針刺對大鼠應(yīng)激致高血壓心血管變異性影響的實驗方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種針刺對大鼠應(yīng)激致高血壓心血管變異性影響的實驗方法，通過動物分假手術(shù)組、去卵巢組、去卵巢及電針組；每組再分為應(yīng)激與非應(yīng)激組。應(yīng)激最后兩周接受足底電擊結(jié)合電蟬聲的應(yīng)激處理，應(yīng)激完畢后股動脈插管，記錄心率、血壓，并進行心率變異性和壓力反射敏感性分析；得出應(yīng)激致高血壓的去卵巢大鼠經(jīng)過電針足三里穴可通過改善自主神經(jīng)功能和增加心血管系統(tǒng)對自主神經(jīng)調(diào)節(jié)的敏感性而發(fā)揮降壓作用。本發(fā)明為針刺治療高血壓的確切療效提供依據(jù)，在針刺治療高血壓及心血管疾病的機制研究找到一個新的突破口，應(yīng)激致高血壓的去卵巢大鼠經(jīng)過電針足三里穴可通過改善自主神經(jīng)功能和增加心血管系統(tǒng)對自主神經(jīng)調(diào)節(jié)的敏感性而發(fā)揮降壓作用。
【專利說明】針刺對大鼠應(yīng)激致高血壓心血管變異性影響的實驗方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于高血壓研究【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種針刺對大鼠應(yīng)激致高血壓心血管變異性影響的實驗方法。
【背景技術(shù)】
[0002]原發(fā)性高血壓(essentialhypertension, EH)是以血壓升高為主要臨床表現(xiàn)伴或不伴有多種危險因素的綜合征，通常簡稱為高血壓，又稱高血壓病。高血壓是常見的心血管疾病之一，也是我國歷史悠久、流行最廣、危害最重、隱蔽最深的一種心血管疾病，與人類死亡的主要疾病如冠心病、腦血管疾病等密切相關(guān)。
[0003]近年來臨床針刺治療高血壓病的研究不少，對針刺治療高血壓的療效也逐步得到肯定，但運用心血管變異性分析的研究不多，針刺對高血壓病人血壓波動性、壓力反射敏感性方面的國內(nèi)外研究甚少。
[0004]隨著我國居民生活水平的不斷提高，人們高血壓發(fā)病率越來越高，高血壓已經(jīng)成為中國人健康的“第一殺手”，而我國人群中高血壓發(fā)病率高、致殘率高、死亡率高,而知曉率低、治療率低、控制率低的現(xiàn)象，一旦確定為高血壓，藥物治療是高血壓治療的重要手段，許多病人將終身服用降壓藥。然而，長期服用降壓藥將會出現(xiàn)許多藥物不良反應(yīng):如利尿劑會出現(xiàn)低鉀、低氯、高糖、高尿酸(噻嗪類)、血鉀減低(袢利尿劑)和血鉀增高(保鉀利尿劑)等山受體阻滯劑會引起支氣管痙攣、心功能抑制等；鈣拮抗劑會引起體位性低血壓、心動過速、面紅心悸、心動過緩(維拉帕米)等；血管緊張素II受體拮抗劑(ARB)有可能會發(fā)生血鉀升高、血管性水腫(罕見)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明實施例的目的在于提供一種針刺對大鼠應(yīng)激致高血壓心血管變異性影響的實驗方法，旨在解決現(xiàn)有缺少針刺對高血壓病人血壓波動性、壓力反射敏感性方面研究的問題。
[0006]本發(fā)明實施例是這樣實現(xiàn)的，一種針刺對大鼠應(yīng)激致高血壓心血管變異性影響的實驗方法，該針刺對大鼠應(yīng)激致高血壓心血管變異性影響的實驗方法包括以下步驟:
[0007]步驟一，選擇健康雌性SD大鼠，4月齡，體重200~250g，實驗藥品采用戊巴比妥鈉；32號不銹鋼毫針電針、G6805-2型電針治療儀；
[0008]步驟二，將SD大鼠分成假手術(shù)組、去卵巢組、去卵巢后電針治療組三組，每組12只，各組動物均在35mg/kg戊巴比妥鈉腹腔麻醉下進行手術(shù)；
