一種德國鳶尾的組織培養(yǎng)方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種德國鳶尾的組織培養(yǎng)方法，該方法包括以下步驟：(1)培養(yǎng)基的配制，包括組培各階段培養(yǎng)基的組分和含量：1)芽誘導培養(yǎng)基：MS+6-BA(1.0-5.0)mg/L+NAA(0.1-0.5)mg/L；2)不定芽增殖培養(yǎng)基：MS+6-BA(1.0-3.0)mg/L+NAA(0.1-0.3)mg/L；3)壯苗培養(yǎng)基：MS+6-BA(0.5-2.0)mg/L+NAA(0.1-0.2)mg/L；4)生根培養(yǎng)基：MS+NAA(0.05-0.2)mg/L；上述各種情況培養(yǎng)基的ph5.8，加入蔗糖30g/.L，瓊脂6g/L，培養(yǎng)溫度為(25±1)℃，光照為80μmol?ms左右。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明具有極大提高繁殖速度和苗的整齊度，更好地保持原有的母本性狀等優(yōu)點。
【專利說明】一種德國鳶尾的組織培養(yǎng)方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種植物的培養(yǎng)，尤其是涉及一種德國鳶尾的組織培養(yǎng)方法。
【背景技術】
[0002]德國鳶尾為鳶尾科鳶尾屬多年生草本，原產(chǎn)歐洲中部和南部?，F(xiàn)在全世界各地廣泛栽植。株高50CM。具有粗壯肥大的根狀莖，劍形葉叢生，略帶灰綠色，花紫色帶白色，花期5-6月。德國鳶尾花朵碩大，色彩幽雅。喜溫暖、稍濕潤和陽光充足環(huán)境。耐寒，耐干燥和半陰，怕積水。宜疏松、肥沃和排水良好的含石灰質土壤。鳶尾類植物耐寒性強，生長健壯，葉叢美觀，花大色艷，是極好的觀花地被，本品種在園林中廣泛應用，適用于盆栽、花壇、花境觀賞，也是重要的切花材料，多片植做林下地被，或叢植于花境或庭院，是優(yōu)秀的疏林地被植物，也是良好的花鏡與庭院材料。做為國外引進的品種引種數(shù)量較少，分株繁殖速度慢，播種易變異，市場需求量大，種苗供應受限制。通過組培技術，極大提高繁殖速度和苗的整齊度，更好地保持原有的母本性狀。德國鳶尾的組培報道尚未見。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的就是為了克服上述現(xiàn)有技術存在的缺陷而提供一種德國鳶尾的組織培養(yǎng)方法。
[0004]本發(fā)明的目 的可以通過以下技術方案來實現(xiàn):一種德國鳶尾的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，該方法包括以下步驟:
[0005](I)培養(yǎng)基的配制，包括組培各階段培養(yǎng)基的組分和含量:
[0006]I)芽誘導培養(yǎng)基:MS+6-BA(l.0-5.0) mg/L+NAA (0.1-0.5) mg/L ；
[0007]2)不定芽增殖培養(yǎng)基:MS+6-BA (1.0-3.0) mg/L+NAA (0.1-0.3) mg/L ；
[0008]3)壯苗培養(yǎng)基:MS+6-BA (0.5-2.0) mg/L+NAA (0.1-0.2) mg/L ；
[0009]4)生根培養(yǎng)基:MS+NAA(0.05-0.2) mg/L ；
[0010]上述各種情況培養(yǎng)基的ph5.8，加入蔗糖30g/.L，瓊脂6g/L，培養(yǎng)溫度為(25 ± I) °C，光照為 70-90 μ mo I ms:
[0011](2)德國鳶尾的組織培養(yǎng)
[0012]I)無菌材料的獲得
[0013]摘取德國鳶尾小芽，用自來水沖洗2h后于超凈工作臺上，用75%的乙醇浸泡30s，1%。升萊浸泡15min,無菌水沖洗5_6次,無菌濾紙吸干表面水份,取小芽基部切成Icm長,接種于芽誘導培養(yǎng)基上；
[0014]2)芽的分化和增殖
[0015]小芽接種于小芽誘導培養(yǎng)基上3周后，小芽開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起，2周后可見明顯的小芽出現(xiàn)；培養(yǎng)I個月，切下帶芽愈傷組織放入不定芽增殖培養(yǎng)基培養(yǎng)，在該培養(yǎng)中生長發(fā)育良好；
[0016]3)不定芽壯苗培養(yǎng)[0017]在不定芽增殖培養(yǎng)基上，誘導出的叢生芽每叢只有2-3株可以伸長，其余處于矮化狀態(tài)，分成小叢或單芽后，放入壯苗培養(yǎng)基上，不定芽迅速伸長，20天后可以長到2-3cm ；
[0018]4)生根培養(yǎng)
[0019]取2_3cm的小植株，轉接入生根培養(yǎng)基中誘導生根；10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至4-6cm ；
[0020]5)煉苗與移栽
