一種蛹蟲(chóng)草多糖組合物、其生產(chǎn)方法及用途
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種蛹蟲(chóng)草多糖組合物，其制備方法包括步驟：1）將蛹蟲(chóng)草菌株活化后，接入種子培養(yǎng)基中于20～30℃培養(yǎng)5～7d制備種子液；2）往發(fā)酵罐中加入發(fā)酵培養(yǎng)基，滅菌后冷卻至25～35℃，加入2～4%體積的種子液，于20～35℃攪拌發(fā)酵3～7d；3）將步驟2）發(fā)酵后所得混合物進(jìn)行打漿、勻漿、離心取清液，得到蛹蟲(chóng)草多糖組合物。本發(fā)明還公開(kāi)了一種蛹蟲(chóng)草多糖組合物的生產(chǎn)方法，以及其在制備提升對(duì)蝦免疫性狀的飼料或藥物中的用途，該組合物能增強(qiáng)高密度養(yǎng)殖條件下對(duì)蝦的自身抗病力。本發(fā)明蛹蟲(chóng)草多糖組合物效果明顯，生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單，且成本低廉，安全性和經(jīng)濟(jì)效益良好，適于工業(yè)化應(yīng)用。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種蛹蟲(chóng)草多糖組合物、其生產(chǎn)方法及用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種經(jīng)發(fā)酵制備的多糖組合物、其生產(chǎn)方法及用途，特別是一種蛹蟲(chóng)草多糖組合物、其生產(chǎn)方法及用途。
【背景技術(shù)】
[0002]蛹蟲(chóng)草(Cbr辦ce/751也稱(chēng)北冬蟲(chóng)夏草,是一種傳統(tǒng)名貴中藥材，富含蟲(chóng)草素、蟲(chóng)草酸、蟲(chóng)草多糖等生物活性物質(zhì)，具有抗菌、抗腫瘤、抗輻射及調(diào)節(jié)免疫功能等重要作用。在提升機(jī)體免疫力方面，其功效成分主要是活性多糖。已有的研究表明，蛹蟲(chóng)草多糖可顯著提升小鼠特異性和非特異性免疫指標(biāo)，且市場(chǎng)上已有以蛹蟲(chóng)草多糖為主要原料的以提升免疫力為主要功效的保健品。目前蟲(chóng)草來(lái)源主要靠野生資源，但野生資源日益貧乏，難于滿足市場(chǎng)需求。液態(tài)發(fā)酵作為現(xiàn)代生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)化的關(guān)鍵技術(shù)，可以快速、高效、低成本獲得高值化的目標(biāo)產(chǎn)物，目前已在諸多領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。基于蛹蟲(chóng)草顯著的生物活性和天然資源的日趨枯竭，目前已有大量研究蛹蟲(chóng)草液體發(fā)酵制備活性物質(zhì)的報(bào)道，證明在活性物質(zhì)的種類(lèi)、含量及藥理作用方面，人工發(fā)酵的蛹蟲(chóng)草與野生的蛹蟲(chóng)草及冬蟲(chóng)夏草(Cordyceps sinensis )相近,可望成為野生蟲(chóng)草的替代品,這為實(shí)現(xiàn)蟲(chóng)草活性成分的低成本工業(yè)化應(yīng)用奠定了技術(shù)基礎(chǔ)。但目前蛹蟲(chóng)草液體發(fā)酵與應(yīng)用的研究絕大多數(shù)集中在實(shí)驗(yàn)室搖瓶規(guī)模的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件優(yōu)化方面，5L以上向工業(yè)化放大的應(yīng)用研究較為缺乏，同時(shí)在多糖提取方面多是采用傳統(tǒng)的離心、烘干、粉碎、浸提、醇沉、干燥等工序，工藝繁瑣、成本高昂，缺乏高效低成本的提取方法，而在對(duì)蝦養(yǎng)殖領(lǐng)域的應(yīng)用，以及對(duì)于養(yǎng)殖對(duì)蝦免疫性狀的影響更未見(jiàn)報(bào)道。
