R--N62R--S87D-S 1 45D--K265N、S24R--P40E-S145D--S159K--K213L、N6 IE--P129E-S162K-K2 1 3L-N240K、S87D--A144K-S145D-S159K-Q275E、N6 IE--Q103E-A144K-K213L.-T242R、S24R-Q103E-P129E-N240K--K265N、P40E-N62R--S8 7D-Q10 3E--S 1 6 2K、S24R--S87D-A144K--K265N--Q275E、N6 IE--S145D-S 162K-K213L-T242R、S24R--P129E-Q206E-N240K-K265N、N62R--S159K-Q206E-K265N.-Q275E、N6 IE-Q103E-P129E-P239R--N240K、P129E-S145D-N240K-T242R-K265N、Q103E-S162K-Q206E-K213L-P239R、P40E-N61E-N62R-S8 7D-S159K-S162K-K265N、S24R-P40E-N61E-A144K-Q206E-K213L-T242R、P40E-N61E-S87D-P1 29E-S159K-S162K-T242R,P40E-N62R-S87D-S145D-S159K-S162K-Q275E,P40E-N62R-S87D-Q 103E-A144K-S159K-Q275E、P40E-N62R-S87D-S159K-S162K-K265N-Q275E、P40E-N61E-P129E -A144K-S162K-K213L-N240K,P40E-N61E-Q103E-A144K-S159K-S162K-Q275E,P40E-N61E-Q1 03E-S159K-S162K-K213L-P239R、P40E-N61E-Q103E-S159K-S162K-K213L-N240K、N62R-S87D -P129E-S145D-S159K-S162K-Q275E、S24R-N61E-Q103E-P129E-K213L-N240K-T242R、P40E-N 62R-S145D-S159K-S162K-Q206E-Q275E、N62R-S87D-S145D-S159K-S162K-K265N-Q275E、N61 E-S87D-Q103E-S159K-S162K-K213L-T242R、S24R-N61E-Q103E-P129E-Q206E-P239R-N240K、S24R-N62R-P129E-S145D-P239R-K265N-Q275E、S24R-N62R-P129E-Q206E-N240K-K265N-Q27 5E、P40E-S145D-S159K-S162K-K213L-P239R-Q275E、N61E-Q103E-A144K-Q206E-K213L-N240 K-T242R,S24R-Q103E-P129E-S145D-P239R-N240K-K265N.N61E-Q103E-P129E-K213L-P239R -N240K-T242R、N61E-Q103E-Q206E-K213L-P239R-N240K-T242R、S24R-P40E-N61E-S87D-Q1 03E-S159K-S162K-K213L-N240K, N61E-N62R-S87D-Q103E-S159K-S162K-K213L-T242R-Q275 E、P40E-N62R-S87D-S145D-S159K-S162K-N240K-K265N-Q275E、N62R-S87D-S145D-S159K-S1 62K-K213L-N240K-K265N-Q275E、S24R-N61E-Q103E-P129E-Q206E-K213L-P239R-N240K-T24 2R,S24R-N61E-Q103E-P129E-S145D-P239R-N240K-T242R-K265N.N61E-S87D-Q103E-P129E-S159K-S162K-K213L-N240K-T242R、P40E-N61E-Q103E-P129E-A144K-K213L-P239R-N240K-T 242R、S24R-Q103E-P129E-S145D-Q206E-P239R-N240K-T242R-K265N、N61E-Q103E-P129E-A1 44K-Q206E-K213L-P239R-N240K-T242R、S24R-P40E-N61E-S87D-Q103E-P129E-A144K-K213L -P239R-N240K-T242R、S24R-P40E-N61E-Q103E-P129E-A144K-K213L-P239R-N240K-T242R-K 265N、S24R-P40E-N61E-Q103E-P129E-A144K-Q206E-K213L-P239R-N240K-T242R、S24R-P40E -N61E-Q103E-P129E-A144K-S145D-K213L-P239R-N240K-T242R, S24R-N61E-S87D-Q103E-P1 29E-A144K-Q206E-K213L-P239R-N240K-T242R、P40E-N61E-S87D-Q103E-S145D-S159K-S162 K-K213L-P239R-N240K-T242R、S24R-P40E-N61E-Q103E-P129E-S162K-Q206E-K213L-P239R-N240K-T242R、S24R-N61E-Q103E-P129E-A144K-S145D-Q206E-K213L-P239R-N240K-T242R、P 40E-N61E-Q103E-P129E-A144K-S162K-Q206E-K213L-P239R-N240K-T242R、S24R-N61E-Q103 E-P129E-A144K-Q206E-K213L-P239R-N240K-T242R-K265N、和 S24R-P40E-N61E-S87D-Q103E -PU9E-A144K-S162K-Q206E-K213L-P239R-N240K-T242R，其中所述取代位于 SEQ ID NO :1 中陳列的BPN’枯草桿菌蛋白酶位置的等同位置。
