專利名稱：利用柿木屑栽培金頂側(cè)耳的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及到一種利用林業(yè)廢棄物柿木屑為主料栽培培養(yǎng)金頂側(cè)耳的方法，包括適宜分解柿木屑的金頂側(cè)耳菌株選育過程，屬于農(nóng)林殘余物利用及食藥用真菌的栽培技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
柿子樹約有二百多個品種，在中國分布廣泛，南北皆有種植。柿子營養(yǎng)價值高，是人們喜愛的果品，往往做成干果遠銷東南亞地區(qū)，因此，柿子樹作為一種高經(jīng)濟附加果樹在某些地區(qū)農(nóng)業(yè)經(jīng)濟結(jié)構(gòu)調(diào)整方面發(fā)揮著重要的作用。而柿子樹因為花果量大，營養(yǎng)消耗多，容易出現(xiàn)座果的“大小年”現(xiàn)象，合理修剪柿樹枝就成為柿子樹管理的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。在循環(huán)經(jīng)濟意識薄弱的農(nóng)村地區(qū)，修剪下來的柿木枝條往往隨意堆置或焚燒，造成了嚴(yán)重的資源浪費和環(huán)境污染，柿樹樹葉同樣存在著隨意堆置和簡易焚燒處理的資源浪費問題。經(jīng)現(xiàn)代科技分析發(fā)現(xiàn)，柿樹樹葉中含有相當(dāng)可觀的蛋白質(zhì)、氨基酸、多種維生素、黃酮類物質(zhì)和有機酸類物質(zhì)。這些物質(zhì)除可以為食用菌生長提供營養(yǎng)元素外，其中維生素可以用于促進食用菌菌絲生長；黃酮類物質(zhì)在如今生態(tài)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中常被制成生態(tài)農(nóng)藥用于驅(qū)蟲，因此它可以在食用菌菇蟲防治方面發(fā)揮一定的作用；有機酸類物質(zhì)能夠降低培養(yǎng)料整體酸堿度，對于適于生長在偏酸性環(huán)境中的食用菌具有明顯的生長促進作用。食用菌產(chǎn)業(yè)近年來在農(nóng)村經(jīng)濟改革中發(fā)揮著舉足輕重的作用，合理利用農(nóng)村廢棄果樹枝條栽培食用菌從而獲得更高的經(jīng)濟效益，已經(jīng)成為農(nóng)民廣泛接受的事實。金頂側(cè)耳目前主要是利用棉籽殼堆置發(fā)酵，裝袋滅菌后進行熟料栽培，金頂側(cè)耳是著名的食藥用真菌，是典型的高蛋白低脂肪的健康食材，并且其所含脂肪酸多為不飽和脂肪酸，能夠降低血月旨，適合肥胖和心腦血管患者食用。此外它還還有多種氨基酸、B族維生素、維生素C、煙酸、泛酸和多種礦質(zhì)元素，這些人體健康都有極大的促進作用。而在醫(yī)用方面，根據(jù)我國一些醫(yī)學(xué)文獻記載，金頂側(cè)耳可用于治療痢疾、肌肉萎縮等 ??；根據(jù)現(xiàn)代中藥藥理學(xué)的研究，它在抗腫瘤、增強機體免疫力以及清除自由基、抗衰老方面都有顯著地功效。金頂側(cè)耳是東北地區(qū)久負盛名的珍稀食用菌，有著廣闊的消費市場，因此它完全可以作為一種帶動農(nóng)民致富的食用菌菌種開發(fā)利用。同時結(jié)合河北省柿樹種植面積廣、廢棄柿木枝條豐富的情況，利用柿木屑實現(xiàn)金頂側(cè)耳的高效生產(chǎn)無疑具有重要的現(xiàn)實意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的利用柿木修剪后的廢棄枝條和樹葉配以其他輔料制成金頂側(cè)耳高效栽培料使之進一步產(chǎn)生經(jīng)濟效益，并在對環(huán)境無污染的前提下實現(xiàn)農(nóng)林廢棄物的生物轉(zhuǎn)化利用。本發(fā)明利用利用柿木屑栽培金頂側(cè)耳的方法，包括如下步驟:A、篩選具有柿木屑分解優(yōu)勢的金頂側(cè)耳株:A-1、金頂側(cè)耳種紫外誘變:
