一種海參用芽孢桿菌營(yíng)養(yǎng)增強(qiáng)劑的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種海參用芽孢桿菌營(yíng)養(yǎng)增強(qiáng)劑的制備方法，其制備過(guò)程包括以下步驟：益生菌混合物與營(yíng)養(yǎng)飼料總重量比為1：2~10，增菌、洗滌后收集菌體；再與豆餅混合后干燥，干燥產(chǎn)物與營(yíng)養(yǎng)飼料混合，其重量比為1：2~10，產(chǎn)物水份含量為2~5%，制得終產(chǎn)品；利用本發(fā)明實(shí)施例所述方法配制的海參用芽孢桿菌營(yíng)養(yǎng)增強(qiáng)劑，適用于海參的育苗池和養(yǎng)成池；處理過(guò)程簡(jiǎn)單，耗時(shí)少；制備成本低于傳統(tǒng)方法，本發(fā)明粉劑保存時(shí)間長(zhǎng)，無(wú)污染。
【專利說(shuō)明】一種海參用芽孢桿菌營(yíng)養(yǎng)增強(qiáng)劑的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明主要涉及海產(chǎn)品疾病檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及海產(chǎn)品致病微生物防治營(yíng)養(yǎng)粉，尤其是一種海參用芽孢桿菌營(yíng)養(yǎng)增強(qiáng)劑的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]我國(guó)海域遼闊，自然條件優(yōu)越，海洋資源十分豐富。但目前開發(fā)利用的程度還很低。這也說(shuō)明我國(guó)開發(fā)利用海洋資源的潛力巨大，遼寧海域是中國(guó)重要的海洋生物資源、漁業(yè)資源寶庫(kù)，其盛產(chǎn)海參、扇貝、貽貝、牡蠣和魚、蝦以及藻類等，帶動(dòng)海洋經(jīng)濟(jì)發(fā)展。加強(qiáng)多邊和雙邊的海洋開發(fā)國(guó)際合作，集中集約開發(fā)利用海域及海島資源，合理配置優(yōu)勢(shì)海洋產(chǎn)業(yè)，科學(xué)高效開發(fā)海洋資源，積極開展科研與試驗(yàn)、開發(fā)與利用，海水養(yǎng)殖標(biāo)準(zhǔn)化是合理開發(fā)海水養(yǎng)殖資源的重要手段，研究制定海產(chǎn)品養(yǎng)殖標(biāo)準(zhǔn)，合理開發(fā)海水灘涂養(yǎng)殖資源，提高養(yǎng)殖海產(chǎn)品疾病是當(dāng)今養(yǎng)殖業(yè)的重點(diǎn)內(nèi)容。
[0003]海產(chǎn)品養(yǎng)殖是一項(xiàng)高風(fēng)險(xiǎn)的養(yǎng)殖業(yè)，傳統(tǒng)的小戶的海產(chǎn)品養(yǎng)殖給養(yǎng)殖戶帶來(lái)了巨大的市場(chǎng)和技術(shù)風(fēng)險(xiǎn)。為了將養(yǎng)殖戶養(yǎng)殖風(fēng)險(xiǎn)降到最低，開展對(duì)各類養(yǎng)殖業(yè)，包括魚、蝦、蟹、海參、鮑魚、貝類、海藻等各類海產(chǎn)品的疾病防治工作任務(wù)舉足輕重。有報(bào)道稱，霍亂弧菌、漂浮弧菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌、創(chuàng)傷弧菌等有害細(xì)菌，是引起海產(chǎn)品各種疾病的罪魁禍?zhǔn)住?br>
[0004]世界海參養(yǎng)殖以刺參(溫帶種)和糙海參(熱帶種)為主要品種。除中國(guó)、日本、韓國(guó)主要養(yǎng)殖刺參外，其他國(guó)家均以糙海參為主要養(yǎng)殖對(duì)象。近年來(lái)，隨著自然資源的減少和消費(fèi)需求的增加，海參的人工養(yǎng)殖在一些國(guó)家逐漸興起。其中，中國(guó)和日本是主要的養(yǎng)殖國(guó)家，印度、印度尼西亞、越南、菲律賓、韓國(guó)、埃及等也有小規(guī)模的增養(yǎng)殖。
