一種羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種及制備方法以及用該原種進(jìn)行液體培養(yǎng)的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種及制備方法以及用該原種進(jìn)行液體培養(yǎng)的方法。本發(fā)明以木屑、麥麩、玉米粉、黃豆粉為主要原料，制作羊肚菌固體培養(yǎng)基，經(jīng)過(guò)接種培養(yǎng)后，形成一種用于羊肚菌液體培養(yǎng)的發(fā)酵原種，此固體發(fā)酵原種無(wú)需逐級(jí)擴(kuò)大，可直接用于羊肚菌液體培養(yǎng)，操作簡(jiǎn)單，菌絲生長(zhǎng)快，較傳統(tǒng)工藝發(fā)酵周期縮短，羊肚菌胞外多糖含量顯著提高。
【專利說(shuō)明】一種羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種及制備方法以及用該原種進(jìn)行液體培養(yǎng)的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于菌種培養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種及制備方法以及用該原種進(jìn)行液體培養(yǎng)的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]羊肚菌是一種珍貴稀有的野生食藥用菌，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，羊肚菌生物活性有效組分食(藥)用真菌多糖的含量很高，其子實(shí)體多糖入藥有消積殺蟲(chóng)的作用，能增強(qiáng)人體免疫功能，具有抗病毒、抗腫瘤作用，能降低膽固醇含量，防止動(dòng)脈硬化等。
[0003]目前雖有報(bào)道稱已實(shí)現(xiàn)羊肚菌的人工栽培，但迄今未見(jiàn)商品化人工栽培羊肚菌的報(bào)道，究其原因主要是羊肚菌子實(shí)體形成階段對(duì)空氣十分敏感。利用野生子實(shí)體來(lái)提取羊肚菌多糖不但成本高，而且原料來(lái)源有限，以液體培養(yǎng)羊肚菌菌絲體和發(fā)酵液為主要原料提取多糖，既可降低成本又可提高生產(chǎn)效率，具有十分廣闊的應(yīng)用前景，而篩選適合羊肚菌液體培養(yǎng)的發(fā)酵工藝是提高羊肚菌多糖產(chǎn)率主要因素。
[0004]傳統(tǒng)的液體培養(yǎng)發(fā)酵工藝要經(jīng)過(guò)接種、靜置培養(yǎng)和搖瓶培養(yǎng)等多個(gè)步驟，而接種塊的大小、薄厚及接種的好壞直接影響液體培養(yǎng)的產(chǎn)量，接種后菌種塊必須浮在液面不能沉下去，這樣靜置后才容易形成更多的菌絲體，成功完成液體培養(yǎng)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的 是提供一種產(chǎn)量高的羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種；
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種該羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種的制備方法。
[0006]羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種是由羊肚菌一級(jí)種培養(yǎng)而成的菌種，以固體培養(yǎng)基在專用瓶或袋進(jìn)行培養(yǎng)，用于羊肚菌液體培養(yǎng)，操作簡(jiǎn)單，菌絲生長(zhǎng)快，發(fā)酵周期短，簡(jiǎn)化了傳統(tǒng)羊肚菌液體培養(yǎng)過(guò)程中菌種逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)的工藝。
[0007]本發(fā)明技術(shù)方案如下:
一種羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種，它由羊肚菌(Morchella sp.)經(jīng)過(guò)接種培養(yǎng)后制得。
[0008]一種羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種的制備方法，包括下列步驟:
A、羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種培養(yǎng)基包括下列質(zhì)量份配比的組份，木屑15.0份一25.0份、麥麩65.0份一 75.0份、玉米粉4.5份一6.0份、黃豆粉3.7份一 5.0份，拌水量為上述組分總質(zhì)量的120% —140% ；