A-2、誘變株的初篩:以78%致死率的時間作為照射劑量誘變金頂側(cè)耳原生質(zhì)體，待原生質(zhì)體在柿木屑分解優(yōu)勢菌株再生平皿已再生出菌落后，取優(yōu)先再生出來、菌落直徑最大、生長最旺盛的菌落進入復(fù)篩階段；初篩培養(yǎng)基:柿木屑粉40g/L、麩皮 10g/L、KH2P04lg/L、MgS04.7Η2018/1、ρΗ 值 6.0、瓊脂20g/L，麩皮煮沸30min，過濾去渣取浸提液，柿木屑粉碎過80目篩得粉狀，直接加入培
養(yǎng)基，常規(guī)滅菌；A-3、誘變株的復(fù)篩:將初篩選出來的菌株每株接10支PDA斜面培養(yǎng)基至菌絲長滿斜面，計算菌絲生長速率，從中選出長速快、長勢好的菌株進入精篩；A-4、誘變株的精篩:將復(fù)篩出來的菌株每株接入10支裝有栽培料培養(yǎng)基的試管上進行培養(yǎng)，栽培料培養(yǎng)基:柿木屑60%、啤酒糟20%、柿樹葉10%、麩皮8%、生石灰2%，加入水或水溶液，料水比為1: 1.4進行拌料，裝入試管中，121°C下高壓滅菌150min，取長速快、長勢好的菌株；B、菌種擴繁B-1、液體培養(yǎng)取栽培時所用相同的啤酒糟3%，加入去皮馬鈴薯12%、麩皮1%共煮沸30min，過濾去渣即得培養(yǎng)基浸煮液，再加入KH2P04lg/L、MgSO4.7H201g/L、pH值6.0、瓊脂3g/L，柿木屑添加量為10%，粉碎過80目篩后直接加入培養(yǎng)基中，即得發(fā)酵培養(yǎng)液，培養(yǎng)液分裝完畢后，瓶口包扎四層棉布，棉布外加蓋兩層報紙，進行高壓滅菌，121°C、0.1-0.15MPa滅菌30min ；將滅過菌的液體培養(yǎng)基中放入接種箱中，表面紫外或甲醛熏蒸滅菌后進行接種，每瓶接精篩保存的PDA斜面菌種Icm2大小菌塊四塊，靜置24h后放入轉(zhuǎn)速為160r/min、溫度為25°C恒溫搖床培養(yǎng)96h，生物量達到25g/100mL以上，鏡檢合格后使用。B-2、麥粒菌種擴種:培養(yǎng)基為麥粒79%、柿木屑20%、生石灰1%。將麥粒用自來水浸泡IOh后,煮沸至麥粒掰開無白芯為止,濾去水分，攤開晾干，加入柿木屑、生石灰攪拌均勻，PH值自然，用500mL的細口瓶或雙層聚丙烯塑料袋裝至瓶/袋肩，0.10-0.15MPa滅菌2.5h ;避光培養(yǎng)至滿瓶/袋后7-15天即可在金頂側(cè)耳栽培過程中應(yīng)用；C、金頂側(cè)耳栽培:取步驟A-4的栽培料培養(yǎng)基，裝入17cmX32cmX0.05cm聚乙烯塑料袋，每袋裝干料300g，121° C高壓滅菌150min，冷卻后，按照5-10%的接種量接入；20°C避光培養(yǎng)至滿袋后，敞開袋口進行生殖生長管理階段，此階段保持溫度15-20 0C，空氣濕度 85-95%。所述利用柿木屑栽培金頂側(cè)耳的方法，步驟A-1所述金頂側(cè)耳種紫外誘變包括:1)菌絲體制備:培養(yǎng)基配方為去皮馬鈴薯20%、麩皮2%、KH2P04lg/L、MgS04 WH2Olg/L、pH值6.0、瓊脂0.3%。培養(yǎng)條件為160r/min、溫度為25°C恒溫搖床培養(yǎng)7天，2)原生質(zhì)體制備:2-1)將已培養(yǎng)好的菌絲置于離心管中6000r/min離心l0min，去上清液，用濃度為109g/L甘露醇滲透壓穩(wěn)定劑洗三次,按每300mg濕菌絲加ImL酶解液酶解,酶解溫度為30°C，酶解時間為150min ；酶解液是含有6g/L纖維素酶和6g/L蝸牛酶的混合酶的109g/L甘露醇溶液；2-2)稀釋:用濃度為109g/L甘露醇溶液稀釋原生質(zhì)體懸浮液至濃度為105個/mL ；