[0009]步驟三，去 卵巢組大鼠打開腹腔后切除雙側(cè)卵巢，假手術(shù)組僅切除Ig重的脂肪，術(shù)后兩周相應(yīng)實驗組大鼠接受電針治療，電針是采用兩根32號不銹鋼毫針，分別刺入大鼠足三里穴和以上1.5cm的肌肉內(nèi)，使用電針治療儀進行電針，電針儀輸出為等幅疏密波，每次刺激脈沖強度以局部肢體或肌肉輕微抽動即可；
[0010]步驟四，將假手術(shù)組、去卵巢組和去卵巢后電針治療再分成應(yīng)激組與非應(yīng)激組，術(shù)后第三、四周stress組大鼠進行應(yīng)激處理，每天2次，每次2小時足底電擊，并以電蟬聲刺激建立條件反射，一旦條件反射建立以后，可減少或不給足底電擊而僅以電蟬聲刺激處理；
[0011]步驟五,應(yīng)激處理后,在700mg烏拉坦和35mg/5ml氯醒糖混合劑腹腔麻醉下記錄心率和血壓。
[0012]進一步，在步驟三中，疏波頻率為4Hz，密波頻率為20Hz，脈沖寬度0.5ms,持續(xù)20mino
[0013]進一步，在步驟四中，電擊的電壓尾75~120V，持續(xù)時間50~100ms，間隔2~30s,由電腦程控隨機變動，結(jié)合8~98db電蟬聲的刺激。
[0014]進一步，該針刺對大鼠應(yīng)激致高血壓心血管變異性影響的實驗方法得到應(yīng)激致高血壓的去卵巢大鼠經(jīng)過電針足三里穴可通過改善自主神經(jīng)功能和增加心血管系統(tǒng)對自主神經(jīng)調(diào)節(jié)的敏感性而發(fā)揮降壓作用。
[0015]進一步，該針刺對大鼠應(yīng)激致高血壓心血管變異性影響的實驗方法的結(jié)果為去卵巢組大鼠在接受應(yīng)激刺激兩周后血壓明顯升高，心率加快；心率變異性:總變異性降低；高頻波段降低；低頻成分、低頻成分/高頻波段升高；壓力反射敏感性降低。
[0016]本發(fā)明提供 的針刺對大鼠應(yīng)激致高血壓心血管變異性影響的實驗方法，通過動物分假手術(shù)組、去卵巢組、去卵巢及電針組；每組再分為應(yīng)激與非應(yīng)激組。應(yīng)激最后兩周接受足底電擊結(jié)合電蟬聲的應(yīng)激處理，應(yīng)激完畢后股動脈插管，記錄心率、血壓，并進行心率變異性和壓力反射敏感性分析；得出應(yīng)激致高血壓的去卵巢大鼠經(jīng)過電針“足三里”穴可通過改善自主神經(jīng)功能和增加心血管系統(tǒng)對自主神經(jīng)調(diào)節(jié)的敏感性而發(fā)揮降壓作用。本發(fā)明通過對去卵巢大鼠在應(yīng)激狀態(tài)下血壓、心率變異性、壓力反射敏感性的改變及電針治療后影響的實驗，用心血管變異性的綜合指標(biāo)對針刺治療高血壓的臨床療效進行評估，為針刺治療高血壓的確切療效提供客觀依據(jù)，力求在針刺治療高血壓及心血管疾病的機制研究找到一個新的突破口。本發(fā)明通過去卵巢成年SD大鼠在應(yīng)激狀態(tài)下血壓、心率變異性、壓力反射敏感性的改變及電針治療后的影響，應(yīng)激致高血壓的去卵巢大鼠經(jīng)過電針“足三里”穴可通過改善自主神經(jīng)功能和增加心血管系統(tǒng)對自主神經(jīng)調(diào)節(jié)的敏感性而發(fā)揮降壓作用。
[0017]本發(fā)明提示電針可較好的逆轉(zhuǎn)慢性應(yīng)激致高血壓過程中的自主神經(jīng)功能紊亂，從而可防治應(yīng)激時自主神經(jīng)的損害；實驗結(jié)果提示電針可恢復(fù)雌激素缺乏動物在應(yīng)激時降低的壓力反射敏感性，從而最終達到降低血壓變異性，保護靶器官的目的。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0018]圖1是本發(fā)明實施例提供的針刺對大鼠應(yīng)激致高血壓心血管變異性影響的實驗方法流程圖。
【具體實施方式】
[0019]為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點更加清楚明白，以下結(jié)合實施例，對本發(fā)明進行進一步詳細說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0020]下面結(jié)合附圖及具體實施例對本發(fā)明的應(yīng)用原理作進一步描述。[0021]如圖1所示，本發(fā)明實施例的針刺對大鼠應(yīng)激致高血壓心血管變異性影響的實驗方法包括以下步驟:
