一種羊肚菌液態(tài)菌種的培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體的說，涉及一種羊肚菌液態(tài)菌種的培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]羊肚菌是一種珍貴稀有的野生食用菌，營養(yǎng)價(jià)值高。目前雖有報(bào)道稱已實(shí)現(xiàn)羊肚菌的人工栽培，但所采用的羊肚菌菌種培養(yǎng)基成分往往會(huì)對羊肚菌菌種的生長質(zhì)量產(chǎn)生較大影響，羊肚菌菌種培養(yǎng)過程中需要經(jīng)過接種、靜置培養(yǎng)和搖瓶培養(yǎng)等多個(gè)步驟，而且還需要向所述培養(yǎng)器皿中人工通入無菌空氣，造成培養(yǎng)步驟繁瑣、勞動(dòng)強(qiáng)度高。因此，設(shè)計(jì)一種成分搭配合理的羊肚菌液態(tài)菌種培養(yǎng)基和一種培養(yǎng)工藝簡單的羊肚菌液態(tài)菌種的培養(yǎng)方法對羊肚菌的栽培具有重大的現(xiàn)實(shí)意義。
[0003]為了解決以上存在的問題，人們一直在尋求一種理想的技術(shù)解決方案。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種羊肚菌液態(tài)菌種的培養(yǎng)方法。
[0005]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是一種羊肚菌液態(tài)菌種的培養(yǎng)方法，具體包括以下步驟:
提供一種羊肚菌液態(tài)菌種培養(yǎng)基；
將羊肚菌原種接種到所述羊肚菌液態(tài)菌種培養(yǎng)基中進(jìn)行密封培養(yǎng)，當(dāng)所述羊肚菌原種的菌絲萌發(fā)后，每天搖動(dòng)所述羊肚菌液態(tài)菌種培養(yǎng)基I次直至獲得羊肚菌栽培種。
[0006]優(yōu)選地，提供所述羊肚菌液態(tài)菌種培養(yǎng)基的步驟包括:
將松樹枝200-300g、土豆200-400g和水1200ml-1800ml進(jìn)行混合，然后依次經(jīng)過煮沸、冷卻、過濾處理得到濾液，將糖類物質(zhì)15-30g加入到所述濾液中并溶解制得羊肚菌液態(tài)菌種營養(yǎng)濾液，取所述羊肚菌液態(tài)菌種營養(yǎng)濾液150 ml置于培養(yǎng)瓶中，然后向所述培養(yǎng)瓶中加入洗凈烘干的谷殼10-30g和碳酸鈣l_5g，制得羊肚菌液態(tài)菌種培養(yǎng)基。
[0007]基于上述，制備所述羊肚菌液態(tài)菌種營養(yǎng)濾液步驟中，所述糖類物質(zhì)是指蔗糖、葡萄糖或麥芽糖等，優(yōu)選地，用水浸泡新鮮麥粒300-400g，并在室溫下促使所述麥粒發(fā)芽直至麥芽長度約為所述麥粒長度的3-6倍，然后，將所述麥芽烘干并磨成麥芽粉，然后向所述麥芽粉中加入所述麥芽粉5-7倍質(zhì)量的所述濾液，經(jīng)糖化、過濾后制得羊肚菌液態(tài)菌種營養(yǎng)濾液。
[0008]優(yōu)選地，所述羊肚菌原種菌絲萌發(fā)后，每間隔24小時(shí)搖動(dòng)所述羊肚菌液態(tài)菌種培養(yǎng)基I次，使得所述羊肚菌液態(tài)菌種培養(yǎng)基中的谷殼完全被浸濕。簡言之，在培養(yǎng)期間，每天定時(shí)搖動(dòng)所述羊肚菌液態(tài)菌種培養(yǎng)基I次，比如每天早上8點(diǎn)、每天上午10點(diǎn)或每天下午3點(diǎn)搖動(dòng)所述羊肚菌液態(tài)菌種培養(yǎng)基I次，使谷殼完全浸沒在所述羊肚菌液態(tài)菌種培養(yǎng)基中等。
[0009]優(yōu)選地，所述羊肚菌原種是通過對羊肚菌母種進(jìn)行一級培養(yǎng)或二級培養(yǎng)而獲得的。
[0010]基于上述，所述羊肚菌母種進(jìn)行一級培養(yǎng)的步驟包括:
將棉籽殼20-30g、雜木肩15-20g、谷殼20-30g、麩皮15_25g、玉米粉8_12g分別用水浸泡，過濾撈出后分別加水煮沸，撈出瀝干，然后進(jìn)行混合制得混合料，向所述混合料中加入鹿糖5-10g、碳酸媽l_5g和磷肥l_5g，混合均勾制得羊肚菌一級原種培養(yǎng)基；
對所述羊肚菌一級原種培養(yǎng)基進(jìn)行高溫滅菌、冷卻處理，然后向所述羊肚菌一級原種培養(yǎng)基中接入羊肚菌母種進(jìn)行培養(yǎng)，獲得羊肚菌一級原種。