[0021]生根培養(yǎng)20-30天，根系長至l-2cm時，選擇根系發(fā)達生長健壯的無菌苗，室內(nèi)開瓶煉苗3天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，即可移栽室外，給予肥水管理，移栽成活率為95%。
[0022]所述的各階段培養(yǎng)基優(yōu)選以下組分和含量:
[0023]I)芽誘導培養(yǎng)基:MS+6-BAl.0mg/L+NAA0.lmg/L, MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L,MS+6-BA5mg/L+NAA0.5mg/L ；
[0024]2)不定芽增殖培養(yǎng)基:MS+6-BAlmg/L+NAA0.lmg/L, MS+6_BA2mg/L+NAA0.2mg/L,MS+6-BA3mg/L+NAA0.3mg/L ；
[0025]3)壯苗培養(yǎng)基:MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.lmg/L, MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L,MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L ；
[0026]4)生根培養(yǎng)基:MS+NAA0.05mg/L, MS+NAA0.lmg/L, MS+NAA0.2mg/L。
[0027]所述的芽誘導培養(yǎng)基優(yōu)選:MS+6-BA5.0-mg/L+NAA0.5mg/L ；
[0028]不定芽增殖培養(yǎng)基優(yōu)選:MS+6-BA3mg/L+NAA0.3mg/L ；
[0029]壯苗培養(yǎng)基優(yōu)選:MS+6-BA0.lmg/L+NAA0.lmg/L ；
[0030]生根培養(yǎng)基優(yōu)選:MS+NAA0.lmg/L,在MS+NAA0.lmg/L中，根系粗壯，須根眾多，生根率為100%。
[0031]與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明組培方法，極大提高繁殖速度和苗的整齊度，更好地保持原有的母本性狀。
【具體實施方式】
[0032]下面結合具體實施例對本發(fā)明進行詳細說明。
[0033]實施例1
[0034]一種德國鳶尾的組織培養(yǎng)方法，該方法包括以下步驟:
[0035](I)培養(yǎng)基的配制，包括組培各階段培養(yǎng)基的組分和含量:
[0036]I)芽誘導培養(yǎng)基:MS+6-BA5mg/L+NAA5mg/L ；
[0037]2)不定芽增殖培養(yǎng)基:MS+6-BA3mg/L+NAA0.3mg/L ；
[0038]3)壯苗培養(yǎng)基:MS+6-BA0.lmg/L+NAA0.lmg/L ；
[0039]4)生根培養(yǎng)基:MS+NAA0.lmg/L ；
[0040]上述各種情況培養(yǎng)基的ph5.8，加入蔗糖30g/.L，瓊脂6g/L，培養(yǎng)溫度為(25±1)°〇，光照為8(^11101 ms 左右:
[0041](2)德國鳶尾的組織培養(yǎng)
[0042]I)無菌材料的獲得
[0043]摘取德國鳶尾小芽，用自來水沖洗2h后于超凈工作臺上，用75%的乙醇浸泡30s，1%。升萊浸泡15min,無菌水沖洗5_6次,無菌濾紙吸干表面水份,取小芽基部切成Icm長,接種于芽誘導培養(yǎng)基上；
[0044]2)芽的分化和增殖
[0045]小芽接種于小芽誘導培養(yǎng)基上3周后，小芽開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起，2周后可見明顯的小芽出現(xiàn)；培養(yǎng)1個月，切下帶芽愈傷組織放入不定芽增殖培養(yǎng)基培養(yǎng)，在該培養(yǎng)中生長發(fā)育良好；
[0046]3)不定芽壯苗培養(yǎng)
[0047]在不定芽增殖培養(yǎng)基上，誘導出的叢生芽每叢只有2-3株可以伸長，其余處于矮化狀態(tài)，分成小叢或單芽后，放入壯苗培養(yǎng)基上，不定芽迅速伸長，20天后可以長到2-3cm ；在MS+6-BA0.1+NAA0.1培養(yǎng)基上芽粗壯；
[0048]4)生根培養(yǎng)
[0049]取2_3cm的小植株，轉接入生根培養(yǎng)基中誘導生根；10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至4-6cm ;在MS+NAA0.lmg/L中，根系粗壯，須根眾多，生根率為 100%。
[0050]5)煉苗與移栽
[0051]生根培養(yǎng)25天左右，根系長至l-2cm左右時，選擇根系發(fā)達生長健壯的無菌苗，室內(nèi)開瓶煉苗3天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，即可移栽室外，給予肥水管理，移栽成活率為95%。
[0052]實施例2
[0053]一種德國鳶尾的組織培養(yǎng)方法，該方法包括以下步驟:
[0054](I)培養(yǎng)基的配制，包括組培各階段培養(yǎng)基的組分和含量:
[0055]I)芽誘導培養(yǎng)基:MS+6-BAl.0mg/L+NAA0.lmg/L ；
[0056]2)不定芽增殖培養(yǎng)基:MS+6_BAlmg/L+NAA0.lmg/L ；
[0057]3)壯苗培養(yǎng)基:MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.lmg/L ；
[0058]4)生根培養(yǎng)基:MS+NAA0.05mg/L ；
[0059]上述各種情況培養(yǎng)基的ph5.8，加入蔗糖30g/.L，瓊脂6g/L，培養(yǎng)溫度為(25±1)°〇，光照為7(^11101 ms 左右:
[0060](2)德國鳶尾的組織培養(yǎng)
[0061]1)無菌材料的獲得
[0062]摘取德國鳶尾小芽，用自來水沖洗2h后于超凈工作臺上，用75%的乙醇浸泡30s，1%。升萊浸泡15min,無菌水沖洗5_6次,無菌濾紙吸干表面水份,取小芽基部切成Icm長,接種于芽誘導培養(yǎng)基上；
[0063]2)芽的分化和增殖
[0064]小芽接種于小芽誘導培養(yǎng)基上3周后，小芽開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起，2周后可見明顯的小芽出現(xiàn)；培養(yǎng)1個月，切下帶芽愈傷組織放入不定芽增殖培養(yǎng)基培養(yǎng)，在該培養(yǎng)中生長發(fā)育良好；
[0065]3)不定芽壯苗培養(yǎng)
[0066]在不定芽增殖培養(yǎng)基上，誘導出的叢生芽每叢只有2-3株可以伸長，其余處于矮化狀態(tài)，分成小叢或單芽后，放入壯苗培養(yǎng)基上，不定芽迅速伸長，20天后可以長到2-3cm ；[0067]4)生根培養(yǎng)
[0068]取2_3cm的小植株，轉接入生根培養(yǎng)基中誘導生根；10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至4-6cm ；
[0069]5)煉苗與移栽
[0070]生根培養(yǎng)20天左右，根系長至l-2cm左右時，選擇根系發(fā)達生長健壯的無菌苗，室內(nèi)開瓶煉苗3天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，即可移栽室外，給予肥水管理，移栽成活率為95%。
[0071]實施例3
[0072]—種德國鳶尾的組織培養(yǎng)方法，該方法包括以下步驟:
[0073](1)培養(yǎng)基的配制，包括組培各階段培養(yǎng)基的組分和含量:
[0074]1)芽誘導培養(yǎng)基:MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L ；
[0075]2)不定芽增殖培養(yǎng)基:MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L ；
[0076]3)壯苗培養(yǎng)基:MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L ；
[0077]4)生根培養(yǎng)基:MS+NAA0.2mg/L ；
[0078]上述各種情況培養(yǎng)基的ph5.8，加入蔗糖30g/.L，瓊脂6g/L，培養(yǎng)溫度為(25±1)°〇，光照為9(^11101 ms 左右:
[0079](2)德國鳶尾的組織培養(yǎng)
[0080]I)無菌材料的獲得
[0081]摘取德國鳶尾小芽，用自來水沖洗2h后于超凈工作臺上，用75%的乙醇浸泡30s，1%。升萊浸泡15min,無菌水沖洗5_6次,無菌濾紙吸干表面水份,取小芽基部切成Icm長,接種于芽誘導培養(yǎng)基上；
[0082]2)芽的分化和增殖
[0083]小芽接種于小芽誘導培養(yǎng)基上3周后，小芽開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起，2周后可見明顯的小芽出現(xiàn)；培養(yǎng)I個月，切下帶芽愈傷組織放入不定芽增殖培養(yǎng)基培養(yǎng)，在該培養(yǎng)中生長發(fā)育良好；
[0084]3)不定芽壯苗培養(yǎng)
[0085]在不定芽增殖培養(yǎng)基上，誘導出的叢生芽每叢只有2-3株可以伸長，其余處于矮化狀態(tài)，分成小叢或單芽后，放入壯苗培養(yǎng)基上，不定芽迅速伸長，20天后可以長到2-3cm ；
[0086]4)生根培養(yǎng)
[0087]取2_3cm的小植株，轉接入生根培養(yǎng)基中誘導生根；10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至4-6cm ；
[0088]5)煉苗與移栽
[0089]生根培養(yǎng)30天左右，根系長至l-2cm左右時，選擇根系發(fā)達生長健壯的無菌苗，室內(nèi)開瓶煉苗3天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，即可移栽室外，給予肥水管理，移栽成活率為95%。