[0003]對(duì)蝦作為大宗水產(chǎn)品，具有高蛋白、低脂肪的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成和鮮香味美的風(fēng)味特征，深受消費(fèi)者喜愛(ài)，且隨著人們生活水平的提高和飲食結(jié)構(gòu)的調(diào)整，其消費(fèi)數(shù)量和質(zhì)量要求逐年提高。為滿足對(duì)蝦的數(shù)量要求，目前主要采用`高密度養(yǎng)殖模式，但連續(xù)高密度養(yǎng)殖造成水質(zhì)惡化日趨嚴(yán)重，對(duì)蝦生長(zhǎng)緩慢和患病率增加，養(yǎng)殖效益逐年下降。而廣大養(yǎng)殖戶(hù)為了保證養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益，在養(yǎng)殖過(guò)程中超量使用(甚至濫用)諸多抗生素、殺菌劑等化學(xué)藥物，從而在養(yǎng)殖源頭上埋下了食品安全隱患，并影響了對(duì)蝦產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。因此，在目前養(yǎng)殖模式下，迫切需要一種可在養(yǎng)殖源頭通過(guò)提升對(duì)蝦自身抗病力，從而維持養(yǎng)殖戶(hù)經(jīng)濟(jì)效益和促進(jìn)產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展的免疫調(diào)節(jié)劑綠色制備方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種利用現(xiàn)代發(fā)酵工程方法制備的安全性良好的蛹蟲(chóng)草多糖組合物。
[0005]本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種高效低成本、工藝簡(jiǎn)單、適于工業(yè)化的蛹蟲(chóng)草多糖組合物的快速制備方法。
[0006]本發(fā)明的又一個(gè)目的在于提供蛹蟲(chóng)草多糖組合物在提升養(yǎng)殖對(duì)蝦免疫性狀方面的用途。[0007]本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:
一種蛹蟲(chóng)草多糖組合物，其制備方法包括如下步驟:
1)將蛹蟲(chóng)草菌株活化后，接入種子培養(yǎng)基中于20?30°C培養(yǎng)5?7d制備種子液；
2)往發(fā)酵罐中加入發(fā)酵培養(yǎng)基，滅菌后冷卻至25?35°C，加入2?4%體積的種子液，于20?35°C攪拌發(fā)酵3?7d ;
3)將步驟2)發(fā)酵后所得混合物進(jìn)行打漿、勻漿、離心取清液，得到蛹蟲(chóng)草多糖組合物。
[0008]優(yōu)選地，發(fā)酵培養(yǎng)基采用高壓蒸汽滅菌，在115-121 °C滅菌15_30min。
[0009]本發(fā)明還提供了一種蛹蟲(chóng)草多糖組合物的生產(chǎn)方法，包括如下步驟:
1)將蛹蟲(chóng)草菌株活化后，接入種子培養(yǎng)基中于20?30°C培養(yǎng)5?7d制備種子液；
2)往發(fā)酵罐中加入發(fā)酵培養(yǎng)基，滅菌后冷卻至25?35°C，加入2?4%體積的種子液，于20?35°C攪拌發(fā)酵3?7d ;
3)將步驟2)發(fā)酵后所得混合物進(jìn)行打漿、勻漿、離心取清液，得到蛹蟲(chóng)草多糖組合物。
[0010]本發(fā)明可采用本領(lǐng)域常用的打漿機(jī)、勻漿機(jī)和參數(shù)，可用較低速度將混合物中的菌絲體進(jìn)行初步打漿，然后用勻漿機(jī)和較高速度對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步的打碎，以獲得胞內(nèi)多糖。打漿和勻漿也可進(jìn)行多次。
[0011]優(yōu)選地，步驟3)中，混合物以 5000-8000r/m 打漿 5-15min、以 10000_12000r/m 勻衆(zhòng) 10_15min,以 6000 ?10000r/m 離心 10 ?30min。