[0005]刺參(Apostichopus japonicus)是我國(guó)有記載的20余種食用海參中價(jià)值最高、惟一分布于黃渤海域的溫帶種。其蛋白質(zhì)含量高，糖類豐富，脂類含量低，且不含膽固醇，具有很高的營(yíng)養(yǎng)保健和藥用價(jià)值，被人們視為重要的海珍品，因而具有重要的市場(chǎng)價(jià)值。近年來(lái)，海參消費(fèi)需求量的逐年增加導(dǎo)致了世界范圍內(nèi)海參自然資源的過(guò)度開發(fā)和種群數(shù)量的急劇下降，因此，海參的人工養(yǎng)殖也隨之發(fā)展起來(lái)。隨之而來(lái)的是海參養(yǎng)殖中遇到的各類問題。
[0006]芽孢桿菌是目前最常用的益生菌種類。本發(fā)明不限定芽孢桿菌的種類，只要是標(biāo)準(zhǔn)菌株即可，開發(fā)成海參養(yǎng)殖營(yíng)養(yǎng)制劑，有效提高海參體內(nèi)的益生菌群。能夠達(dá)到抗菌、免疫、促生長(zhǎng)的多重效果，對(duì)海參健康養(yǎng)殖有現(xiàn)實(shí)意義。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0007]由【背景技術(shù)】可見，提高刺參自身的免疫力，增強(qiáng)其抗病力是解決刺參病害問題的重要途徑。本研究為達(dá)到防治養(yǎng)殖業(yè)中海參患病的目的，避免在海參疾病防治中使用抗生素，本發(fā)明所述的海參用芽孢桿菌營(yíng)養(yǎng)增強(qiáng)劑，其制備方法如下:
[0008](I)增菌:從芽孢桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株的單一菌落中，挑菌接種到芽孢桿菌培養(yǎng)基中，3(T35°C條件下，100~200rpm振蕩培養(yǎng)12h后，再以3_5%的體積比接種芽孢桿菌培養(yǎng)物，進(jìn)行發(fā)酵，3(T35°C條件下，100~200rpm振蕩培養(yǎng)24~48h，至菌懸液菌含量的終濃度為107^1010cfu/g ;制得發(fā)酵產(chǎn)物；
[0009](2)洗滌:將步驟(1)獲得的發(fā)酵產(chǎn)物，以400(T8000rpm轉(zhuǎn)數(shù)離心2~5min，以收集菌體；以50倍質(zhì)量的PBS緩沖液混合，充分?jǐn)嚢鑖 5min后，收集混合液；
[0010](3)益生菌配比:將收集的混合液；按1:1的質(zhì)量比加入大豆粉，再混合均勻；
[0011](4)干燥:上述步驟(3)所得的混合物與營(yíng)養(yǎng)飼料混合，混合物與營(yíng)養(yǎng)飼料總重量比為1:2~10，干燥24~36h，產(chǎn)物水份含量為2~5%，制得海參用芽孢桿菌營(yíng)養(yǎng)增強(qiáng)劑；
[0012]其中:所述的營(yíng)養(yǎng)飼料為:黃粉蟲沙50~70份；馬尾藻粉:25~40份；海蒿子15~35 ;大豆蛋白10~15份；魚粉:5~10份；螺旋藻2~5份；貽貝粉2~5份；低聚殼聚糖:1~4份；復(fù)合多維I~4份；復(fù)合多礦I~4份。
[0013]對(duì)于以上所述的所有技術(shù)方案中，較優(yōu)的條件如下:其步驟包括菌種復(fù)蘇的步驟:芽孢桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株菌落接種在芽孢桿菌培養(yǎng)基中，3(T35°C條件下，100~200rpm振蕩培養(yǎng)12h。
[0014]對(duì)于以上所述的所有技術(shù)方案中，較優(yōu)的條件如下:所述的芽孢桿菌培養(yǎng)基，其配制方法如下:
[0015]①取葡萄糖8~IOg,鹿糖10~20g,酵母膏4~6g,胰蛋白胨5~IOg,牛肉膏4_6g,氯化鈣0.2^2g,，氯化鈉0.4-0.8g，氯化鎂f 2g，硫酸鎂0.fig蒸餾水lOOOmL，121°C下滅菌20min ；
[0016]②待所述培養(yǎng)基逐漸冷卻后，調(diào)節(jié)所述溶液的pH至5.0-7.0，冷卻備用。