[0011]基于上述，其中制備羊肚菌一級原種培養(yǎng)基過程中，將所述棉籽殼、雜木肩浸泡30-35小時(shí)，且每5小時(shí)換水一次，所述谷殼浸泡3-4小時(shí)，所述麩皮、玉米粉浸泡1-3小時(shí)。
[0012]基于上述，所述羊肚菌母種進(jìn)行二級培養(yǎng)的步驟包括:
將松針100-200g、金針菇100-200g和水1200ml-1800ml進(jìn)行混合、煮沸，冷卻、過濾處理，制得羊肚菌二級原種營養(yǎng)液，然后將小麥20-30g、玉米25-40g、谷殼15-25g、米糠15-25g、鹿糖l-5g、石膏l(xiāng)_5g、磷肥l_5g混合均勾制得羊肚菌二級原種培養(yǎng)基混合料，并加入到與所述羊肚菌二級原種培養(yǎng)基混合料等質(zhì)量的所述羊肚菌二級原種營養(yǎng)液中，混合均勻制得羊肚菌二級原種培養(yǎng)基；
將所述羊肚菌二級原種培養(yǎng)基進(jìn)行高溫滅菌、冷卻處理，然后將羊肚菌一級原種接入到所述羊肚菌二級原種培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，獲得羊肚菌二級原種。
[0013]基于上述，所述羊肚菌母種的培養(yǎng)方法包括如下步驟:
將土豆50-60g、瓊脂8-14g、維生素B劑0.5-0.8g及葡萄糖5_7g加入1500ml的水中進(jìn)行加熱，直至所述瓊脂全部煮化，得到羊肚菌母種培養(yǎng)基；對所述羊肚菌母種培養(yǎng)基進(jìn)行高溫滅菌、冷卻處理，然后將羊肚菌菌株菌絲接入到所述羊肚菌母種培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，獲得所述羊肚菌母種。
[0014]本發(fā)明相對現(xiàn)有技術(shù)具有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步，具體的說，
本發(fā)明所提供的羊肚菌液態(tài)菌種培養(yǎng)方法，在羊肚菌液態(tài)菌種培養(yǎng)的過程中，不需要對培養(yǎng)基進(jìn)行連續(xù)搖動(dòng)，只需每天對羊肚菌液態(tài)菌種培養(yǎng)基搖動(dòng)一次即可，降低了培養(yǎng)過程所利用的設(shè)備的利用率，從而降低了生產(chǎn)成本，而且該培養(yǎng)方法簡單、易于操作；每天采用定時(shí)搖動(dòng)保證了所述羊肚菌液態(tài)菌種菌絲營養(yǎng)液的均勻性。進(jìn)一步講，羊肚菌菌絲的生長以谷殼為載體，利用谷殼之間的間隙吸收營養(yǎng)，并附著在液態(tài)表面上的谷殼上進(jìn)行生長，無需額外向其培養(yǎng)基中通入無菌空氣，減少了繁雜的操作和許多昂貴的無菌設(shè)備，節(jié)約了成本并縮短了菌種的培育時(shí)間。
[0015]更進(jìn)一步講，本發(fā)明中所述羊肚菌液態(tài)菌種培養(yǎng)基的原料經(jīng)過煮汁后再使用，使得菌種培養(yǎng)基的養(yǎng)料分布比較均勻，有利于羊肚菌菌絲體吸收利用，產(chǎn)出的菌種整齊均勻。在菌種培育的各階段采用不同的培養(yǎng)基原料，使得不同培養(yǎng)階段的羊肚菌能夠?qū)ε囵B(yǎng)基中的營養(yǎng)成分充分吸收，達(dá)到最好的培育效果。
【附圖說明】
[0016]圖1是實(shí)施例1中的粗柄羊肚菌926號的生長曲線圖。
【具體實(shí)施方式】
[0017]下面通過【具體實(shí)施方式】，對本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步的詳細(xì)描述。
[0018]實(shí)施例1
本實(shí)施例提供一種羊肚菌液態(tài)菌種的培養(yǎng)方法，選用粗柄羊肚菌926號原種作為羊肚菌栽培種的菌株進(jìn)行培養(yǎng)，具體包括以下步驟:
將松樹枝200g、土豆200g和水1800ml混合、煮沸并保持30分鐘，然后冷卻至室溫，過濾后制得濾液；將蔗糖30g加入到所述濾液中并溶解制得羊肚菌液態(tài)菌種營養(yǎng)濾液，取所述羊肚菌液態(tài)菌種營養(yǎng)濾液150 ml置于培養(yǎng)瓶中，然后向所述培養(yǎng)瓶中加入洗凈烘干的谷殼20g和碳酸鈣5g，制得羊肚菌液態(tài)菌種培養(yǎng)基。