[0012]優(yōu)選地，步驟2)所用發(fā)酵培養(yǎng)基為:將重量比I?5%豆柏、I?5%玉米粉、0.1?1%胡蘿卜汁、0.01?0.1%K2HP04、0.01?0.l%MgS04混合后，以質(zhì)量體積比1: (5?10)加水?dāng)嚢?。在此條件下所獲得的蛹蟲(chóng)草多糖組合物多糖含量較高，性能較優(yōu)。采用此發(fā)酵培養(yǎng)基不僅能使多糖產(chǎn)量提高30%-40%，而且由于培養(yǎng)基原料價(jià)格便宜，從而可以大大降低生產(chǎn)成本，在工業(yè)生產(chǎn)中具有顯著的經(jīng)濟(jì)效益。
[0013]優(yōu)選地，步驟2)中，發(fā)酵在罐壓0.02?0.08MPa、通氣量為0.2?2L/min以及攪拌速度為100?300r/m下進(jìn)行。
[0014]優(yōu)選地,所用蛹蟲(chóng)草菌株為蛹蟲(chóng)草(Cbroyceps mi I i tari s) G1M5H該菌株可從廣東省微生物研究所菌種保藏中心(GIM)購(gòu)得，編號(hào)為5.269。
[0015]優(yōu)選地，蛹蟲(chóng)草菌株的活化方法為:將蛹蟲(chóng)草菌株接入馬鈴薯葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基，于25?35°C培養(yǎng)96?144h，轉(zhuǎn)接2次。
[0016]優(yōu)選地，步驟I)中，種子液制備方法為:先將活化后的斜面菌種以無(wú)菌水洗滌，得孢子懸液，然后將孢子懸液接入馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基，于20?30°C下以100?300r/m振蕩培養(yǎng)5?7d得種子液。
[0017]馬鈴薯葡萄糖瓊脂(斜面)培養(yǎng)基和馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基為本領(lǐng)域常用培養(yǎng)基，本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)實(shí)際情況對(duì)這兩種培養(yǎng)基做適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。
[0018]本發(fā)明還提供蛹蟲(chóng)草多糖組合物在制備提升對(duì)蝦免疫性狀的飼料或藥物中的用途，該組合物能增強(qiáng)高密度養(yǎng)殖環(huán)境下對(duì)蝦的自身抗病力。
[0019]優(yōu)選地，該蛹蟲(chóng)草多糖組合物作為餌料添加劑加入到基礎(chǔ)餌料中，其中蛹蟲(chóng)草多糖在整個(gè)飼養(yǎng)液中的濃度大于等于0.5g/100mL，連續(xù)飼喂7d以上。
[0020]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn):
1、效果明顯:基于蛹蟲(chóng)草多糖所具有的顯著免疫調(diào)節(jié)功效，通過(guò)發(fā)酵工程制備的蛹蟲(chóng)草多糖組合物能夠顯著提升對(duì)蝦的免疫性狀。
[0021]2、工藝簡(jiǎn)單高效:在多糖提取階段，本發(fā)明方法直接將發(fā)酵液與菌絲體混合打漿、勻漿離心后獲得胞內(nèi)外多糖，相比傳統(tǒng)的離心、干燥、粉碎、浸提、濃縮工藝縮短了工藝流程。并且本發(fā)明方法制備的蛹蟲(chóng)草多糖組合物中多糖含量比傳統(tǒng)方法的高30-40%。
[0022]3、成本低廉:本發(fā)明采用大宗低值豆柏和玉米粉作為主要原料，在原料上降低了成本，同時(shí)在多糖提取階段因減少工序也顯著降低了分離成本，從而整體上降低了生產(chǎn)成本。
[0023]4、安全性和經(jīng)濟(jì)效益良好:本發(fā)明通過(guò)液態(tài)發(fā)酵快速大量制備蛹蟲(chóng)草活性多糖，并將其應(yīng)用于對(duì)奸養(yǎng)殖領(lǐng)域，一方面有利于在現(xiàn)有養(yǎng)殖模式下提升對(duì)奸自身抗病力，提高養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益；另一方面也有利于降低養(yǎng)殖源頭的化學(xué)藥物添加，提升對(duì)蝦食用安全性。
[0024]5、適于工業(yè)化應(yīng)用:目前關(guān)于蛹蟲(chóng)草的研究和應(yīng)用大多集中在實(shí)驗(yàn)室階段，5L以上工業(yè)化放大的應(yīng)用研究鮮見(jiàn)報(bào)道。而本發(fā)明蛹蟲(chóng)草多糖組合物的生產(chǎn)方法則能夠在5L及以上的工業(yè)化生產(chǎn)規(guī)模中應(yīng)用。
