一種鉤吻的快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種鉤吻的快速繁殖方法，包括無菌芽的獲得，腋芽的誘導，叢生芽的增殖，生根誘導，煉苗訓化，大田移栽等步驟。本發(fā)明方法可以快速獲得大量的鉤吻幼苗，有效降低生產成本。
【專利說明】一種鉤吻的快速繁殖方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)的快繁方法，屬于植物【技術領域】。
【背景技術】
[0002]鉤吻，又名大茶藥、斷腸草等，鉤吻是馬錢子科植物胡蔓藤，多年生常綠藤本植物。主要分布在廣西、云南、貴州、湖南、福建、江西及浙江等地；性溫，味苦、辛；有大毒。外用具有祛風散疾、消腫止痛、攻毒殺蟲的功能,主治疥傲、濕疹、疲疲、癰腫、療瘡、體癬、跌打損傷、風濕痹痛、神經痛，抑制腫瘤細胞生長、局部用于擴隴、免疫調節(jié)等方面。中國鉤吻已分離出17種單體，其中以鉤吻素己毒性最強。

【發(fā)明內容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種鉤吻的快速繁殖方法，由該方法所制備得到的鉤吻組培幼苗生長周期短，成活率高，可控性好，可以規(guī)?；倪M行生產。
[0004]本發(fā)明所要解決的技術問題是通過以下方案來實現(xiàn)的:
選用鉤吻生長健壯的莖段，用洗衣粉浸泡三分鐘，自來水沖洗25分鐘，在超凈工作臺上用75%酒精處理30秒，0.1 %的升汞消毒12分鐘，無菌水沖洗4-5次，接種在B5+PP333
0.5mg/L腋芽誘導培養(yǎng)基上，將誘導出來的腋芽接入增殖培養(yǎng)基B5+IBAlmg/L+赤霉素0.6mg/L上進行增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光照20001x，光期12h，暗期12h，溫度25°C，濕度50%~60%，30天后轉入生根培養(yǎng)基MS+NAA0.21 mg/L中誘導生根，培養(yǎng)條件為光照40001x,光期14h，暗期10h，溫度27°C，濕度50%~60%，試管苗生根后長約5cm進行煉苗移栽，大田大規(guī)模生產。
[0005]采用本發(fā)明培養(yǎng)出來的試管苗長勢好，生長速度快，成活率達95%，周期短，操作可控，可進行工業(yè)擴大化生產。
[0006]下面將結合【具體實施方式】對本發(fā)明作進一步闡述，但本發(fā)明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。
【具體實施方式】
[0007]實施例1
選用鉤吻生長健壯的莖段，用洗衣粉浸泡三分鐘，自來水沖洗25分鐘，在超凈工作臺上用75%酒精處理30秒，0.1%的升汞消毒12分鐘，無菌水沖洗4-5次，接種在B5+PP333 0.3mg/L腋芽誘導培養(yǎng)基上，將誘導出來的腋芽接入增殖培養(yǎng)基B5+IBA0.5mg/L+赤霉素lmg/L上進行增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光照20001x，光期12h，暗期12h，溫度25°C，濕度50%~60%，30天后轉入生根培養(yǎng)基MS+NAA0.2mg/L中誘導生根，培養(yǎng)條件為光照40001x,光期14h，暗期10h，溫度27°C，濕度50%~60%，試管苗生根后長約5cm進行煉苗移栽，大田大規(guī)模生產，成活率達80%。
[0008]實施例2選用鉤吻生長健壯的莖段，用洗衣粉浸泡三分鐘，自來水沖洗25分鐘，在超凈工作臺上用75%酒精處理30秒，0.1%的升汞消毒12分鐘，無菌水沖洗4-5次，接種在B5+PP333lmg/L腋芽誘導培養(yǎng)基上，將誘導出來的腋芽接入增殖培養(yǎng)基B5+IBA1.5mg/L+赤霉素lmg/L上進行增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光照2000lx，光期12h，暗期12h，溫度25°C，濕度50%~60%，30天后轉入生根培養(yǎng)基MS+NAA1 mg/L中誘導生根，培養(yǎng)條件為光照40001x，光期14h，暗期10h，溫度27°C，濕度50%~60%，試管苗生根后長約5cm進行煉苗移栽，大田大規(guī)模生產，成活率達85%。
[0009]實施例3