【權利要求】
1.一種德國鳶尾的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，該方法包括以下步驟: (1)培養(yǎng)基的配制，包括組培各階段培養(yǎng)基的組分和含量:
1)芽誘導培養(yǎng)基:MS+6-BA(l.0-5.0) mg/L+NAA (0.1-0.5) mg/L ；
2)不定芽增殖培養(yǎng)基:MS+6-BA(l.0-3.0) mg/L+NAA (0.1-0.3) mg/L ；
3)壯苗培養(yǎng)基:MS+6-BA(0.5-2.0) mg/L+NAA (0.1-0.2) mg/L ； 4)生根培養(yǎng)基:MS+NAA(0.05-0.2) mg/L ； 上述各種情況培養(yǎng)基的Ph5.8，加入蔗糖30g/.L，瓊脂6g/L，培養(yǎng)溫度為(25 ± I) V，光照為 70-90 μ mo I ms: (2)德國鳶尾的組織培養(yǎng) 1)無菌材料的獲得 摘取德國鳶尾小芽，用自來水沖洗2h后于超凈工作臺上，用75%的乙醇浸泡30s，1%ο升萊浸泡15min,無菌水沖洗5_6次,無菌濾紙吸干表面水份,取小芽基部切成Icm長,接種于芽誘導培養(yǎng)基上； 2)芽的分化和增殖 小芽接種于小芽誘導培養(yǎng)基上3周后，小芽開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起，2周后可見明顯的小芽出現(xiàn)；培養(yǎng)I個月，切下帶芽愈傷組織放入不定芽增殖培養(yǎng)基培養(yǎng)，在該培養(yǎng)中生長發(fā)育良好； 3)不定芽壯苗培養(yǎng) 在不定芽增殖培養(yǎng)基上，誘導出的叢生芽每叢只有2-3株可以伸長，其余處于矮化狀態(tài)，分成小叢或單芽后，放入壯苗培養(yǎng)基上，不定芽迅速伸長，20天后可以長到2-3cm ； 4)生根培養(yǎng) 取2-3cm的小植株，轉接入生根培養(yǎng)基中誘導生根；10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至4-6cm ； 5)煉苗與移栽 生根培養(yǎng)20-30天，根系長至l_2cm時，選擇根系發(fā)達生長健壯的無菌苗，室內(nèi)開瓶煉苗3天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，即可移栽室外，給予肥水管理，移栽成活率為95%。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種德國鳶尾的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的各階段培養(yǎng)基優(yōu)選以下組分和含量: 1)芽誘導培養(yǎng)基:MS+6-BAl.0mg/L+NAA0.lmg/L, MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L,MS+6-BA5mg/L+NAA0.5mg/L ； 2)不定芽增殖培養(yǎng)基:MS+6-BAlmg/L+NAA0.lmg/L, MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L,MS+6-BA3mg/L+NAA0.3mg/L ； 3)壯苗培養(yǎng)基:MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.lmg/L, MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L,MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L ；
4)生根培養(yǎng)基:MS+NAA0.05mg/L, MS+NAA0.lmg/L, MS+NAA0.2mg/L。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的一種德國鳶尾的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的芽誘導培養(yǎng)基優(yōu)選:MS+6-BA5.0-mg/L+NAA0.5mg/L ； 不定芽增殖培養(yǎng)基優(yōu)選:MS+6-BA3mg/L+NAA0.3mg/L ；壯苗培養(yǎng)基優(yōu)選:MS+6-BA0.lmg/L+NAA0.lmg/L ； 生根培養(yǎng)基優(yōu)選:MS+NAA0.lmg/L,在MS+NAA0.lmg/L中，根系粗壯，須根眾多，生根率為 1 00%。
【文檔編號】A01H4/00GK103734020SQ201410038236
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2014年1月26日 優(yōu)先權日:2014年1月26日
【發(fā)明者】黃建榮, 張浪, 陳建華, 沈勤 申請人:上海上房園藝有限公司, 上海上房園林植物研究所有限公司