3)紫外誘變:紫外燈15W，照射距離30cm，照射劑量30s。所述利用柿木屑栽培金頂側(cè)耳的方法，步驟A-2、A-4、B_1 (非栽培用)所述柿木屑是柿木枝條粉碎，過80目篩得到的木屑粉；步驟B-2、C等栽培用途下所述柿木屑，是柿木枝條粉碎成木屑樣粉片。(即本發(fā)明中所涉及柿木屑包括兩種物理狀態(tài)，除栽培用柿木屑為常規(guī)木屑樣粉片，其余均為柿木屑粉)。所述利用柿木屑栽培金頂側(cè)耳的方法，步驟A-4所述加入培養(yǎng)料的水溶液為柿樹樹葉浸提液，浸提方法是將自然風(fēng)干的柿樹樹葉浸泡IOh后，加熱煮沸30min，料水配比為6g/100mL (w/v),冷卻過濾后裝入試管中，121 °C下高壓滅菌150min備用。本發(fā)明的技術(shù)進步效果在于:1、由于在金頂側(cè)耳紫外誘變育種初篩步驟中用柿木屑粉末作為唯一碳源能夠誘導(dǎo)篩選出更有效利用柿木屑的菌株，從而提高分解菌株選育效率；2、在液體菌種制備過程中，柿木屑作為特定底物，因誘導(dǎo)作用產(chǎn)生相應(yīng)的酶，又會縮短菌株在柿木屑為主料的培養(yǎng)基上的適應(yīng)時間，提高其發(fā)菌速度，進而提供了一種通過選育適宜利用柿木屑的金頂側(cè)耳株進行高效利用農(nóng)林廢棄物柿木屑的技術(shù)方案。3、選擇啤酒糟作為輔助營養(yǎng)成分，一是啤酒糟中B族微生物促進金頂側(cè)耳絲生長。二是啤酒糟在空氣中放置一定時間后，由于醋酸菌等微生物的氧化作用(酒糟發(fā)酵)，將殘存的乙醇等氧化形成醋酸、乳酸、酪酸等多種游離酸，將其混入其他培養(yǎng)料中會降低整體的pH值，金頂側(cè)耳喜歡偏酸性環(huán)境，菌絲體生長的最適pH值在5-6.5，因此適量添加啤酒糟能夠有效促進金頂側(cè)耳的生長。
具體實施方式
本發(fā)明技術(shù)方案的所用金頂側(cè)耳種引自上海農(nóng)科院食用菌研究所。金頂側(cè)耳(Pleurotuscitrinopileatus Sing.)隸屬于擔(dān)子菌門(Basidiomycota)、傘菌綱(Agaricomycetes)、傘菌目(Agaricales)、口蘑科(Trichiolomataceae)、側(cè)耳屬(Pleurotus),是著名的食藥兼用菌。下面結(jié)合實施例詳細說明本發(fā)明的技術(shù)方案內(nèi)容和應(yīng)用效果:A、篩選具有柿木屑分解優(yōu)勢的金頂側(cè)耳株:A-1、金頂側(cè)耳種紫外誘變:I)菌絲體制備:培養(yǎng)基配方為去皮馬鈴薯20%、麩皮2%、KH2P04lg/L、MgS04 WH2Olg/L、pH值6.0、瓊脂0.3%。培養(yǎng)條件為160r/min、溫度為25°C恒溫搖床培養(yǎng)7天，2)原生質(zhì)體制備:2-1)將已培養(yǎng)好的菌絲置于離心管中6000r/min離心lOmin，去上清液，用濃度為109g/L甘露醇滲透壓穩(wěn)定劑洗三次,按每300mg濕菌絲加ImL酶解液酶解,酶解溫度為30°C，酶解時間為150min ；酶解液是含有6g/L纖維素酶和6g/L蝸牛酶的混合酶的109g/L甘露醇溶液；2-2)稀釋:用濃度為109g/L甘露醇溶液稀釋原生質(zhì)體懸浮液至濃度為IO5個/mL ；3)紫外誘變:紫外燈15W，照射距離30cm，照射劑量30s。