4.包含G97A/G128A/Y217Q取代和還包含權(quán)利要求3的至少一種修飾的枯草桿菌蛋白 酶變體，其中位置對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO 1的BPN，枯草桿菌蛋白酶的位置。
5.分離的枯草桿菌蛋白酶變體，包含以下取代組中的至少一組S53G-F58G、 S53G-S78N、S53G-Y104N、S53G-I111V、S53G-A114G、S53G-N117S、S53G-S125A、S53G-S132N、 S53G-P239V、F58G-S78N、F58G-Y104N、F58G-111IV、F58G-A114G、F58G-N117S、F58G-S125A、 F58G-S132N、F58G-P239V、S78N-Y104N、S78N-111IV、S78N-A114G、S78N-N117S、S78N-S125A、 S78N-S132N、S78N-P239V、Y104N-I111V、Y104N-A114G、Y104N-N117S、Y104N-S125A、 Y104N-S132N、 Y104N-P239V、 I111V-A114G、 I111V-N117S、 I111V-S125A、 I111V-S132N、 I111V-P239V、A114G-N117S、A114G-S125A、A114G-S132N、A114G-P239V、N117S-S125A、 N117S-S132N、N117S-P239V、S125A-S132N、S125A-P239V、S132N-P239V、S53G-F58G-S78N、S53G--F58G- 104Ν、S53G--F58G-I111V、S53G--F58G--A114G、S53G--F58G-N117S、S53G--F58G-S125A、S53G--F58G-S132N、S53G--F58G--P239V、S53G--S78N-Y104N、S53G--S78N-I111V、S53G--S78N-A114G、S53G--S78N-N117S、S53G--S78N-S125A、S53G--S78N-S132N、S53G-S78N-P239V、 S53G-Y104N-I111V、S53G-Y104N--A114G、S53G--Y104N--N117S、S53G--Y104N--S125A、S53G--Y104N--S132N、S53G--Y104N--P239V、S53G--IlllV--A114G、S53G--IlllV--N117S、S53G--IlllV--S125A、S53G--IlllV--S132N、S53G--IlllV-P239V、S53G--A114G--N117S、S53G--A114G-S125A、S53G--A114G--S132N、S53G--A114G-P239V、S53G--N117S-S125A、S53G--N117S-S132N、S53G--N117S-P239V、、 S53G-S125A-P239V、 S53G-S132N-P239V、 F58G-S78N-Y104N、 F58G-S78N-I111V、F58G-S78N-A114G、F58G-S78N-N117S、F58G-S78N-S125A、 F58G-S78N-S132N、 F58G-S78N-P239V、 F58G-Y104N-I11IV、 F58G-Y104N-A114G、F58G-Υ104Ν--N117S、F58G-IlllV--A114G、F58G-IlllV--P239V、F58G-A114G--P239V、F58G-S125A--S132N、S78N-Υ104Ν--A114G、S78N- 104Ν--P239V、S78N--IlllV--S132N、S78N--A114G--S132N、S78N-N117S--P239V、Υ104Ν-IlllV--A114G、Υ104Ν-IlllV--P239V、Υ104Ν-A114G--P239V、Υ104Ν-S125A--S132N、IlllV-A114G--S125A、IlllV--N117S--S132N、IlllV--S132N--P239V、A114G--S125A--S132N、F58G-Υ104Ν--S125A、F58G-IlllV--N117S、F58G-A114G--N117S、F58G-N117S--S125A、F58G-S125A--P239V、S78N- 