菲油果的莖尖離體快速培養(yǎng)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種菲油果的莖尖離體快速培養(yǎng)方法，其特征在于，具體步驟為：選取當(dāng)年萌發(fā)的半木質(zhì)化的新枝，剪去已展平的葉片，依次用洗衣粉、自來水沖洗，然后在無菌室超凈臺上將枝條消毒；在超凈臺上剝?nèi)￠L度0.5mm以下的莖尖，切下莖尖連同0.5cm長度的莖段進行新芽培養(yǎng)，進行叢生芽誘導(dǎo)從而培育成無菌系；將叢生芽切成單芽，進行生根培養(yǎng)；第四步：將生根的試管苗移入泥炭和珍珠巖混合基質(zhì)中進行煉苗，30天后移栽至灌滿純泥炭的塑料穴盤中，經(jīng)3個月培養(yǎng)后直接移栽至土壤或大的容器中。采用本發(fā)明提供的培養(yǎng)方法繁殖菲油果，具有繁殖速度快、繁殖率高、脫病毒及提純復(fù)壯等優(yōu)點，可在短時間內(nèi)工廠化生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)種苗。
【專利說明】菲油果的莖尖離體快速培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種菲油果的莖尖離體快速培養(yǎng)方法，屬于菲油果培養(yǎng)方法【技術(shù)領(lǐng)域】?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]菲油果是一種多用途經(jīng)濟樹木，可作綠化、盆花，四季常綠，觀賞性強花色粉紅，4-5月開花，適應(yīng)性強，耐零下10度低溫?；ㄖx后結(jié)橢圓形果實，重約75-100g，營養(yǎng)豐富，甜中帶酸，且可加工成果醬、果汁等。其種苗主要靠扦插等常規(guī)方法繁殖，但周期長且生根率低，無法滿足生產(chǎn)用種苗之需。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的是現(xiàn)有菲油果繁殖方法周期長、生根率低，無法滿足生產(chǎn)需要的技術(shù)問題。
[0004]為了解決上述問題，本發(fā)明的技術(shù)方案是提供一種菲油果的莖尖離體快速培養(yǎng)方法，其特怔在于，具體步驟為:
[0005]第一步:選取當(dāng)年萌發(fā)的半木質(zhì)化的新枝，剪去已展平的葉片，用洗衣粉溶液沖洗三遍，置自來水龍頭下沖洗3h，在無菌室超凈臺上將枝條消毒，先用75vol %乙醇溶液消毒Imin,然后用0.2vol %的潔爾敏溶液消毒15min,最后用IOvol %次氯酸鈉溶液消毒15min,用無菌水沖洗三遍后無菌濾紙吸干水份；
[0006]第二步:在超凈臺上剝?nèi)￠L度0.5mm以下的莖尖，切下莖尖連同0.5cm長度的莖段接種于第一培養(yǎng)基上進行新芽培養(yǎng)，所述第一培養(yǎng)基是在1/2MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加了玉米素(ZT)和吲哚丁酸(IBA);待莖尖伸長至0.5cm以上時，將莖尖新芽切下接種至第二培養(yǎng)基上誘導(dǎo)叢生芽，所述第二培養(yǎng)基是在WP培養(yǎng)基(木本培養(yǎng)基)的基礎(chǔ)上添加了細胞分裂素、荼乙酸；
[0007]第三步:將叢生芽切成單芽，接種至第三培養(yǎng)基中進行生根培養(yǎng)，所述第三培養(yǎng)基是在1/2MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加了吲哚丁酸和活性炭；
[0008]第四步:將生根的試管苗移栽至由重量比為3:1的泥炭和珍珠巖混合而成的基質(zhì)中，澆足水后用塑料薄膜覆蓋保溫保濕防失水萎蔫，7天后揭開薄膜煉苗，每天葉面噴水3-5次，15天后施肥料液；30天后移栽至灌滿純泥炭的塑料穴盤中，經(jīng)3個月培養(yǎng)后直接移栽至土壤或大的容器中。
[0009]優(yōu)選地，所述第二步中第一培養(yǎng)基的pH值為5.6，其中玉米素的濃度為3mg/L，吲哚丁酸的濃度為0.2mg/L，瓊脂濃度為6.5g/L，蔗糖濃度為30g/L。