[0017]本發(fā)明中，上述產(chǎn)品制備方法中，均未限定方法的其他等效條件，因其可根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)確定，也未限定所用試劑的級(jí)別，因其對(duì)結(jié)果影響小，并可以通過(guò)配制或商業(yè)途徑購(gòu)買獲得，技術(shù)人員可以依據(jù)實(shí)施例中所列條件做參考依據(jù)進(jìn)行調(diào)整。這些關(guān)于制劑方式和方法的選擇，相信本領(lǐng)域技術(shù)人員可以從現(xiàn)有技術(shù)中得到充分的啟示，本發(fā)明不再贅述。
[0018]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是:適用于海參的育苗池和養(yǎng)成池；處理過(guò)程簡(jiǎn)單，耗時(shí)少；制備成本低于傳統(tǒng)方法，本發(fā)明粉劑保存時(shí)間長(zhǎng)，無(wú)污染。
【具體實(shí)施方式】
[0019]以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。
[0020]實(shí)施例1
[0021](I)菌種復(fù)蘇:從芽孢桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株的單一菌落中，挑菌接種到芽孢桿菌培養(yǎng)基中，35°C條件下，200rpm振蕩培養(yǎng)12h。
[0022](2)增菌:再以4%的體積比接種到芽孢桿菌培養(yǎng)物中，35°C條件下，進(jìn)行發(fā)酵，IOOrpm振蕩培養(yǎng)28h，至菌懸液菌含量的終濃度為108cfu/g ;制得發(fā)酵產(chǎn)物；
[0023]其中，所述的芽孢桿菌培養(yǎng)基，其配制方法如下:
[0024]①取葡萄糖8g，蔗糖15g，酵母膏5g，胰蛋白胨5g，牛肉膏5g，氯化鈣0.2g，，氯化鈉0.4g，氯化鎂1.5g，硫酸鎂0.5g蒸餾水lOOOmL, 121°C下滅菌20min ；
[0025]②待所述培養(yǎng)基逐漸冷卻后，調(diào)節(jié)所述溶液的pH至6，冷卻備用。
[0026](3)洗滌:將步驟(2)獲得的發(fā)酵產(chǎn)物，以400(T8000rpm轉(zhuǎn)數(shù)離心3min，以收集菌體；以50倍質(zhì)量的PBS緩沖液混合，充分?jǐn)嚢?min后，收集混合液；
[0027](4)益生菌配比:將收集的混合液；按1:1的質(zhì)量比加入大豆粉，再混合均勻；
[0028](5)干燥:上述步驟(3)所得的混合物與營(yíng)養(yǎng)飼料混合，混合物與營(yíng)養(yǎng)飼料總重量比為1:80，干燥28h，產(chǎn)物水份含量為3%，制得海參用芽孢桿菌營(yíng)養(yǎng)增強(qiáng)劑；
[0029]所述的營(yíng)養(yǎng)飼料為:黃粉蟲沙50份；馬尾藻粉:40份；海蒿子35 ;大豆蛋白15份；魚粉:10份；螺旋藻5份；貽貝粉5份；低聚殼聚糖:4份；復(fù)合多維I份；復(fù)合多礦4份。
[0030]實(shí)施例2
[0031](I)菌種復(fù)蘇:從芽孢桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株的單一菌落中，挑菌接種到芽孢桿菌培養(yǎng)基中，35°C條件下，150rpm振蕩培養(yǎng)12h。
[0032](2)增菌:再以3-5%的體積比接種到芽孢桿菌培養(yǎng)物中，35°C條件下，進(jìn)行發(fā)酵，150rpm振蕩培養(yǎng)48h，至菌懸液菌含量的終濃度為101(lCfu/g ;制得發(fā)酵產(chǎn)物；
[0033]其中，所述的芽孢桿菌培養(yǎng)基，其配制方法如下:
[0034]①取葡萄糖9g，蔗糖15g，酵母膏5g，胰蛋白胨8g，牛肉膏5g，氯化鈣lg，，氯化鈉
0.8g，氯化鎂2g，硫酸鎂0.7g蒸餾水lOOOmL, 121°C下滅菌20min ；
[0035]②待所述培養(yǎng)基逐漸冷卻后，調(diào)節(jié)所述溶液的pH至7.0，冷卻備用。
[0036](3)洗滌:將步驟(2)獲得的發(fā)酵產(chǎn)物，以5000rpm轉(zhuǎn)數(shù)離心3min，以收集菌體；以50倍質(zhì)量的PBS緩沖液混合，充分?jǐn)嚢?min后，收集混合液；
[0037](4)益生菌配比:將收集的混合液；按1:1的質(zhì)量比加入大豆粉，再混合均勻；