B、羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種的培養(yǎng)，將羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種培養(yǎng)基裝袋滅菌冷卻后，無(wú)菌操作接入羊肚菌(Morchella sp.)，于23°C—27 °C溫度下恒溫培養(yǎng)得羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種。
[0009]優(yōu)選地，所述羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種培養(yǎng)基還包括下列組份，磷酸氫二鉀
0.10—0.20質(zhì)量份，磷酸二氫鉀0.10—0.25質(zhì)量份，硫酸鎂0.10—0.20質(zhì)量份份的，維生素B1IO —15毫克/千克，維 生素B2IO —15毫克/千克。[0010]優(yōu)選地,所述羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種培養(yǎng)基在0.12MPa壓力下滅菌I小時(shí)。
[0011]用上述方法制備的羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種進(jìn)行液體培養(yǎng)的方法，它包括下列步驟:
A、液體發(fā)酵培養(yǎng)基制備:玉米粉100g，黃豆粉50g，硫酸鎂10g，磷酸二氫鉀15g，磷酸氫二鉀15g，加水至10L，熬煮過(guò)濾后裝入600ml三角瓶，每瓶裝料300ml，棉花塞封口，高壓
0.12MPa滅菌30min，冷卻后可得液體發(fā)酵培養(yǎng)基；
B、羊肚菌液體培養(yǎng)，將權(quán)利要求4制備的羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種在無(wú)菌條件下攪碎，接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，置于搖床上培養(yǎng)，以培養(yǎng)液清亮為培養(yǎng)終點(diǎn)。優(yōu)選地，所述步驟B中羊肚菌液體培養(yǎng)以180r/min的轉(zhuǎn)速，在25°C溫度下?lián)u瓶培養(yǎng)。
[0012]本發(fā)明羊肚菌(Morchella sp.) 801號(hào)購(gòu)買于四川綿陽(yáng)食用菌研究所。
[0013]本發(fā)明以木屑、麥麩、玉米粉、黃豆粉為主要原料制作羊肚菌原種培養(yǎng)基，經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)接、培養(yǎng)后，形成一種用于羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種，此固體發(fā)酵原種無(wú)需靜置培養(yǎng)，無(wú)需逐級(jí)擴(kuò)大，接入液體培養(yǎng)基后可實(shí)現(xiàn)多個(gè)萌發(fā)點(diǎn)，可以簡(jiǎn)化傳統(tǒng)液體培養(yǎng)發(fā)酵工藝，縮短發(fā)酵周期，提高菌絲體產(chǎn)量和發(fā)酵效率，操作簡(jiǎn)單，菌絲生長(zhǎng)快，較傳統(tǒng)工藝發(fā)酵周期縮短，羊肚菌胞外多糖含量顯著提高。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0014]圖1是一種羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種制備方法的工藝流程圖；
圖2是一種用羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種進(jìn)行液體培養(yǎng)的工藝流程圖；
圖3是傳統(tǒng)液體培養(yǎng)方法的工藝流程圖。
【具體實(shí)施方式】
[0015]下面的實(shí)施例可以使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好地理解本項(xiàng)技術(shù)，但不以任何方式限制本發(fā)明。
[0016]實(shí)施例1、羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種的制備方法如下:
A、一級(jí)種的準(zhǔn)備:羊肚菌(Morchellasp.) 801號(hào)購(gòu)買于四川綿陽(yáng)食用菌研究所；
B、羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種培養(yǎng)基組成:木屑2000g，麥麩7000g，玉米粉500g，黃豆粉460g,磷酸氫二鉀15g,磷酸二氫鉀15g,硫酸鎂IOg,維生素B1IOOmg,維生素B2IOO mg,水12.5L ；
C、羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種的培養(yǎng):將步驟B原種培養(yǎng)基拌勻后分別裝入500ml食用菌聚丙烯塑料袋中，松緊適宜，用棉花塞封口，高壓0.12MPa滅菌I小時(shí)。待冷卻后，無(wú)菌操作接入A步驟準(zhǔn)備的羊肚菌一級(jí)種，25°C恒溫培養(yǎng)20天可得羊肚菌液體培養(yǎng)原種。