[0010]優(yōu)選地，所述第二步中第二培養(yǎng)基中細胞分裂素的濃度為2mg/L，萘乙酸的濃度為0.2mg/L。
[0011]優(yōu)選地，所述第三步中第三培養(yǎng)基中吲哚丁酸的濃度為0.5mg/L，活性炭的濃度為2mg/L。[0012]優(yōu)選地，所述第二步中生芽培養(yǎng)是在溫度24°C、光照強度為3000LX及每天光照時間為12小時的條件下進行。
[0013]優(yōu)選地，所述第二步中叢生芽培養(yǎng)是在溫度24°C、光照強度為3000LX及每天光照時間為12小時的條件下進行。
[0014]優(yōu)選地，所述第三步中生根培養(yǎng)是在溫度24°C、光照強度為3000LX及每天光照時間為12小時的條件下進行。
[0015]優(yōu)選地，所述第四步中肥料液含有以重量百分比計的0.lwt%硝酸銨、0.lwt%磷酸二氫鉀、0.1wt %硫酸鎂。
[0016]采用本發(fā)明提供的培養(yǎng)方法繁殖菲油果，具有繁殖速度快、繁殖率高、脫病毒及提純復(fù)壯等優(yōu)點，可在短時間內(nèi)工廠化生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)種苗。
【具體實施方式】
[0017]為使本發(fā)明更明顯易懂，茲以優(yōu)選實施例，作詳細說明如下。
[0018]實施例
[0019]一、材料準備
[0020]1、洗衣粉溶液
[0021]2、第一培養(yǎng)基:在1/2MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加了玉米素(ZT)和吲哚丁酸(IBA)；其中玉米素的濃度為3mg/L，吲哚丁酸的濃度為0.2mg/L，瓊脂濃度為6.5g/L，蔗糖濃度為30g/L ;將第一培養(yǎng)基的pH調(diào)節(jié)至5.6。
[0022]3、第二培養(yǎng)基:在WP培養(yǎng)基(木本培養(yǎng)基)的基礎(chǔ)上添加了細胞分裂素、荼乙酸；其中細胞分裂素的濃度為2mg/L,萘乙酸的濃度為0.2mg/Lo
[0023]4、第三培養(yǎng)基:在1/2MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加了吲哚丁酸和活性炭；其中吲哚丁酸的濃度為0.5mg/L，活性炭的濃度為2mg/L。
[0024]5、肥料液:其中硝酸銨的含量為0.1wt%、磷酸二氫鉀的含量為0.1wt%、氯化鎂的含量為0.1wt%。
[0025]二、具體步驟
[0026]第一步:選取當(dāng)年萌發(fā)的半木質(zhì)化的新枝，剪去已展平的葉片，用洗衣粉溶液沖洗三遍，置自來水龍頭下沖洗3h，在無菌室超凈臺上將枝條消毒，先用75vol %乙醇溶液消毒Imin,然后用0.2vol %的潔爾敏溶液消毒15min,最后用IOvol %次氯酸鈉溶液消毒15min,用無菌水沖洗三遍后無菌濾紙吸干水份。
[0027]第二步:在超凈臺上剝?nèi)￠L度0.5mm以下的莖尖，切下莖尖連同0.5cm長度的莖段接種于第一培養(yǎng)基上進行新芽培養(yǎng)；待莖尖伸長至0.5cm以上時，將莖尖新芽切下接種至第二培養(yǎng)基上誘導(dǎo)叢生芽，生芽培養(yǎng)與叢生芽均是在溫度24°C、光照強度為3000LX及每天光照時間為12小時的條件下進行；經(jīng)過連續(xù)繼代增殖不斷擴大繁殖系數(shù)，每40-45天增殖一次，增殖率為1:3-5。
[0028]第三步:將叢生芽切成單芽，接種至第三培養(yǎng)基中進行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)是在溫度24°C、光照強度為3000LX及每天光照為時間12小時的條件下進行。
[0029]第四步:將生根的試管苗移栽至由重量比為3:1的泥炭和珍珠巖混合而成的基質(zhì)中，澆足水后用塑料薄膜覆蓋保溫保濕防失水萎蔫，7天后揭開薄膜煉苗，每天葉面噴水3-5次，15天后施肥料液。
[0030]第五步:30天后移栽至灌滿純泥炭的塑料穴盤中，經(jīng)3個月培養(yǎng)后直接移栽至土壤或大的容器中，存活率可達100%且緩苗期短生長快。
[0031]三、試驗結(jié)果
