專利名稱：一種基于轉(zhuǎn)基因技術(shù)的阿爾茨海默病病理模型的建立方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基于轉(zhuǎn)基因技術(shù)的阿爾茨海默病病理模 型的建立方法。
背景技術(shù)：
阿爾茨海默病(Alzheimer disease,AD)是一種進(jìn)行性發(fā)展的神經(jīng)退行性疾病，病 因未明，又稱為老年癡呆。隨著世界人口老齡化的加劇，AD患病率逐年上升，AD病人的治 療費(fèi)用驚人，給社會造成極大負(fù)擔(dān)。AD患者大腦皮質(zhì)、海馬神經(jīng)元存在大量的神經(jīng)纖維纏 結(jié)(neurofibrillary tangles, NFT)是AD的重要組織病理標(biāo)志之一。NFT是高度磷酸化 的tau蛋白聚積形成的。到目前為止，AD的發(fā)病機(jī)制，以及AD的典型病理標(biāo)志一一 NFT現(xiàn) 象發(fā)生的機(jī)制尚未得到闡明，給AD的預(yù)防和治療造成極大困難。目前阿爾茨海默病動物模型多采用施加外傷和藥物誘導(dǎo)的方法，在實(shí)驗(yàn)過程中難 免會受到創(chuàng)傷、藥物等造成的多種干擾因素，導(dǎo)致結(jié)果難以分析。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明主要是解決現(xiàn)有技術(shù)所存在的創(chuàng)傷、藥物等造成的多種干擾因素，導(dǎo)致結(jié) 果難以分析等的技術(shù)問題；提供了采用轉(zhuǎn)基因技術(shù)建立的疾病模型具有遺傳背景清楚、遺 傳物質(zhì)改變簡單、更自然更接近疾病的真實(shí)癥狀的一種基于轉(zhuǎn)基因技術(shù)的阿爾茨海默病病 理模型的建立方法。本發(fā)明的上述技術(shù)問題主要是通過下述技術(shù)方案得以解決的一種基于轉(zhuǎn)基因技術(shù)的阿爾茨海默病病理模型的建立方法，其特征在于，包括以 下步驟步驟1，構(gòu)建一線性轉(zhuǎn)基因序列，該序列從5’至3’依次含有CMV增強(qiáng)子，Hchicken β -actin 啟動子，HO-IcDNA 編碼序列，終止信號 rabbit β -globin poly (A) sequence,步驟2，應(yīng)用顯微注射方法將構(gòu)建的基因序列注入C57BL/6/DB(BDFl)小鼠受精 卵；步驟3，將步驟2中的受精卵植入假孕鼠的輸卵管；步驟4，產(chǎn)生FO代轉(zhuǎn)基因小鼠，該小鼠基因組中整合有外源性HO-I表達(dá)序列；步驟5，將獲得的陽性轉(zhuǎn)基因小鼠與正常小鼠雜交，獲得子代。在上述的一種基于轉(zhuǎn)基因技術(shù)的阿爾茨海默病病理模型的建立方法，其特征在 于，所述的HO-I為heme oxygenase 1，血紅素加氧酶1。因此，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)具有遺傳背景清楚、遺傳物質(zhì)改變簡單、更自然更接 近疾病的真實(shí)癥狀。


附圖1是線性轉(zhuǎn)基因序列，該序列從5’至3’依次含有增強(qiáng)子，啟動子，HO-I (hemeoxygenase 1，血紅素加氧酶1)內(nèi)含子，ΗΟ-lcDNA編碼序列，終止序列；附圖2是對轉(zhuǎn)基因小鼠和野生型小鼠的HO-I的mRNA水平進(jìn)行比較，轉(zhuǎn)基因小鼠 的HO-I表達(dá)水平明顯高于野生型小鼠；附圖3是對轉(zhuǎn)基因小鼠和野生型小鼠的HO-I的蛋白水平進(jìn)行比較，轉(zhuǎn)基因小鼠的 HO-I表達(dá)水平明顯高于野生型小鼠；附圖4是對轉(zhuǎn)基因小鼠和野生型小鼠腦的海馬和皮質(zhì)組織進(jìn)行tau蛋白的免疫組 織化學(xué)染色，轉(zhuǎn)基因小鼠腦海馬和皮質(zhì)組織中的tau蛋白表達(dá)水平明顯高于野生型小鼠；附圖5是對轉(zhuǎn)基因小鼠和野生型小鼠腦的海馬和皮質(zhì)組織中的tau蛋白進(jìn)行 western bloting檢驗(yàn)，轉(zhuǎn)基因小鼠腦海馬和皮質(zhì)組織中的tau蛋白表達(dá)水平明顯高于野 生型小鼠附圖6是對轉(zhuǎn)基因小鼠和野生型小鼠腦的海馬和皮質(zhì)組織中(199/202)位點(diǎn) 發(fā)生磷酸化的tau蛋白進(jìn)行western bloting檢驗(yàn)，轉(zhuǎn)基因小鼠腦海馬和皮質(zhì)組織中的 (199/202)位點(diǎn)發(fā)生磷酸化的tau蛋白表達(dá)水平明顯高于野生型小鼠。