[0038](5)干燥:上述步驟(3)所得的混合物與營(yíng)養(yǎng)飼料混合，混合物與營(yíng)養(yǎng)飼料總重量比為1:70，干燥30h，產(chǎn)物水份含量為5%，制得海參用芽孢桿菌營(yíng)養(yǎng)增強(qiáng)劑；
[0039]所述的營(yíng)養(yǎng)飼料為:黃粉蟲沙60份；馬尾藻粉:30份；海蒿子30 ;大豆蛋白15份；魚粉:7份；螺旋藻4份；貽貝粉4份；低聚殼聚糖:2份；復(fù)合多維2份；復(fù)合多礦2份。
[0040]實(shí)驗(yàn)例3
[0041](I)菌種復(fù)蘇:從芽孢桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株的單一菌落中，挑菌接種到芽孢桿菌培養(yǎng)基中，35°C條件下，IOOrpm振蕩培養(yǎng)12h。
[0042](2)增菌:再以3-5%的體積比接種到芽孢桿菌培養(yǎng)物中，35°C條件下，進(jìn)行發(fā)酵，200rpm振蕩培養(yǎng)28h，至菌懸液菌含量的終濃度為101(lCfu/g ;制得發(fā)酵產(chǎn)物；
[0043]其中，所述的芽孢桿菌培養(yǎng)基，其配制方法如下:
[0044]①取葡萄糖8g,鹿糖15g,酵母膏4g,胰蛋白胨7g,牛肉膏6g,氯化I丐0.5g,,氯化鈉0.5g,氯化鎂Ig,硫酸鎂0.8g蒸懼水lOOOmL, 121°C下滅菌20min ；
[0045]②待所述培養(yǎng)基逐漸冷卻后，調(diào)節(jié)所述溶液的pH至6.0，冷卻備用。
[0046](3)洗滌:將步驟(2)獲得的發(fā)酵產(chǎn)物，以6000rpm轉(zhuǎn)數(shù)離心3min，以收集菌體；以50倍質(zhì)量的PBS緩沖液混合，充分?jǐn)嚢?min后，收集混合液；
[0047](4)益生菌配比:將收集的混合液；按1:1的質(zhì)量比加入大豆粉，再混合均勻；
[0048](5)干燥:上述步驟(3)所得的混合物與營(yíng)養(yǎng)飼料混合，混合物與營(yíng)養(yǎng)飼料總重量比為1:60，干燥36h，產(chǎn)物水份含量為5%，制得海參用芽孢桿菌營(yíng)養(yǎng)增強(qiáng)劑；
[0049]所述的營(yíng)養(yǎng)飼料為:黃粉蟲沙50份；馬尾藻粉:30份；海蒿子15 ;大豆蛋白15份；魚粉:8份；螺旋藻5份；貽貝粉4份；低聚殼聚糖:2份；復(fù)合多維2份；復(fù)合多礦2份。
[0050]實(shí)驗(yàn)例4[0051](I)菌種復(fù)蘇:從芽孢桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株的單一菌落中，挑菌接種到芽孢桿菌培養(yǎng)基中，35°C條件下，200rpm振蕩培養(yǎng)12h。
[0052](2)增菌:再以5%的體積比接種到芽孢桿菌培養(yǎng)物中，35°C條件下，進(jìn)行發(fā)酵，IOOrpm振蕩培養(yǎng)48h，至菌懸液菌含量的終濃度為101(lCfu/g ;制得發(fā)酵產(chǎn)物；
[0053]其中，所述的芽孢桿菌培養(yǎng)基，其配制方法如下:
[0054]①取葡萄糖10g，蔗糖10g，酵母膏6g，胰蛋白胨IOg,牛肉膏6g，氯化鈣0.8g，，氯化鈉0.8g,氯化鎂2g,硫酸鎂0.1g蒸懼水lOOOmL, 121°C下滅菌20min ；
[0055]②待所述培養(yǎng)基逐漸冷卻后，調(diào)節(jié)所述溶液的pH至7.0，冷卻備用。
[0056](3)洗滌:將步驟(2)獲得的發(fā)酵產(chǎn)物，以4000rpm轉(zhuǎn)數(shù)離心5min，以收集菌體；以50倍質(zhì)量的PBS緩沖液混合，充分?jǐn)嚢?min后，收集混合液；
[0057](4)益生菌配比:將收集的混合液；按1:1的質(zhì)量比加入大豆粉，再混合均勻；
[0058](5)干燥:上述步驟(3)所得的混合物與營(yíng)養(yǎng)飼料混合，混合物與營(yíng)養(yǎng)飼料總重量比為1:50，干燥36h，產(chǎn)物水份含量為2%，制得海參用芽孢桿菌營(yíng)養(yǎng)增強(qiáng)劑；