【具體實(shí)施方式】
[0025]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說(shuō)明。以下實(shí)施例所用的馬鈴薯葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基和馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基均為本領(lǐng)域常用的固體/液體培養(yǎng)基。
[0026]實(shí)施例1制備本發(fā)明蛹蟲(chóng)草多糖組合物
I)將蛹蟲(chóng)草菌株GIM5.269采用馬鈴薯葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基活化，以無(wú)菌水洗滌斜面得孢子懸液，接入馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基中，100r/m振蕩培養(yǎng)6d得發(fā)酵種子液。
[0027]2)配制發(fā)酵培養(yǎng)基:取重量比1%豆柏與1%玉米粉混合，加入0.5%胡蘿卜汁、
0.05%K2HP04和0.05%MgS04,以質(zhì)量體積比1:5加水?dāng)嚢?。?L發(fā)酵罐中加入3L發(fā)酵培養(yǎng)基，罐內(nèi)121°C滅菌30min，然后用流水冷卻至30°C，加入體積比3%的發(fā)酵種子液?？刂瓢l(fā)酵條件為溫度28°C、罐壓0.05MPa、通氣量2L/min、攪拌速度180r/m、培養(yǎng)時(shí)間6d。
[0028]3)取步驟2)發(fā)酵后所得混合物在打漿機(jī)中以5000r/m打漿lOmin，然后在勻漿機(jī)中以10000r/m勻衆(zhòng)15min,并于8000r/m離心20min,取上清液。
[0029]實(shí)施例2制備本發(fā)明蛹蟲(chóng)草多糖組合物
I)將蛹蟲(chóng)草菌株GIM5.269采用馬鈴薯葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基活化，以無(wú)菌水洗滌斜面得孢子懸液，接入馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基中，200r/m振蕩培養(yǎng)6d得發(fā)酵種子液。
[0030]2)配制發(fā)酵培養(yǎng)基:取重量比1%豆柏與3%玉米粉混合，加入0.1%胡蘿卜汁、
0.05%K2HP04和0.05%MgS04,以質(zhì)量體積比1:8加水?dāng)嚢琛Ｔ?L發(fā)酵罐中加入3L發(fā)酵培養(yǎng)基，罐內(nèi)121°C滅菌30min，然后用流水冷卻至30°C加入體積比3%發(fā)酵種子液?？刂瓢l(fā)酵條件為溫度25°C、罐壓0.05MPa、通氣量2L/min、攪拌速度200r/m、培養(yǎng)時(shí)間6d。
[0031]3)取步驟2)發(fā)酵后所得混合物以8000r/m打漿5min、以12000r/m勻漿lOmin、8000r/m離心20min,取上清液。
[0032]實(shí)施例3制備本發(fā)明蛹蟲(chóng)草多糖組合物
I)將蛹蟲(chóng)草GIM5.269采用馬鈴薯葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基活化，無(wú)菌水洗滌斜面得孢子懸液，接入馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基，300r/m振蕩培養(yǎng)6d得發(fā)酵種子液。
[0033]2)配制發(fā)酵培養(yǎng)基:取重量比5%豆柏與2%玉米粉混合，加入0.8%胡蘿卜汁、0.05%K2HP04和0.05%MgS04,以質(zhì)量體積比1:10加水?dāng)嚢琛Ｔ?L發(fā)酵罐中加入3L發(fā)酵培養(yǎng)基，罐內(nèi)121°C滅菌30min，流水冷卻至30°C加入體積比3%發(fā)酵種子液?？刂瓢l(fā)酵培養(yǎng)條件為溫度28°C、罐壓0.05MPa、通氣量2L/min、攪拌速度200r/m、培養(yǎng)時(shí)間7d。