104Ν--N117S、S78N-IlllV--A114G、S78N--IlllV--P239V、S78N--A114G--P239V、S78N-S125A--S132N、Υ104Ν-IlllV--N117S、Υ104Ν-A114G--N117S、Υ104Ν-N117S--S125A、Υ104Ν-S125A--P239V、IlllV--A114G--S132N、IlllV--N117S--P239V、A114G--N117S--S125A、A114G--S125A--P239V、F58G-Υ104Ν--S132N、F58G-IlllV--S125A、F58G-A114G--S125A、F58G-N117S--S132N、F58G-S132N--P239V、S78N- 104Ν--S125A、S78N--IlllV--N117S、S78N--A114G--N117S、S78N--Nl 17 S--S125A、S78N-S125A--P239V、Υ104Ν-IlllV--S125A、Υ104Ν-A114G--S125A、Υ104Ν-N117S--S132N、Υ104Ν-S132N--P239V、IlllV--A114G--P239V、IlllV--S125A--S132N、A114G--N117S--S132N、A114G--S132N--P239V、F58G-Υ104Ν--P239V、F58G-HllV--S132N、F58G-A114G--S132N、F58G-N117S--P239V、S78N- 104Ν--I111V、S78N- 104Ν--S132N、S78N--IlllV--S125A、S78N--A114G--S125A、S78N-N117S--S132N、S78N-S132N--P239V、Υ104Ν-IlllV--S132N、Υ104Ν-A114G--S132N、Υ104Ν-N117S--P239V、IlllV-A114G--N117S、IlllV--N117S--S125A、IlllV--S125A--P239V、A114G--N117S--P239V、N117S--S125A--S132N、N117S-S125A-P239V,N117S-S132N-P239V,S125A-S132N-P239V,N76D-D120H-K213N-M222Q, 其中所述取代位于SEQ ID NO 1中陳列的BPN’枯草桿菌蛋白酶位置的等同位置。
6.包含G97A/G128A/Y217Q取代和還包含權(quán)利要求5的至少一種修飾的枯草桿菌蛋白 酶變體，其中位置對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO 1的BPN，枯草桿菌蛋白酶的位置。
7.分離的核酸，其編碼權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)陳列的枯草桿菌蛋白酶變體。
8.表達(dá)載體，其包含權(quán)利要求7的所述核酸。
9.宿主細(xì)胞，其包含權(quán)利要求8的表達(dá)載體。
10.清潔組合物，其包含權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)陳列的至少一種枯草桿菌蛋白酶變體。
11.權(quán)利要求10的清潔組合物，其中所述清潔組合物為衣物洗滌劑。
12.權(quán)利要求11的衣物洗滌劑，其中所述衣物洗滌劑為大容量液體衣物洗滌劑。
13.權(quán)利要求10的清潔組合物，其中所述清潔組合物為餐具洗滌劑。
14.權(quán)利要求10-13中任一項(xiàng)的清潔組合物，還包含一種或多種其他酶或酶衍生物，所 述酶或酶衍生物選自半纖維素酶、過(guò)氧化物酶、蛋白酶、纖維素酶、木聚糖酶、脂肪酶、磷脂 酶、酯酶、角質(zhì)酶、果膠酶、角蛋白酶、還原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂氧合酶、木質(zhì)酶、支鏈淀 粉酶、鞣酸酶、戊聚糖酶、麥芽聚糖酶(malanases)、β -葡聚糖酶、阿拉伯糖苷酶、透明質(zhì)酸 酶、軟骨素酶、漆酶和淀粉酶，或其混合物。
15.權(quán)利要求10的清潔組合物，還包含至少一種穩(wěn)定劑。
16.清潔組合物，包含至少0.0001重量百分比的權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的至少一種枯草桿菌蛋白酶變體，和任選的至少一種合適的輔助成分。
17.清潔的方法，包含以下步驟a)將包含織物的表面和/或物品與權(quán)利要求10-16中任一項(xiàng)的清潔組合物接觸；和b)任選的洗滌和/或漂洗所述表面或物品。
18.動(dòng)物飼料，包含權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的至少一種枯草桿菌蛋白酶變體。
19.食物加工組合物，包含權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的至少一種枯草桿菌蛋白酶變體。
全文摘要
本發(fā)明提供枯草桿菌蛋白酶變體和包含至少一種此處陳列的枯草桿菌蛋白酶變體的組合物，以及使用這些變體和組合物的方法。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供適于衣物清潔用途的枯草桿菌蛋白酶變體。
文檔編號(hào)A23K1/165GK102057043SQ200980120922
公開(kāi)日2011年5月11日 申請(qǐng)日期2009年6月3日 優(yōu)先權(quán)日2008年6月6日
發(fā)明者D·A·伊斯泰爾, J·R·巴斯勒, J·T·凱利斯, L·G·卡斯康-佩雷拉 申請(qǐng)人:丹尼斯科美國(guó)公司