[0059]所述的營(yíng)養(yǎng)飼料為:黃粉蟲沙70份；馬尾藻粉:25份；海蒿子35 ;大豆蛋白15份；魚粉:8份；螺旋藻5份；貽貝粉2份；低聚殼聚糖:4份；復(fù)合多維4份；復(fù)合多礦4份。
[0060]利用本發(fā)明實(shí)施例r4所述方法配制的海參用芽孢桿菌營(yíng)養(yǎng)增強(qiáng)劑喂養(yǎng)海參，平均比對(duì)照組海參育成圈中海參體重增加2~3% ;從而證明本發(fā)明產(chǎn)品適用于海參養(yǎng)殖；處理過(guò)程簡(jiǎn)單，耗時(shí)少；制備成本低于傳統(tǒng)方法，本發(fā)明粉劑保存時(shí)間長(zhǎng)，無(wú)污染。本發(fā)明對(duì)解決大批量海參的養(yǎng)殖具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。[0061]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明技術(shù)原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種海參用芽孢桿菌營(yíng)養(yǎng)增強(qiáng)劑的制備方法，其特征在于:包括以下步驟: (1)增菌:從芽孢桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株的單一菌落中，挑菌接種到芽孢桿菌培養(yǎng)基中，3(T35°C條件下，100~200rpm振蕩培養(yǎng)12h后，再以3_5%的體積比接種芽孢桿菌培養(yǎng)物，進(jìn)行發(fā)酵，30^35 °C條件下，100~200rpm振蕩培養(yǎng)24~48h，至菌懸液菌含量的終濃度為107^1010cfu/g ;制得發(fā)酵產(chǎn)物； (2)洗滌:將步驟(1)獲得的發(fā)酵產(chǎn)物，以400(T8000rpm轉(zhuǎn)數(shù)離心2~5min，以收集菌體；以50倍質(zhì)量的PBS緩沖液混合，充分?jǐn)嚢鑖 5min后，收集混合液； (3)益生菌配比:將收集的混合液；按1:1的質(zhì)量比加入大豆粉，再混合均勻； (4)干燥:上述步驟(3)所得的混合物與營(yíng)養(yǎng)飼料混合，混合物與營(yíng)養(yǎng)飼料總重量比為1:2~10，干燥24~36h，產(chǎn)物水份含量為2~5%，制得海參用芽孢桿菌營(yíng)養(yǎng)增強(qiáng)劑， 其中:所述的營(yíng)養(yǎng)飼料為:黃粉蟲沙50~70份；馬尾藻粉:25~40份；海蒿子15~35 ;大豆蛋白10~15份；魚粉:5~10份；螺旋藻2~5份；貽貝粉2~5份；低聚殼聚糖:I~4份；復(fù)合多維I~4份；復(fù)合多礦I~4份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的海參用芽孢桿菌營(yíng)養(yǎng)增強(qiáng)劑的制備方法，其特征在于，步驟(I)還包括菌種復(fù)蘇的步驟:芽孢桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株菌落接種在芽孢桿菌培養(yǎng)基中，3(T35°C條件下，100~200rpm振蕩培養(yǎng)12h。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的海參用芽孢桿菌營(yíng)養(yǎng)增強(qiáng)劑的制備方法，，其特征在于，所述的芽孢桿菌培養(yǎng)基，其配制方法如下: ①取葡萄糖8~IOg,鹿糖 l(T20g,酵母膏4~6g,胰蛋白胨5~IOg,牛肉膏4_6g,氯化鈣0.2^2g,，氯化鈉0.4-0.8g，氯化鎂f 2g，硫酸鎂0.fig蒸餾水lOOOmL，121°C下滅菌20min ； ②待所述培養(yǎng)基逐漸冷卻后，調(diào)節(jié)所述溶液的PH至5.0-7.0。
【文檔編號(hào)】A23K1/14GK103815170SQ201210469576
【公開日】2014年5月28日 申請(qǐng)日期:2012年11月19日 優(yōu)先權(quán)日:2012年11月19日
【發(fā)明者】謝克煥 申請(qǐng)人:大連德通生物技術(shù)開發(fā)有限公司