具體實(shí)施例方式下面通過實(shí)施例，并結(jié)合附圖，對本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步具體的說明。實(shí)施例1.線性轉(zhuǎn)基因序列，該序列從5’至3’依次含有CMV增強(qiáng)子，chicken β -actin啟 動子，HO-I (heme oxygenase 1，血紅素加氧酶1) cDNA編碼序列，終止信號rabbit β -globin poly (A) sequence,如圖 1 所示；2.顯微注射方法將構(gòu)建的基因序列注入小鼠受精卵；3.將步驟2中的受精卵植入假孕鼠的輸卵管；4.產(chǎn)生FO代轉(zhuǎn)基因小鼠，該小鼠基因組中整合有外源性H0-1表達(dá)序列；5.對步驟4獲得的轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行鑒定；6.將獲得的陽性轉(zhuǎn)基因小鼠與正常小鼠雜交，獲得子代；7.對轉(zhuǎn)基因小鼠和正常小鼠的H0-1的mRNA水平、蛋白水平以及酶活性進(jìn)行比 較；8.對H0-1過表達(dá)轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行分析。本發(fā)明利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)建立了一種能夠在小鼠腦組織的海馬、皮質(zhì)神經(jīng)元自發(fā)產(chǎn) 生tau病理的轉(zhuǎn)基因動物模型。該轉(zhuǎn)基因小鼠在皮質(zhì)和海馬神經(jīng)元中出現(xiàn)了 tau蛋白聚積 的現(xiàn)象，皮質(zhì)和海馬組織中不可溶性tau蛋白增多，并且在發(fā)生聚積的不可溶性蛋白組織 中tau蛋白的磷酸化水平明顯升高，如圖4-圖6所示。這些都符合AD的tau病理標(biāo)志的 特征，本發(fā)明中的轉(zhuǎn)基因動物模型利用H0-1過表達(dá)，造成了 AD的典型tau病理模型，這是 本模型的創(chuàng)新之處。本文中所描述的具體實(shí)施例僅僅是對本發(fā)明精神作舉例說明。本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng) 域的技術(shù)人員可以對所描述的具體實(shí)施例做各種各樣的修改或補(bǔ)充或采用類似的方式替 代，但并不會偏離本發(fā)明的精神或者超越所附權(quán)利要求書所定義的范圍。
權(quán)利要求
一種基于轉(zhuǎn)基因技術(shù)的阿爾茨海默病病理模型的建立方法，其特征在于，包括以下步驟步驟1，構(gòu)建一線性轉(zhuǎn)基因序列，該序列從5’至3’依次含有CMV增強(qiáng)子，chicken β actin啟動子，HO 1cDNA編碼序列，終止信號rabbitβ globin poly(A)sequence；步驟2，應(yīng)用顯微注射方法將構(gòu)建的基因序列注入C57BL/6/DBA2(BDF1)小鼠受精卵；步驟3，將步驟2中的受精卵植入假孕鼠的輸卵管；步驟4，產(chǎn)生F0代轉(zhuǎn)基因小鼠，該小鼠基因組中整合有外源性HO 1表達(dá)序列；步驟5，將獲得的陽性轉(zhuǎn)基因小鼠與正常小鼠雜交，獲得子代。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于轉(zhuǎn)基因技術(shù)的阿爾茨海默病病理模型的建立方法， 其特征在于，所述的HO-I為heme oxygenase 1，血紅素加氧酶1。
全文摘要
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基于轉(zhuǎn)基因技術(shù)的阿爾茨海默病病理模型的建立方法。本發(fā)明采用轉(zhuǎn)基因技術(shù)通過在小鼠體內(nèi)全身性過表達(dá)HO-1(heme oxygenase 1，血紅素加氧酶1)基因，建立了一種阿爾茨海默病的病理模型。該轉(zhuǎn)基因小鼠自發(fā)形成了阿爾茨海默病的tau病理，是研究阿爾茨海默病典型病理標(biāo)志神經(jīng)纖維纏結(jié)的發(fā)生機(jī)制的理想動物模型。
文檔編號A01K67/027GK101921796SQ201010257218
公開日2010年12月22日 申請日期2010年8月19日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月19日
發(fā)明者呂桂香, 周凌云, 彭亞會, 惠洋, 王璐晶, 鄒朝霞, 馬寧, 高旭, 黃卉 申請人:哈爾濱醫(yī)科大學(xué)