專利名稱:一種金針菇多孢自交平板出菇育種方法
技術領域:
本發(fā)明屬于食用菌育種領域,具體的說涉及一種在平板培養(yǎng)基上用多孢自交的育種方法選育金針菇菌種的過程。
背景技術:
金針菇是我國工廠化生產(chǎn)發(fā)展最快的食用菌種類。金針菇新品種的選育應用最頻繁的就是雜交配對的育種方法。此種方法的缺點在于,對于親本的選擇具有局限性,即表現(xiàn)出目的性狀的親本其自身攜帶的基因多為雜合基因,或帶有隱性有害基因,造成目的性狀遺傳不穩(wěn)定,大大降低育種品質(zhì)和育種效率。后來又出現(xiàn)多孢自交的育種方法。金針菇自交后代中會表現(xiàn)出親本所沒有的優(yōu)良性狀,即若干性狀出現(xiàn)超親現(xiàn)象。并且在遺傳與育種中有以下重要作用1.雜合基因分離、 純化;2.淘汰有害隱性基因,改良遺傳組成;3.穩(wěn)定遺傳性狀。多孢自交目前的做法存在一定的不足,有改進的空間。目前的方法是在平板培養(yǎng)基上涂上金針菇孢子進行菌絲培養(yǎng),待菌絲混合生長后隨機挑取菌塊,純化培養(yǎng),通過顯微鏡鏡檢鎖狀聯(lián)合確定雙核菌株。這種方法的缺點是隨機挑取的菌塊的菌株特性存在不確定性,一方面,雙核菌株比例偏低,增大鏡檢的工作量;另一方面,對出菇后的子實體性狀沒有大致了解,不能提前根據(jù)育種目標對多孢自交菌株進行初步篩選,只能待栽培出菇后進行篩選,降低了選育效率。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術問題在于提供一種金針菇多孢自交平板出菇育種方法,應用于金針菇工廠化栽培優(yōu)秀新菌種的選育中。本發(fā)明的金針菇多孢自交平板出菇育種方法,包括以下步驟
(1)孢子收集收集親本菌株的子實體單孢子;
(2)單孢子混合自交將親本的孢子涂在平板培養(yǎng)基上,進行多孢自交;
(3)平板出菇待菌絲扭結、生成原基、發(fā)育成子實體;
(4)自交雙核群體選取根據(jù)發(fā)育成的子實體特性,挑取菌塊,純化培養(yǎng),獲得自交菌
種;
(5)栽培和篩選自交菌種進行栽培,篩選性狀優(yōu)良的菌株,得到新菌種。具體方法步驟為
(1)孢子收集收集不同菌株的子實體單孢子。分別取不同親本菌株發(fā)育完全的金針菇鮮子實體,于無菌環(huán)境下剪去菌柄,將有菌褶一面平貼在平皿上,過夜,收集孢子印。(2)擔孢子混合自交將親本的孢子涂在平板PDA培養(yǎng)基上,進行多孢自交。23 °C 下黑暗中倒置培養(yǎng)5 10 d,肉眼可見大片密集菌落。(3)平板出菇8 12 °C下黑暗中,繼續(xù)倒置培養(yǎng)。待菌絲扭結、生成原基、發(fā)育成子實體,肉眼可見子實體的基本性狀。(4)自交雙核群體選取根據(jù)育種標準,及發(fā)育成的子實體特性,挑取菌塊,挑入平板培養(yǎng)基。在23 °C下黑暗中純化培養(yǎng);Γ5 d。在菌落外緣挑小菌絲塊壓水玻片于顯微鏡下(放大400倍)觀察菌絲有無鎖狀聯(lián)合,菌絲有鎖狀聯(lián)合的為所需雙核體,即獲得的多孢自交菌株。在4°C條件下保存?zhèn)溆谩?4)栽培和篩選自交菌種進行栽培,篩選性狀優(yōu)良的菌株,即為新菌種。工廠化條件下進行栽培。測量日均生長速度,觀察生長勢。子實體成熟時采收,并拍照。記錄子實體單瓶產(chǎn)量、顏色、菌柄長度、直徑、菌蓋直徑及出菇期、栽培周期等數(shù)據(jù)。按照性狀篩選優(yōu)良菌株。篩選標準為菇體白色,單瓶產(chǎn)量高(大于180g),栽培期短(小于45d),菇形整齊、美觀(菌蓋直徑廣2. 5cm,菌柄長度大于13cm,菌柄直徑廣3cm。)
使用多孢自交平板出菇法,即待平板培養(yǎng)基上出菇后,選擇性挑取出菇菌塊,然后進行純化、鏡檢和栽培,就能先一步對出菇栽培種的性狀進行選擇,也能提高雙核菌株比例。實驗證明,多孢自交平板出菇的育種方法是確實可行的,使用此法在選育過程中,將大大提高工作效率,選育質(zhì)量也多一層保證。并且,選育出的金針菇菌種具有生長速度快、產(chǎn)量高、外型美觀、遺傳穩(wěn)定、抗逆性強等特點。
具體實施例方式
一.培養(yǎng)基與培養(yǎng)料的制備