[0034]3)取步驟2)發(fā)酵后所得混合物以6500r/m打漿15min、以11000r/m勻漿12min、8000r/m離心20min,取上清液。
[0035]實(shí)施例4-6用傳統(tǒng)工藝制備蛹蟲(chóng)草多糖混合物
按照與實(shí)施例1、2、3類(lèi)似的方法和條件制備蛹蟲(chóng)草多糖混合物，其中發(fā)酵培養(yǎng)基為:(實(shí)施例4)按重量體積比取蔗糖12%、玉米漿2%、酵母膏2%、硝酸鉀0.45%，加水制成；(實(shí)施例5)按重量體積比取蔗糖10%、玉米漿2%、酵母膏2%、硝酸鉀0.45%，加水制成；(實(shí)施例6)按重量體積比取蔗糖11%、玉米漿2%、酵母膏2%、硝酸鉀0.45%，加水制成。
[0036]發(fā)酵后，取發(fā)酵混合物以4000r/m離心15min，取沉淀烘干、粉碎，加水提取，離心去除沉淀，濾液濃縮至原體積的1/5，加入3倍體積95%乙醇沉淀10h，離心取沉淀。
[0037]實(shí)施例7本發(fā)明方法生產(chǎn)的蛹蟲(chóng)草多糖組合物與傳統(tǒng)方法生產(chǎn)的蛹蟲(chóng)草多糖混合物中的多糖含量比較
采用常規(guī)硫酸-苯酚法檢測(cè)實(shí)施例1-6中蛹蟲(chóng)草多糖的含量。
[0038]結(jié)果顯示，實(shí)施例1-3用本發(fā)明方法制備的蛹蟲(chóng)草多糖組合物中多糖提取率分別為2.0g/100mLU.8g/100mL和2.1g/1OOmL,實(shí)施例4_6使用傳統(tǒng)方法所得蛹蟲(chóng)草多糖混合物中多糖含量經(jīng)折算分別為1.5g/100mL、l.4g/100mL、l.5g/100mL。
[0039]可見(jiàn)，本發(fā)明方法的多糖提取率較傳統(tǒng)浸提工藝分別提高了 35%、32%和40%，且工藝簡(jiǎn)單省時(shí)。
[0040]實(shí)施例8本發(fā)明蛹蟲(chóng)草多糖組合物對(duì)對(duì)蝦免疫性狀的影響
取實(shí)施例1-3所得的蛹蟲(chóng)草多糖組合物分別作為試驗(yàn)組飼喂對(duì)蝦，對(duì)照組分別采用實(shí)施例4-6對(duì)應(yīng)的蛹蟲(chóng)草多糖混合物飼養(yǎng)對(duì)蝦。連續(xù)飼喂或飼養(yǎng)IOd后，檢測(cè)對(duì)蝦血清中酚氧化酶活力。
[0041]結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，實(shí)施例1的蛹蟲(chóng)草多糖組合物將對(duì)蝦血清中的酚氧化酶活力由156U提高至208U ;實(shí)施例2的蛹蟲(chóng)草多糖組合物將對(duì)蝦血清中的酚氧化酶活力由162U提高至213U ;實(shí)施利3的蛹蟲(chóng)草多糖組合物將對(duì)蝦血清中的酚氧化酶活力由160U提高至222U，顯著提升了對(duì)蝦的免疫水平。
[0042]實(shí)施例9制備本發(fā)明蛹蟲(chóng)草多糖組合物
I)將蛹蟲(chóng)草GM5.269接入馬鈴薯葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基，于25°C培養(yǎng)96h，轉(zhuǎn)接2次；無(wú)菌水洗滌斜面得孢子懸液，接入馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基，于20°C以lOOr/m振蕩培養(yǎng)5d得發(fā)酵種子液。
[0043]2)配制發(fā)酵培養(yǎng)基:取重量比1%豆柏與5%玉米粉混合，加入1%胡蘿卜汁、0.1%K2HP04和0.l%MgS04,以質(zhì)量體積比1:10加水?dāng)嚢琛Ｔ?L發(fā)酵罐中加入3L發(fā)酵培養(yǎng)基，罐內(nèi)115°C滅菌30min，流水冷卻至35°C加入體積比4%發(fā)酵種子液?？刂瓢l(fā)酵培養(yǎng)條件為溫度30°C、罐壓0.02MPa、通氣量2L/min、攪拌速度300r/m、培養(yǎng)時(shí)間3d。
[0044]3)取步驟2)發(fā)酵后所得的混合物以6000r/m打漿15min、以10000r/m勻漿lOmin、8000r/m離心30min,取上清液。