[0022]SlOl:選擇健康雌性SD大鼠，4月齡，體重200~250g，實驗藥品采用戊巴比妥鈉；32號不銹鋼毫針電針、G6805-2型電針治療儀；
[0023]S102:將SD大鼠分成假手術(shù)組、去卵巢組、去卵巢后電針治療(去卵巢+電針)組三組，每組12只，各組動物均在戊巴比妥鈉(35mg/kg)腹腔麻醉下進行手術(shù)；
[0024]S103:去卵巢組大鼠打開腹腔后切除雙側(cè)卵巢，假手術(shù)組僅切除約Ig重的脂肪，術(shù)后兩周相應(yīng)實驗組大鼠接受電針治療，電針是采用兩根32號不銹鋼毫針，分別刺入大鼠“足三里”穴和以上1.5cm的肌肉內(nèi)，使用電針治療儀進行電針，電針儀輸出為等幅疏密波，疏波頻率為4Hz，密波頻率為20Hz，脈沖寬度0.5ms，持續(xù)20min，每次刺激脈沖強度以局部肢體或肌肉輕微抽動即可；[0025]S104:將假手術(shù)組、去卵巢組和去卵巢后電針治療再分成應(yīng)激組與非應(yīng)激組，術(shù)后第三、四周stress組大鼠進行應(yīng)激處理，每天2次，每次2小時足底電擊，電壓75~120V，持續(xù)時間50~100ms，間隔2~30s，由電腦程控隨機變動，結(jié)合電蟬聲(88~98db)的刺激，并以電蟬聲刺激建立條件反射，一旦條件反射建立以后，可適當(dāng)減少或不給足底電擊而僅以電蟬聲刺激處理；
[0026]S105:應(yīng)激處理后,在700mg烏拉坦和35mg/5ml氯醒糖混合劑腹腔麻醉下記錄心率和血壓。
[0027]結(jié)合以下的具體實施例和實驗結(jié)果對本發(fā)明的使用效果做進一步的說明:
[0028]實施例1:
[0029]動物分(I)假手術(shù)(sham)組；(2)去卵巢(OVX)組；(3)去卵巢(OVX) +電針(EA)組；每組再分為應(yīng)激(stress)與非應(yīng)激(withoutstress)組。stress組最后兩周接受足底電擊結(jié)合電蟬聲的應(yīng)激處理，應(yīng)激完畢后股動脈插管，記錄心率(HR)、血壓(BP)，并進行心率變異性(HRV)和壓力反射敏感性(BRS)分析。
[0030](I)實驗動物和材料實驗動物:健康雌性SD大鼠，4月齡，體重200~250g(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物研究所提供)；實驗藥品:戊巴比妥鈉；實驗主要儀器:電針(32號不銹鋼毫針)、電針治療儀(G6805-2型，上海醫(yī)療器械高技術(shù)公司)等
[0031](2)實驗方法將實驗動物分成假手術(shù)(sham)組、去卵巢(OVX)組、去卵巢后電針治療(去卵巢(OVX)+EA)組三組，每組12只。各組動物均在戊巴比妥鈉(35mg/kg)腹腔麻醉下進行手術(shù)。去卵巢(OVX)組大鼠打開腹腔后切除雙側(cè)卵巢，假手術(shù)組僅切除約Ig重的脂肪。術(shù)后兩周相應(yīng)實驗組大鼠接受電針治療，電針是采用兩根32號不銹鋼毫針，分別刺入大鼠“足三里”穴(在后肢膝關(guān)節(jié)外下方腓骨小頭下約5mm處)和以上1.5cm的肌肉內(nèi)。使用電針治療儀進行電針。電針儀輸出為等幅疏密波，疏波頻率為4Hz，密波頻率為20Hz，脈沖寬度0.5ms，持續(xù)20min，每次刺激脈沖強度以局部肢體或肌肉輕微抽動即可。上述各組再分成應(yīng)激組(stress)與非應(yīng)激組(withoutstress)組,術(shù)后第三、四周stress組大鼠進行應(yīng)激處理，每天2次，每次2小時足底電擊(電壓75~120V，持續(xù)時間50~100ms，間隔2~30s，由電腦程控隨機變動)結(jié)合電蟬聲(88~98db)的刺激，并以電蟬聲刺激建立條件反射，一旦條件反射建立以后，可適當(dāng)減少或不給足底電擊而僅以電蟬聲刺激處理。應(yīng)激處理后，在烏拉坦和氯醒糖(700mg和35mg/5ml, 1.p.)混合劑腹腔麻醉下記錄心率和血壓。