培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基。配方去皮馬鈴薯200 g煮汁,葡萄糖20 g,瓊脂20 g,蒸餾水 1000 mL,pH 7。置于15X150謹小試管中,管口用硅膠塞塞住。培養(yǎng)料分原種和栽培種培養(yǎng)料。原種培養(yǎng)料配方木屑80%,麩皮20%,含水量50%, 初始pH 6.5。栽培種培養(yǎng)料配方木屑30%,玉米芯20%,棉籽殼20%,麩皮15%,米糠 15%,含水量61% 62%。初始pH6. 5。木屑一般使用闊葉樹木屑,其它原料必須保持新鮮、 干燥,無蟲蛀和霉變現(xiàn)象,顆粒度符合設備和工藝要求。原料保存過程中應通風換氣,保持儲藏環(huán)境干燥。原料混合時,按配方要求準確定量,使物料充分攪拌均勻,加水至含水量達到61% 62%。根據(jù)季節(jié)變化調(diào)整攪拌時間,防止混合料酸敗。使用1100 mL耐高溫塑料瓶,要求裝料緊實度均勻,中間打孔至瓶底,裝瓶后應立即蓋上瓶蓋。二. 滅菌及冷卻
PDA培養(yǎng)基采用高壓滅菌,滅菌溫度為121°C,保持30分鐘。培養(yǎng)料在裝瓶結束后立即進行滅菌處理,一般采用高壓滅菌。滅菌時間為料的中心溫度必須達到121°C,并保持120分鐘,必須徹底殺滅培養(yǎng)料中的所有微生物。滅菌后瓶框推入冷卻室進行強制冷卻,冷卻室安裝凈化裝置和制冷設備。冷卻至瓶內(nèi)溫度25°C以下,方可接種。三.接種及培養(yǎng)
接種操作人員必須符合無菌操作的要求,接種量要求蓋滿培養(yǎng)料表面至瓶口,這樣能使菌絲生長均勻,并能有效防止雜菌污染。工廠化栽培使用自動接種機接種,接種量為3%
(ν / ν) ο然后置于培養(yǎng)室發(fā)菌。培養(yǎng)室溫度控制在20°C 22°C,濕度維持在60% 70%, CO2濃度控制在2500ppm以下,直到菌絲發(fā)透培養(yǎng)料。待菌絲發(fā)透培養(yǎng)料后,采用專用搔菌刀頭進行搔菌處理,去掉表面接種塊并使出菇表面平整,向瓶中注滿水。催蕾控制溫度為13°C 15°C,濕度為90% 95%,CO2濃度為2500ppm以下,散射光,直到形成魚籽般的菇蕾??吹阶訉嶓w雛形并長出瓶口 1厘米左右即可套袋。出菇溫度控制為4°C 8°C,濕度為 90%以上,CO2濃度為3000 :3500ppm,散射光。實施例一
親本菌株F3為中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心上海食用菌分中心保藏。(保藏號為 4150。)
將發(fā)育完全的F3金針菇鮮子實體采集,收集孢子,平板PDA培養(yǎng)基上進行多孢自交。發(fā)菌培養(yǎng)后,待菌絲扭結、生成原基、發(fā)育成子實體,觀察平板上的子實體特性。根據(jù)選育白色金針菇的育種目標,選擇子實體,挑取菌塊,純化培養(yǎng)。鏡檢鎖狀聯(lián)合,獲得雙核自交菌種。 隨后將F3的多孢自交后代進行工廠化栽培。然后進行性狀測定,挑選出在生長速度、外觀、 產(chǎn)量、抗逆性等方面符合育種目標性狀的自交后代菌株。然后進行工廠化栽培及性狀測定。最后選育出,菇體潔白、生長速度快、菇形整齊美觀、產(chǎn)量高、抗逆性強的金針菇新菌種F3-S1-1。(中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心上海食用菌分中心保藏。保藏號為4310。)
新菌種F3-S1-1與使用傳統(tǒng)多孢自交的金針菇育種方法得到的菌種F3-4(中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心上海食用菌分中心保藏。保藏號為4313。)的比較
權利要求
1. 一種金針菇多孢自交平板出菇育種方法,包括以下步驟(1)孢子收集收集親本菌株的子實體單孢子;(2)單孢子混合自交將親本的孢子涂在平板培養(yǎng)基上,進行多孢自交;(3)平板出菇待菌絲扭結、生成原基、發(fā)育成子實體;(4)自交雙核群體選取根據(jù)發(fā)育成的子實體特性,挑取菌塊,純化培養(yǎng),獲得自交菌種;(5)栽培和篩選自交菌種進行栽培,篩選性狀優(yōu)良的菌株,得到新菌種。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種金針菇多孢自交平板出菇育種方法,該方法包括孢子收集、單孢子混合自交、平板出菇、自交雙核群體選取以及栽培和篩選。該方法將大大提高工作效率和選育質(zhì)量得到的菌株目標特性明確,具有生長速度快、產(chǎn)量高、外型美觀、遺傳穩(wěn)定、抗逆性強等特點。
文檔編號A01G1/04GK102396343SQ20111010228
公開日2012年4月4日 申請日期2011年4月22日 優(yōu)先權日2011年4月22日
發(fā)明者尚曉冬, 徐珍, 秦娟, 譚琦 申請人:上海市農(nóng)業(yè)科學院