[0032]由上述試驗可知，本發(fā)明提供的菲油果的莖尖立體快速培養(yǎng)方法生根培養(yǎng)時間只需20天，生根率達96 %，試管苗煉苗成活率達98 %，一段莖段一年內(nèi)可繁育10000株種苗；而常規(guī)扦插生根時間長達100天以上，生根成活率只有30%。相較于常規(guī)培養(yǎng)方法，本發(fā)明具有繁殖速度快、繁殖 率高的優(yōu)點。
【權(quán)利要求】
1.一種菲油果的莖尖離體快速培養(yǎng)方法，其特怔在于，具體步驟為: 第一步:選取當(dāng)年萌發(fā)的半木質(zhì)化的新枝，剪去已展平的葉片，用洗衣粉溶液沖洗三遍，置自來水龍頭下沖洗3h，在無菌室超凈臺上將枝條消毒，先用75vol %乙醇溶液消毒Imin,然后用0.2vol %的潔爾敏溶液消毒15min,最后用IOvol %次氯酸鈉溶液消毒15min,用無菌水沖洗三遍后無菌濾紙吸干水份； 第二步:在超凈臺上剝?nèi)￠L度0.5_以下的莖尖，切下莖尖連同0.5cm長度的莖段接種于第一培養(yǎng)基上進行新芽培養(yǎng)，所述第一培養(yǎng)基是在1/2MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加了玉米素和吲哚丁酸；待莖尖伸長至0.5cm以上時，將莖尖新芽切下接種至第二培養(yǎng)基上誘導(dǎo)叢生芽，所述第二培養(yǎng)基是在WP培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加了細胞分裂素、荼乙酸； 第三步:將叢生芽切成單芽，接種至第三培養(yǎng)基中進行生根培養(yǎng)，所述第三培養(yǎng)基是在1/2MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加了吲哚丁酸和活性炭，第三培養(yǎng)基中吲哚丁酸的濃度為0.5mg/L，活性炭的濃度為2mg/L; 第四步:將生根的試管苗移栽至由重量比為3:1的泥炭和珍珠巖混合而成的基質(zhì)中，澆足水后用塑料薄膜覆蓋保溫保濕防失水萎蔫，7天后揭開薄膜煉苗，每天葉面噴水3-5次，15天后施肥料液；30天后移栽至灌滿純泥炭的塑料穴盤中，經(jīng)3個月培養(yǎng)后直接移栽至土壤或大的容器中。
2.如權(quán)利要求1所 述的菲油果莖尖離體快速培養(yǎng)方法，其特怔在于，所述第二步中第一培養(yǎng)基的PH值為5.6，其中玉米素的濃度為3mg/L，吲哚丁酸的濃度為0.2mg/L,瓊脂濃度為6.5g/L,鹿糖濃度為30g/L。
3.如權(quán)利要求1所述的菲油果莖尖離體快速培養(yǎng)方法，其特怔在于，所述第二步中第二培養(yǎng)基中細胞分裂素的濃度為2mg/L，萘乙酸的濃度為0.2mg/L。
4.如權(quán)利要求1所述的菲油果莖尖離體快速培養(yǎng)方法，其特怔在于，所述第三步中第三培養(yǎng)基中吲哚丁酸的濃度為0.5mg/L，活性炭的濃度為2mg/L。
5.如權(quán)利要求1所述的菲油果莖尖離體快速培養(yǎng)方法，其特怔在于，所述第二步中生芽培養(yǎng)是在溫度24°C、光照強度為3000LX及每天光照時間為12小時的條件下進行。
6.如權(quán)利要求1所述的菲油果莖尖離體快速培養(yǎng)方法，其特怔在于，所述第二步中叢生芽培養(yǎng)是在溫度24°C、光照強度為3000LX及每天光照時間為12小時的條件下進行。
7.如權(quán)利要求1所述的菲油果莖尖離體快速培養(yǎng)方法，其特怔在于，所述第三步中生根培養(yǎng)是在溫度24°C、光照強度為3000LX及每天光照時間為12小時的條件下進行。
8.如權(quán)利要求1所述的菲油果莖尖離體快速培養(yǎng)方法，其特怔在于，所述第四步中肥料液含有以重量百分比計的0.lwt%硝酸銨、0.lwt%磷酸二氫鉀、0.lwt%硫酸鎂。
【文檔編號】A01H4/00GK103461140SQ201310450183
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2013年9月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月27日
【發(fā)明者】姚德彪, 顧建平 申請人:上海旭東園藝有限公司