[0032]1、實驗EA對應(yīng)激大鼠SBP的影響
[0033]各組動物經(jīng)15天應(yīng)激處理后，股動脈插管法測得的收縮壓(SBP)變化，如下:sham+stress 組 SBP 升高(sham 組:119.5 ±8.3mmHg, sham+stress 組:148.1 ±9.4mmHg),與withoutstress組比較差異有顯著性(P ( 0.05),提示慢性應(yīng)急可引起SD大鼠高血壓；而去卵巢(OVX)+stress 組 SBP 升高更明顯(去卵巢(OVX):119.6±9.8mmHg, OVX+stress 組:162.8 ±10.0mmHg)，與sham+stress組比較差異有顯著性(P ( 0.05)，提示去卵巢(OVX)大鼠在應(yīng)急時產(chǎn)生的高血壓更嚴重；去卵巢(0VX)+EA+StreSS組血壓升高趨緩(去卵巢(OVX)+EA:117.5±6.ImmHg,去卵巢(0VX)+EA+stress 組 144.5土 12.2mmHg),回復(fù)到 sham+stress組水平(與去卵巢(0VX)+stress組比較差異有顯著性P 0.05,與sham+stress組比較差異無顯著性，P > 0.05)，提示電針(EA)可逆轉(zhuǎn)去卵巢(OVX)大鼠在應(yīng)急時高血壓的形成；
[0034]2、實驗電針(EA)對應(yīng)激大鼠心率變異性(HRV)、壓力反射敏感性(BRS)的影響
[0035]各組動物經(jīng)15天應(yīng)激處理后，心率變異性(HRV)、壓力反射敏感性(BRS)變化如下:與withoutstress組比較Sham+stress組總變異性(TV)降低、高頻波段(HF)降低、低頻成分(LF)升高、LF/HF升高、壓力反射敏感性(BRS)降低，各項指標(biāo)差異均有顯著性(P ( 0.05);而去卵巢(OVX) +stress組TV降低、HF降低、LF升高、LF/HF升高、BRS降低均更明顯，與Sham+stress組比較各項指標(biāo)差異均有顯著性(P ^ 0.05)，提示去卵巢(OVX)大鼠在應(yīng)激時心率變異性(HRV)、壓力反射敏感性(BRS)異常變化更顯著；0VX+EA+StreSS組TV降低、HF降低、LF升高、LF/HF升高、壓力反射敏感性(BRS)降低均趨緩，回復(fù)到sham+stress組水平(心率變異性(HRV)、壓力反射敏感性(BRS)各項指標(biāo)與OVX+stress組比較P < 0.05,差異有顯著性 ,與Sham+stress組比較P > 0.05,差異無顯著性),提不電針(EA)可逆轉(zhuǎn)；
[0036]實驗結(jié)果顯示，去卵巢(OVX)成年SD大鼠在應(yīng)激狀態(tài)下血壓(BP)、心率變異性(HRV)、壓力反射敏感性(BRS)均發(fā)生了明顯改變，提示慢性應(yīng)激刺激可引起大鼠血壓持續(xù)升高，從實驗中觀察到OVX+stress大鼠在慢性應(yīng)激過程中給予每天2次、每次20分鐘的電針“足三里”治療，可使血壓升高趨緩，回復(fù)到正常對照(sham+stress)組水平，提示電針(EA)可較好的逆轉(zhuǎn)去卵巢(OVX)大鼠在慢性應(yīng)激時血壓的過分升高，
[0037]心率變異性(HRV)能定量反映心臟自主神經(jīng)功能活性及調(diào)節(jié)功能，敏感性較高，可識別早期病變，HF的增高基本上反映了迷走神經(jīng)活動的波動性，LF/HF的增加則反映了自主神經(jīng)之間的平衡及交感活動成分的增高，從實驗中發(fā)現(xiàn)在慢性應(yīng)激時各應(yīng)激組大鼠TV、HF降低；LF、LF/HF升高，提示應(yīng)激致血壓升高與自主神經(jīng)功能紊亂，迷走神經(jīng)對心血管控制功能減弱，交感神經(jīng)活動相對增強有關(guān)，而OVX+stress大鼠TV、HF降低；LF、LF/HF升高更明顯，實驗研究發(fā)現(xiàn)OVX+stress大鼠在慢性應(yīng)激過程中給與每天電針“足三里”治療，提示電針(EA)可較好的逆轉(zhuǎn)慢性應(yīng)激致高血壓過程中的自主神經(jīng)功能紊亂，從而可防治應(yīng)激時自主神經(jīng)的損害，