[0017]實(shí)施例2、羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種的制備方法如下:
A、一級(jí)種的準(zhǔn)備:羊肚菌(Morchellasp.) 801號(hào)購(gòu)買于四川綿陽(yáng)食用菌研究所；
B、羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種培養(yǎng)基組成:木屑2500g，麥麩6500g，玉米粉600g，黃豆粉370g,磷酸氫二鉀IOg,磷酸二氫鉀IOg,硫酸鎂20g,維生素B1IOOmg,維生素B2150mg,水12.0L。
[0018]C、羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種的培養(yǎng):將步驟B原種培養(yǎng)基拌勻后分別裝入500ml食用菌聚丙烯塑料袋中，松緊適宜，用棉花塞封口，高壓0.12MPa滅菌I小時(shí)。待冷卻后，無(wú)菌操作接入A步驟準(zhǔn)備的羊肚菌一級(jí)種，23°C恒溫培養(yǎng)20天可得羊肚菌液體培養(yǎng)原種。
[0019]實(shí)施例3、羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種的制備方法如下:
A、一級(jí)種的準(zhǔn)備:羊肚菌(Morchellasp.) 801號(hào)購(gòu)買于四川綿陽(yáng)食用菌研究所；
B、羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種培養(yǎng)基組成:木屑1500g，麥麩7500g，玉米粉450g，黃豆粉500g,磷酸氫二鉀20g,磷酸二氫鉀25g,硫酸鎂15g,維生素B1ISOmg,維生素B2IOO mg,水14.0L0
[0020]C、羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種的培養(yǎng):將步驟B原種培養(yǎng)基拌勻后分別裝入500ml食用菌聚丙烯塑料袋中，松緊適宜，用棉花塞封口，高壓0.12MPa滅菌I小時(shí)。待冷卻后，無(wú)菌操作接入A步驟準(zhǔn)備的羊肚菌一級(jí)種，27°C恒溫培養(yǎng)20天可得羊肚菌液體培養(yǎng)原種。
[0021]實(shí)施例4、與實(shí)施例1不同之處在于:羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種培養(yǎng)基組成為:木屑2000g，麥麩7000g，玉米粉500g，黃豆粉460g,水12.5L。
[0022]實(shí)施例5、用羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種進(jìn)行液體培養(yǎng)的方法如下:
液體發(fā)酵培養(yǎng)基制備:玉米粉100g，黃豆粉50g，硫酸鎂10g，磷酸二氫鉀15g，磷酸氫二鉀15g，加水至10L，熬煮過(guò)濾后裝入600ml三角瓶，每瓶裝料300ml，棉花塞封口，高壓
0.12MPa滅菌30min，冷卻后可得液體發(fā)酵培養(yǎng)基。
[0023]用羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種進(jìn)行液體培養(yǎng)，將實(shí)施例1-實(shí)施例3得到的羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種在無(wú)菌條件下攪碎，接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，置于搖床上，以180r/min的轉(zhuǎn)速，于25°C溫度下?lián)u瓶培養(yǎng)，以培養(yǎng)液清亮為培養(yǎng)終點(diǎn)，測(cè)定菌絲球數(shù)、菌絲球直徑、菌絲干重和胞外多糖含量等發(fā)酵指標(biāo)，結(jié)果見(jiàn)表1。
[0024]對(duì)照例:為羊肚菌傳統(tǒng)液體培養(yǎng)方法，與實(shí)施例1不同在于將步驟A準(zhǔn)備的羊肚菌(801號(hào))一級(jí)種無(wú)菌操作接入實(shí)施例5中的液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種塊的大小、薄厚以菌種塊浮在液面不沉下去為準(zhǔn)，先置于恒溫培養(yǎng)箱，25°C靜置48-72小時(shí)，待菌絲萌發(fā)后，置于搖床上，以180r/min、25°C搖瓶培養(yǎng)7天作為液體菌種。將此液體菌種無(wú)菌操作抽取5ml接入步驟D制備的液體發(fā)酵培養(yǎng)基，置于搖床上，以180r/min、25°C搖瓶培養(yǎng)，以培養(yǎng)液清亮為培養(yǎng)終點(diǎn)，測(cè)定菌絲球數(shù)、菌絲球直徑、菌絲干重和胞外多糖含量等發(fā)酵指標(biāo)。