[0045]實(shí)施例10制備本發(fā)明蛹蟲(chóng)草多糖組合物I)將蛹蟲(chóng)草GM5.269接入馬鈴薯葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基，于30°C培養(yǎng)120h，轉(zhuǎn)接2次；無(wú)菌水洗滌斜面得孢子懸液，接入馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基，于25°C以200r/m振蕩培養(yǎng)6d得發(fā)酵種子液。
[0046]2)配制發(fā)酵培養(yǎng)基:取重量比3%豆柏與3%玉米粉混合，加入0.5%胡蘿卜汁、0.05%K2HP04和0.05%MgS04,以質(zhì)量體積比1:7加水?dāng)嚢?。?L發(fā)酵罐中加入3L發(fā)酵培養(yǎng)基，罐內(nèi)121°C滅菌15min，流水冷卻至30°C加入體積比3%發(fā)酵種子液?？刂瓢l(fā)酵培養(yǎng)條件為溫度20°C、罐壓0.06MPa、通氣量lL/min、攪拌速度200r/m、培養(yǎng)時(shí)間7d。
[0047]3)取步驟2)發(fā)酵后所得混合物以7000r/m打漿5min、以12000r/m勻漿15min、8000r/m離心20min,取上清液。
[0048]實(shí)施例11制備本發(fā)明蛹蟲(chóng)草多糖組合物
1)將蛹蟲(chóng)草GM5.269接入馬鈴薯葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基，于35°C培養(yǎng)144h，轉(zhuǎn)接2次；無(wú)菌水洗滌斜面得孢子懸液，接入馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基，于30°C以300r/m振蕩培養(yǎng)7d得發(fā)酵種子液。
[0049]2)配制發(fā)酵培養(yǎng)基:取重量比5%豆柏與1%玉米粉混合，加入0.1%胡蘿卜汁、0.01%K2HP04和0.01%MgS04,以質(zhì)量體積比1:5加水?dāng)嚢琛Ｔ?L發(fā)酵罐中加入3L發(fā)酵培養(yǎng)基，罐內(nèi)121°C滅菌20min，流水冷卻至25°C加入體積比2%發(fā)酵種子液。控制發(fā)酵培養(yǎng)條件為溫度35°C、罐壓0.08MPa、通氣量0.2L/min、攪拌速度100r/m、培養(yǎng)時(shí)間5d。
[0050]3)取步驟2)發(fā)酵后所得混合物以7500r/m打漿lOmin、以11000勻漿12min、8000r/m離心lOmin,取上清液。
[0051]實(shí)施例12-14用傳統(tǒng)提取工藝提取蛹蟲(chóng)草多糖混合物
按照與實(shí)施例9-11類(lèi)似的制備方法與條件制備蛹蟲(chóng)草多糖混合物，其中發(fā)酵培養(yǎng)基為:(實(shí)施例12)按重量體積比取蔗糖12%、玉米漿1.8%、酵母膏2%、硝酸鉀0.45%，加水制成；(實(shí)施例13)按重量體積比取蔗糖12%、玉米漿2%、酵母膏1.8%、硝酸鉀0.45%，加水制成；(實(shí)施例14)按重量體積比取蔗糖11%、玉米漿2.5%、酵母膏2%、硝酸鉀0.45%，加水制成。
[0052]發(fā)酵后，取發(fā)酵混合物以4000r/m離心15min，取沉淀烘干、粉碎，加水提取，離心去除沉淀，濾液濃縮至原體積的1/5，加入3倍體積95%乙醇沉淀10h，離心取沉淀。
[0053]實(shí)施例15本發(fā)明方法所得蛹蟲(chóng)草多糖組合物與傳統(tǒng)方法所得蛹蟲(chóng)草多糖混合物的多糖含量比較
采用常規(guī)硫酸-苯酚法檢測(cè)實(shí)施例9-14中蛹蟲(chóng)草多糖的含量。結(jié)果顯示于表1中。
[0054]表1本發(fā)明方法與傳統(tǒng)方法性能比較
【權(quán)利要求】
1.一種蛹蟲(chóng)草多糖組合物，其制備方法包括如下步驟: 1)將蛹蟲(chóng)草菌株活化后，接入種子培養(yǎng)基中于20?30°C培養(yǎng)5?7d制備種子液； 2)往發(fā)酵罐中加入發(fā)酵培養(yǎng)基，滅菌后冷卻至25?35°C，加入2?4%體積的種子液，于20?35°C攪拌發(fā)酵3?7d ; 3)將步驟2)發(fā)酵后所得混合物進(jìn)行打漿、勻漿、離心取清液，得到蛹蟲(chóng)草多糖組合物。