選用鉤吻生長健壯的莖段，用洗衣粉浸泡三分鐘，自來水沖洗25分鐘，在超凈工作臺上用75%酒精處理30秒，0.1%的升汞消毒12分鐘，無菌水沖洗4-5次，接種在B5+PP333 0.5mg/L腋芽誘導培養(yǎng)基上，將誘導出來的腋芽接入增殖培養(yǎng)基B5+IBAl.5mg/L+赤霉素lmg/L上進行增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光照20001x，光期12h，暗期12h，溫度25°C，濕度50%~60%，30天后轉入生根培養(yǎng)基MS+NAA0.2 mg/L中誘導生根，培養(yǎng)條件為光照40001x,光期14h，暗期10h，溫度27°C，濕度50%~60%，試管苗生根后長約5cm進行煉苗移栽，大田大規(guī)模生產，成活率達90%。
[0010]實施例4
選用鉤吻生長健壯的莖段，用洗衣粉浸泡三分鐘，自來水沖洗25分鐘，在超凈工作臺上用75%酒精處理30秒，0.1%的升汞消毒12分鐘，無菌水沖洗4-5次，接種在B5+PP333 lmg/L腋芽誘導培養(yǎng)基上，將誘導出來的腋芽接入增殖培養(yǎng)基B5+IBA0.5mg/L+赤霉素lmg/L上進行增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光照20001χ，光期12h，暗期12h，溫度25°C，濕度50%~60%，30天后轉入生根培養(yǎng)基MS+NAA0.2mg/L中誘導生根，培養(yǎng)條件為光照40001x,光期14h，暗期10h，溫度27°C，濕度50%~60%，試管苗生根后長約5cm進行煉苗移栽，大田大規(guī)模生產，成活率達92%。
【權利要求】
1.一種鉤吻的快速繁殖方法，其步驟如下: (1)外植體的處理:采用常規(guī)的組織培養(yǎng)方法對鉤吻帶芽莖段進行消毒處理； (2)誘導培養(yǎng):取步驟(I)獲得的無菌帶芽莖段接種在B5+PP3330.5mg/L腋芽誘導培養(yǎng)基上叢生芽誘導； (3)增殖培養(yǎng):取步驟(2)誘導出來的叢生芽接入增殖培養(yǎng)基B5+IBAlmg/L+赤霉素.0.6mg/L上進行增殖培養(yǎng)； (4)生根誘導:取步驟(3)培養(yǎng)30天的叢生芽轉入生根培養(yǎng)基MS+NAA0.2-1 mg/L中誘導生根； (5)煉苗移栽到大田進行大規(guī)模培養(yǎng)。
2.根據權利要求1所述的一種鉤吻的快速繁殖方法，其特征是:鉤吻的芽經消毒處理，接種在B5+PP3330.3-lmg/L腋芽誘導培養(yǎng)基上，將誘導出來的腋芽接入增殖培養(yǎng)基Β5+ΙΒΑ0.5-1.5mg/L+赤霉素lmg/L上進行增殖培養(yǎng)30天，轉入生根培養(yǎng)基MS+NAA0.2-Img/L中誘導生根，試管苗生根后長約5cm進行煉苗移栽，大田大規(guī)模生產。
3.根據權利要求1所述的一種鉤吻的快速繁殖方法，其特征是:所述的消毒處理為:選用鉤吻生長健壯的莖段，用洗衣粉浸泡三分鐘，自來水沖洗25分鐘，在超凈工作臺上用75%酒精處理30秒，0.1%的升汞消毒12分鐘，無菌水沖洗4-5次。
4.根據權利要求1所述的一種鉤吻的快速繁殖方法，其特征是:誘導增殖的條件為光照20001x，光期12h，暗期12h，溫度25°C，濕度50%-60% ;生根的條件為光照40001x，光期14h,暗期10h，溫度270C，濕度50%-60%。
5.根據權利要求1所述的一種鉤吻的快速繁殖方法，其特征是:培養(yǎng)基中加入的PP333和GA3均為過濾滅菌。
6.根據權利要求1所述的一種鉤吻的快速繁殖方法，其特征是:煉苗移栽過程中，首先在室內培養(yǎng)，去掉封口膜，敞口放置在培養(yǎng)室培養(yǎng)一周，然后使用無菌沙質黃土在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)兩周，光照強度80001x，溫度27°C，光期12h，暗期12h，濕度40%_60%，從光照培養(yǎng)基中取出的小苗，洗取根部的培養(yǎng)基，定植于鋪好的苗床上，蓋上薄膜和陰網，一周后去掉薄膜，兩周后去掉陰網，組培苗移栽25天以上就可以移栽大田或推廣應用。
【文檔編號】A01H4/00GK103444544SQ201310423647
【公開日】2013年12月18日 申請日期:2013年9月17日 優(yōu)先權日:2013年9月17日
【發(fā)明者】楊存 申請人:南京通澤農業(yè)科技有限公司