[0025]羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵試驗(yàn)結(jié)果參見(jiàn)表1，利用羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種進(jìn)行液體發(fā)酵時(shí)，可直接將發(fā) 酵原種接入液體培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵，簡(jiǎn)化了傳統(tǒng)羊肚菌液體培養(yǎng)過(guò)程中菌種逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)的工藝。利用羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種進(jìn)行的液體發(fā)酵相比傳統(tǒng)液體培養(yǎng)，菌絲球數(shù)量多，大小均勻，菌絲干重增加，且胞外多糖含量最高提高了 10%。
【權(quán)利要求】
1.一種羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種,其特征在于:它由羊肚菌(Morchella sp.)經(jīng)過(guò)接種培養(yǎng)后制得。
2.一種羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種的制備方法，其特征在于它包括下列步驟: A、羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種培養(yǎng)基包括下列質(zhì)量份配比的組份，木屑15.0份一25.0份、麥麩65.0份一75.0份、玉米粉4.5份一6.0份、黃豆粉3.7份一5.0份，拌水量為上述組分總質(zhì)量的120% —140% ； B、羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種的培養(yǎng)，將羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種培養(yǎng)基裝袋滅菌冷卻后，無(wú)菌操作接入羊肚菌(Morchella sp.)，于23°C—27 °C溫度下恒溫培養(yǎng)得羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種的制備方法，其特征在于:所述羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種培養(yǎng)基還包括下列組份，磷酸氫二鉀0.10—0.20質(zhì)量份，磷酸二氫鉀0.10—0.25質(zhì)量份，硫酸鎂0.10—0.20質(zhì)量份份的，維生素B1IO —15毫克/千克，維生素B2IO —15毫克/千克。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種的制備方法，其特征在于:所述羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種培養(yǎng)基在0.12MPa壓力下滅菌I小時(shí)。
5.用權(quán)利要求4制備的羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種進(jìn)行液體培養(yǎng)的方法，其特征在于它包括下列步驟: A、液體發(fā)酵培養(yǎng)基制備:玉米粉100g，黃豆粉50g，硫酸鎂10g，磷酸二氫鉀15g，磷酸氫二鉀15g，加水至10L，熬煮過(guò)濾后裝入600ml三角瓶，每瓶裝料300ml，棉花塞封口，高壓0.12MPa滅菌30min，冷 卻后可得液體發(fā)酵培養(yǎng)基； B、羊肚菌液體培養(yǎng)，將權(quán)利要求4制備的羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種在無(wú)菌條件下攪碎，接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，置于搖床上培養(yǎng)，以培養(yǎng)液清亮為培養(yǎng)終點(diǎn)。
6.權(quán)利要求5所述的羊肚菌 液體培養(yǎng)發(fā)酵原種進(jìn)行液體培養(yǎng)的方法，其特征在于:所述步驟B中羊肚菌液體培養(yǎng)以180r/min的轉(zhuǎn)速，在25°C溫度下?lián)u瓶培養(yǎng)。
【文檔編號(hào)】C05G3/00GK103804090SQ201410059492
【公開(kāi)日】2014年5月21日 申請(qǐng)日期:2014年2月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月21日
【發(fā)明者】韓融冰, 路等學(xué), 趙玉卉, 王龍 申請(qǐng)人:甘肅省科學(xué)院生物研究所