A-2、誘變株的初篩:以78%致死率的時間作為照射劑量誘變金頂側(cè)耳原生質(zhì)體，待原生質(zhì)體在柿木屑分解優(yōu)勢菌株再生平皿已再生出菌落后，取優(yōu)先再生出來、菌落直徑最大、生長最旺盛的菌落進入復(fù)篩階段；初篩培養(yǎng)基:柿木屑粉40g/L、麩皮 10g/L、KH2P04lg/L、MgS04.7Η2018/1、ρΗ 值 6.0、瓊脂20g/L，麩皮煮沸30min，過濾去渣取浸提液，柿木屑粉碎過80目篩得粉狀，直接加入培
養(yǎng)基，常規(guī)滅菌；A-3、誘變株的復(fù)篩:將初篩選出來的菌株每株接10個PDA斜面培養(yǎng)基至菌絲長滿斜面，計算菌絲生長速率，從中選出長速快、長勢好的菌株進入精篩；A-4、誘變株的精篩:將復(fù)篩出來的菌株每株接入10支栽培料培養(yǎng)基試管上進行培養(yǎng)，栽培料 培養(yǎng)基:柿木屑60%、啤酒糟20%、柿樹葉10%、麩皮8%、生石灰2%，加入水或水溶液，料水比為1: 1.4進行拌料，裝入試管中，121°C下高壓滅菌150min，取長速快、長勢好的菌株；上述柿木屑是柿木枝條粉碎，過80目篩得到的粉狀木屑。上述加入培養(yǎng)料的水溶液為柿樹樹葉浸提液，浸提方法是將自然風(fēng)干的柿樹樹葉浸泡IOh后,加熱煮沸30min,料水配比為6g/100mL(w/v),冷卻過濾后裝入試管中，121°C下高壓滅菌150min備用。B、菌種擴繁B-1、液體培養(yǎng)取栽培時所用相同的啤酒糟3%，加入去皮馬鈴薯12%、麩皮1%共煮沸30min，過濾去渣即得培養(yǎng)基浸煮液，再加入KH2P04lg/L、MgSO4.7H201g/L、pH值6.0、瓊脂3g/L，柿木屑添加量為10%，粉碎過80目篩后直接加入培養(yǎng)基中，即得發(fā)酵培養(yǎng)液，培養(yǎng)液分裝完畢后，瓶口包扎四層棉布，棉布外加蓋兩層報紙，進行高壓滅菌，121°C、0.1-0.15MPa滅菌30min ；將滅過菌的液體培養(yǎng)基中放入接種箱中，表面紫外或甲醛熏蒸滅菌后進行接種，每瓶接精篩保存的PDA斜面菌種Icm2大小菌塊四塊，靜置24h后放入轉(zhuǎn)速為160r/min、溫度為25。C恒溫搖床培養(yǎng)96h，生物量達到25g/100mL以上，鏡檢合格后使用。B-2、麥粒菌種擴種:培養(yǎng)基為麥粒79%、柿木屑20%、生石灰1%。將麥粒用自來水浸泡IOh后,煮沸至麥粒掰開無白芯為止,濾去水分，攤開晾干，加入柿木屑、生石灰攪拌均勻，PH值自然，用500mL的細口瓶或雙層聚丙烯塑料袋裝至瓶/袋肩，0.10-0.15MPa滅菌
2.5h ;避光培養(yǎng)至滿瓶/袋后7-15天即可在金頂側(cè)耳栽培過程中應(yīng)用；C、金頂側(cè)耳栽培:取步驟A-4的栽培料培養(yǎng)基，裝入17cmX32cmX0.05cm聚乙烯塑料袋，每袋裝干料300g，121° C高壓滅菌150min，冷卻后，按照5-10%的接種量接入；20°C避光培養(yǎng)至滿袋后，敞開袋口進行生殖生長管理階段，此階段保持溫度15-20°C，空氣濕度85-95%。金頂側(cè)耳屬低溫型菌種，營養(yǎng)生長階段溫度不宜過高，超過28°C注意通風(fēng)散熱；菌絲長滿菌袋后，維持5天左右，敞開袋口進行生殖生長管理階段，此階段保持溫度在15-20°C，空氣濕度85%-95%，此階段需要給予一定的散射光刺激。另外，還要保持出菇環(huán)境通風(fēng)良好，使CO2濃度不宜過高，否則容易出現(xiàn)菇柄較長的畸形菇。采收前I天停止噴水。采收時，用刀片切下菇的基部，可保留較小菇。采收后，清理料面剔除老化菌絲和殘留菌柄。將料面整干，防止積水，停水五天后，進行補水。兩周后會形成第二批原基，一般可采收三潮菇。