[0019]將所述羊肚菌液態(tài)菌種培養(yǎng)基放置于滅菌鍋中，在1.5 kg/cm3、110°C下滅菌0.5小時(shí)，取出冷卻至室溫后，將裝有所述羊肚菌液態(tài)菌種培養(yǎng)基的三角瓶置于接種箱中密封2小時(shí)，然后將粗柄羊肚菌926號原種接入到所述羊肚菌液態(tài)菌種培養(yǎng)基中，置于30°C的培養(yǎng)室中進(jìn)行密封培養(yǎng)，當(dāng)所述羊肚菌原種菌絲萌發(fā)后，每天上午10點(diǎn)整定時(shí)搖動(dòng)所述培養(yǎng)基I次至所述培養(yǎng)基中的谷殼完全被浸濕，直至獲得粗柄羊肚菌926號栽培種。
[0020]為了更好的了解不同時(shí)期羊肚菌菌絲體的生長情況，確定液態(tài)培養(yǎng)時(shí)間，在生長時(shí)間為0-144h范圍內(nèi)，利用專用的采樣器每12h進(jìn)行I次取樣，測定羊肚菌菌絲生物量。具體操作步驟為:羊肚菌菌種每階段培養(yǎng)結(jié)束后選用采樣器抽取所述三角瓶中適量的液體，以轉(zhuǎn)速為4000r/min速度離心15min，然后棄去清液，將得到的羊肚菌菌絲體用蒸餾水清洗數(shù)次后，置于真空干燥箱中，40°C下烘干至恒重，計(jì)算培養(yǎng)得到的羊肚菌菌絲生物量。每組進(jìn)行3次平行試驗(yàn)，所得數(shù)據(jù)取3次試驗(yàn)結(jié)果的平均值，以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，羊肚菌菌絲生物量為縱坐標(biāo)，繪制羊肚菌的生長曲線。
[0021]計(jì)算公式如下:
Y=M/V
式中:Y代表羊肚菌菌絲生物量，單位g/L ;
M代表菌絲體干燥后的質(zhì)量，單位g ；
V代表抽取液體的體積，單位L。
[0022]所得液態(tài)培養(yǎng)羊肚菌生長曲線如圖1所示，從圖中可以看出，液態(tài)培養(yǎng)羊肚菌生長曲線可以分為調(diào)整期、對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期這四個(gè)時(shí)期，所得的羊肚菌栽培種的羊肚菌菌絲生物量為13.95g/L，生產(chǎn)成本為0.326元/g ;平均生長速度為1.0 cm/d,長滿培養(yǎng)基時(shí)間為5天，且無雜菌生長；而靜置培養(yǎng)所得的羊肚菌栽培種菌絲生物量為9.241g/L。
[0023]分析認(rèn)為，在培養(yǎng)過程中，通過充分晃動(dòng)所述液態(tài)菌種培養(yǎng)基，使得所述液態(tài)菌種培養(yǎng)基中溶氧量顯著增加；另外，由于菌絲體依附于谷殼生長，晃動(dòng)使得營養(yǎng)成分更均勻，從而使羊肚菌菌絲體生長代謝旺盛，出產(chǎn)產(chǎn)量高。
[0024]實(shí)施例2
本實(shí)施例提供一種羊肚菌液態(tài)菌種的培養(yǎng)方法，選用粗柄羊肚菌926號原種作為羊肚菌栽培種的菌株進(jìn)行培養(yǎng)，具體培養(yǎng)步驟如下:將松樹枝300g、土豆400g和水1800ml混合、煮沸并保持30分鐘，然后冷卻至室溫，過濾后制得濾液；取新鮮的麥粒400g，在清水中浸泡12小時(shí)，室溫下讓其發(fā)芽，待其芽長約為麥粒的3倍時(shí)，取出在60-80°C下烘干，磨成麥芽粉，然后將所述麥芽粉加入所述濾液中，加入的所述濾液是所述麥芽粉的6倍，在50°C的條件下糖化6小時(shí)經(jīng)4層紗布過濾后制得羊肚菌液態(tài)菌種營養(yǎng)濾液；取所述羊肚菌液態(tài)菌種營養(yǎng)濾液150 ml置于培養(yǎng)瓶中，然后向所述培養(yǎng)瓶中加入洗凈烘干的谷殼20g和碳酸鈣5g，制得羊肚菌液態(tài)菌種培養(yǎng)基。
[0025]將所述羊肚菌液態(tài)菌種培養(yǎng)基放置于滅菌鍋中，在1.5 kg/cm3、110°C下滅菌0.5小時(shí)，取出冷卻至室溫后，將裝有所述羊肚菌液態(tài)菌種培養(yǎng)基的三角瓶置于接種箱中密封2小時(shí)，然后將粗柄羊肚菌926號原種接入到所述羊肚菌液態(tài)菌種培養(yǎng)基中，置于30°C的培養(yǎng)室中進(jìn)行密封培養(yǎng)，當(dāng)所述羊肚菌原種菌絲萌發(fā)后，每天上午10點(diǎn)整定時(shí)搖動(dòng)所述培養(yǎng)基I次至所述培養(yǎng)基中的谷殼完全被浸濕，直至獲得粗柄羊肚菌926號栽培種。
[0026]實(shí)驗(yàn)測得采用此液態(tài)菌種培養(yǎng)基培養(yǎng)出的粗