2.一種蛹蟲(chóng)草多糖組合物的生產(chǎn)方法，其特征在于:包括如下步驟: 1)將蛹蟲(chóng)草菌株活化后，接入種子培養(yǎng)基中于20?30°C培養(yǎng)5?7d制備種子液； 2)往發(fā)酵罐中加入發(fā)酵培養(yǎng)基，滅菌后冷卻至25?35°C，加入2?4%體積的種子液，于20?35°C攪拌發(fā)酵3?7d ; 3)將步驟2)發(fā)酵后所得混合物進(jìn)行打漿、勻漿、離心取清液，得到蛹蟲(chóng)草多糖組合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的蛹蟲(chóng)草多糖組合物的生產(chǎn)方法，其特征在于:步驟3)中，混合物以 5000-8000r/m 打漿 5_15min、以 10000-12000r/m 勻漿 10_15min，以 6000 ?10000r/m離心10?30min。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的提升對(duì)蝦免疫性狀的蛹蟲(chóng)草多糖組合物的生產(chǎn)方法，其特征在于:步驟2)所用發(fā)酵培養(yǎng)基為:將重量比I?5%豆柏、I?5%玉米粉、0.1?1%胡蘿卜汁、0.01?0.1%K2HP04、0.01?0.l%MgS04混合后，以質(zhì)量體積比1: (5?10)加水?dāng)嚢琛?br> 5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的蛹蟲(chóng)草多糖組合物的生產(chǎn)方法，其特征在于:步驟2)中，發(fā)酵在罐壓0.02?0.08MPa、通氣量為0.2?2L/min以及攪拌速度為100?300r/m下進(jìn)行。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的蛹蟲(chóng)草多糖組合物的生產(chǎn)方法，其特征在于:所述蛹蟲(chóng)草菌株為蛹蟲(chóng)草GM5.269。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的蛹蟲(chóng)草多糖組合物的生產(chǎn)方法，其特征在于:步驟I)中，活化方法為:將蛹蟲(chóng)草菌株接入馬鈴薯葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基，于25?35°C培養(yǎng)96?144h，轉(zhuǎn)接2次。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的蛹蟲(chóng)草多糖組合物的生產(chǎn)方法，其特征在于:步驟I)中，種子液制備方法為:將活化后的斜面菌種以無(wú)菌水洗滌，得孢子懸液，然后將孢子懸液接入馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基，于20?30°C下以100?300r/m振蕩培養(yǎng)5?7d得種子液。
9.權(quán)利要求1的蛹蟲(chóng)草多糖組合物在制備提升對(duì)蝦免疫性狀的飼料或藥物中的用途，該組合物能增強(qiáng)高密度養(yǎng)殖環(huán)境下對(duì)蝦的自身抗病力。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的蛹蟲(chóng)草多糖組合物在制備提升對(duì)蝦免疫性狀的飼料或藥物中的用途，其特征在于，所述蛹蟲(chóng)草多糖組合物作為餌料添加劑加入到基礎(chǔ)餌料中，其中蛹蟲(chóng)草多糖在整體飼養(yǎng)液中的濃度大于等于0.5g/100mL，連續(xù)飼喂7d或以上。
【文檔編號(hào)】A23K1/16GK103564194SQ201310486770
【公開(kāi)日】2014年2月12日 申請(qǐng)日期:2013年10月17日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月17日
【發(fā)明者】徐德峰, 李彩虹, 孫力軍, 王雅玲, 葉日英, 劉喚明, 江側(cè)燕 申請(qǐng)人:廣東海洋大學(xué)