關(guān)于本發(fā)明的有關(guān)對比研究說明:1、金頂側(cè)耳原生質(zhì)體制備所需菌絲體深層培養(yǎng)培養(yǎng)基配方優(yōu)化研究為便于菌絲體與酶液充分接觸，原生質(zhì)體制備所需菌絲體要求直徑小，因此設(shè)計在液體培養(yǎng)基配方中加入瓊脂作為增稠劑，其他成分包括:去皮馬鈴薯20%、麩皮2%、KH2PO41 g/L、MgSO4.7H201g/L、pH值6.0, PO為瓊脂添加量為0%的空白對照組，設(shè)置瓊脂添加量梯度為0.1%，最大添加量為0.6%。表I菌絲體制備培養(yǎng)基配方
權(quán)利要求
1.一種利用柿木屑栽培金頂側(cè)耳的方法，其特征包括如下步驟: A、篩選具有柿木屑分解優(yōu)勢的金頂側(cè)耳株: A-1、金頂側(cè)耳種紫外誘變: A-2、誘變株的初篩:以78%致死率的時間作為照射劑量誘變金頂側(cè)耳原生質(zhì)體，待原生質(zhì)體在柿木屑分解優(yōu)勢菌株再生平皿已再生出菌落后，取優(yōu)先再生出來、菌落直徑最大、生長最旺盛的菌落進入復(fù)篩階段； 初篩培養(yǎng)基:柿木屑粉 40g/L、麩皮 10g/L、KH2PO41g/L, MgSO4.7H201g/L、pH 值 6.0、瓊脂20g/L，麩皮煮沸30min，過濾去渣取浸提液，柿木屑粉碎過80目篩得粉狀，直接加入培養(yǎng)基，常規(guī)滅菌； A-3、誘變株的復(fù)篩:將初篩選出來的菌株每株接10支PDA斜面培養(yǎng)基至菌絲長滿斜面，計算菌絲生長速率，從中選出長速快、長勢好的菌株進入精篩； A-4、誘變株的精篩:將復(fù)篩出來的菌株每株接入10支栽培料培養(yǎng)基試管上進行培養(yǎng)，栽培料培養(yǎng)基:柿木屑60%、啤酒糟20%、柿樹葉10%、麩皮8%、生石灰2%，加入水或水溶液，料水比為1:1.4進行拌料，1211:下高壓滅菌150min ;取長速快、長勢好的菌株； B、菌種擴繁 B-1、液體培養(yǎng) 取栽培時所用相同的啤酒糟3%，加入去皮馬鈴薯12%、麩皮1%共煮沸30min，過濾去渣即得培養(yǎng)基浸煮液，再加入KH2PO41g/L、MgSO4.7H201g/L、pH值6.0、瓊脂3g/L，柿木屑添加量為10%，粉碎過80目 篩后直接加入培養(yǎng)基中，即得發(fā)酵培養(yǎng)液，培養(yǎng)液分裝完畢后，瓶口包扎四層棉布，棉布外加蓋兩層報紙，進行高壓滅菌，121°C、0.1-0.15MPa滅菌30min ； 將滅過菌的液體培養(yǎng)基中放入接種箱中，表面紫外或甲醛熏蒸滅菌后進行接種，每瓶接精篩保存的PDA斜面菌種Icm2大小菌塊四塊，靜置24h后放入轉(zhuǎn)速為160r/min、溫度為25°C恒溫搖床培養(yǎng)96h，生物量達到25g/100mL以上，鏡檢合格后使用； B-2、麥粒菌種擴種:培養(yǎng)基為麥粒79%、柿木屑20%、生石灰1%。將麥粒用自來水浸泡IOh后,煮沸至麥粒掰開無白芯為止,濾去水分，攤開晾干，加入柿木屑、生石灰攪拌均勻，pH值自然，用500mL的細口瓶或雙層聚丙烯塑料袋裝至瓶/袋肩，0.10-0.15MPa滅菌2.5h ;避光培養(yǎng)至滿瓶/袋后7-15天即可在金頂側(cè)耳栽培過程中應(yīng)用； C、金頂側(cè)耳栽培:取步驟A-4的栽培料培養(yǎng)基，裝入17cmX32cmX0.05cm聚乙烯塑料袋，每袋裝干料300g，121° C高壓滅菌150min，冷卻后，按照5-10%的接種量接入； 20°C避光培養(yǎng)至滿袋后，敞開袋口進行生殖生長管理階段，此階段保持溫度15-20°C，空氣濕度85-95%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述利用柿木屑栽培金頂側(cè)耳的方法，其特征步驟A-1所述金頂側(cè)耳種紫外誘變包括: 1)菌絲體制備:培養(yǎng)基配方為去皮馬鈴薯20%、麩皮2%、KH2P04lg/L、MgSO4.7H201g/L、pH值6.0、瓊脂0.3%。培養(yǎng)條件為160r/min、溫度為25°C恒溫搖床培養(yǎng)7天， 2)原生質(zhì)體制備: 2-1)將已培養(yǎng)好的菌絲置于離心管中6000r/min離心lOmin，去上清液，用濃度為109g/L甘露醇滲透壓穩(wěn)定劑洗三次,按每300mg濕菌絲加ImL酶解液酶解，酶解溫度為30°C，酶解時間為150min ；酶解液是含有6g/L纖維素酶和6g/L蝸牛酶的混合酶的109g/L甘露醇溶液； 2-2)稀釋:用濃度為109g/L甘露醇溶液稀釋原生質(zhì)體懸浮液至濃度為IO5個/mL ； 3)紫外誘變:紫外燈15W，照射距離30cm，照射劑量30s。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述利用柿木屑栽培金頂側(cè)耳的方法，其特征在于步驟A-2、A-4、B-1所述柿木屑是 柿木枝條粉碎,過80目篩得到的木屑粉；步驟B-2、C栽培用途下所述柿木屑，是柿木枝條粉碎成木屑樣粉片。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述利用柿木屑栽培金頂側(cè)耳的方法，其特征在于步驟A-4所述加入培養(yǎng)料的水溶液為柿樹樹葉浸提液，浸提方法是將自然風(fēng)干的柿樹樹葉浸泡IOh后，加熱煮沸30min,料水配比為6g/100mL(w/v),冷卻過濾后裝入試管中，121 °C下高壓滅菌150min 備用。
全文摘要
本發(fā)明涉及到一種利用林業(yè)廢棄物柿木屑為主料栽培培養(yǎng)金頂側(cè)耳的方法，包括適宜分解柿木屑的金頂側(cè)耳菌株選育過程，屬于農(nóng)林殘余物利用及食藥用真菌的栽培技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明通過如下步驟實現(xiàn)A、篩選具有柿木屑分解優(yōu)勢的金頂側(cè)耳菌株;B、菌種擴繁；C、金頂側(cè)耳菌栽培。本發(fā)明由于在金頂側(cè)耳紫外誘變育種初篩步驟中用柿木屑粉末作為唯一碳源能夠誘導(dǎo)篩選出更有效利用柿木屑的菌株，從而提高分解菌株選育效率；在液體菌種制備過程中，柿木屑作為特定底物，因誘導(dǎo)作用產(chǎn)生相應(yīng)的酶，又會縮短菌株在柿木屑為主料的培養(yǎng)基上的適應(yīng)時間，提高其發(fā)菌速度，進而提供了一種通過選育適宜利用柿木屑的金頂側(cè)耳菌株進行高效利用農(nóng)林廢棄物柿木屑的技術(shù)方案。
文檔編號A01G1/04GK103210791SQ20131016789
公開日2013年7月24日 申請日期2013年5月9日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月9日
發(fā)明者王謙, 劉苗, 顧峰, 劉敏 申請人:河北大學(xué)