[0038]壓力反射敏感性(BR S)在維持體內(nèi)平衡方面起著重要的作用，高血壓、急性心肌梗死、心衰和猝死等多種心血管疾病與壓力反射敏感性的改變有關(guān)，高血壓的壓力反射弧傳出神經(jīng)通路中的迷走神經(jīng)功能下降，而交感神經(jīng)功能相對增高，致使血管床的舒張-收縮平衡機制受到破壞，壓力反射敏感性(BRS)與心肌酶譜及射血分數(shù)等不相關(guān)，表明其獨立于其他臨床指標(biāo)，有獨立的預(yù)后價值，與心率變異性(HRV)相比壓力反射敏感性(BRS)著重提示在血壓改變時的反應(yīng)能力及迷走神經(jīng)的反射性能，在實驗中觀察到的在慢性應(yīng)激時各應(yīng)激組大鼠壓力反射敏感性(BRS)均降低，提示應(yīng)激性高血壓大鼠壓力感受性反射受損，而OVX+stress大鼠壓力反射敏感性(BRS)降低更明顯，經(jīng)電針“足三里”治療可回復(fù)到正常對照(sham+stress)組水平，說明電針“足三里”可較好的逆轉(zhuǎn)慢性應(yīng)激致高血壓過程中的壓力感受性反射受損，血壓變異性(bloodPressure variability, BPV)與祀器官損害(targetorgandamage, TOD)顯著相關(guān),且是其獨立的決定因素,血壓變異性(BPV)越大的患者靶器官損害越重，丹宇等研究發(fā)現(xiàn)針刺治療可恢復(fù)高血壓患者血壓的晝夜節(jié)律性，實驗結(jié)果提示電針(EA)可恢復(fù)雌激素缺乏動物在應(yīng)激時降低的壓力反射敏感性，從而最終達到降低血壓變異性(BPV)，保護靶器官的目的，由于高血壓病的發(fā)病機理十分復(fù)雜，心率變異性及壓力反射敏感性僅是其中的兩個方面，要全面弄清針刺降壓機理尚需作進一步研究。[0039]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種針刺對大鼠應(yīng)激致高血壓心血管變異性影響的實驗方法，其特征在于，該針刺對大鼠應(yīng)激致高血壓心血管變異性影響的實驗方法包括以下步驟: 步驟一，選擇健康雌性SD大鼠，4月齡，體重200~250g，實驗藥品采用戊巴比妥鈉；32號不銹鋼毫針電針、G6805-2型電針治療儀； 步驟二，將SD大鼠分成假手術(shù)組、去卵巢組、去卵巢后電針治療組三組，每組12只，各組動物均在35mg/kg戊巴比妥鈉腹腔麻醉下進行手術(shù)； 步驟三，去卵巢組大鼠打開腹腔后切除雙側(cè)卵巢，假手術(shù)組僅切除Ig重的脂肪，術(shù)后兩周相應(yīng)實驗組大鼠接受電針治療，電針是采用兩根32號不銹鋼毫針，分別刺入大鼠足三里穴和以上1.5cm的肌肉內(nèi)，使用電針治療儀進行電針，電針儀輸出為等幅疏密波，每次刺激脈沖強度以局部肢體或肌肉輕微抽動即可； 步驟四，將假手術(shù)組、去卵巢組和去卵巢后電針治療再分成應(yīng)激組與非應(yīng)激組，術(shù)后第三、四周stress組大鼠進行應(yīng)激處理，每天2次，每次2小時足底電擊，并以電蟬聲刺激建立條件反射，一旦條件反射建立以后，可減少或不給足底電擊而僅以電蟬聲刺激處理； 步驟五，應(yīng)激處理后，在700mg烏拉坦和35mg/5ml氯醒糖混合劑腹腔麻醉下記錄心率和血壓。
2.如權(quán)利要求1所述的針刺對大鼠應(yīng)激致高血壓心血管變異性影響的實驗方法，其特征在于，在步驟三中，疏波頻率為4Hz，密波頻率為20Hz，脈沖寬度0.5ms，持續(xù)20min。
3.如權(quán)利要求1所述的針刺對大鼠應(yīng)激致高血壓心血管變異性影響的實驗方法，其特征在于，在步驟四中，電擊的電壓尾75~120V，持續(xù)時間50~100ms，間隔2~30s，由電腦程控隨機變動，結(jié)合8~98db電蟬聲的刺激。
4.如權(quán)利要求1所述的針刺對大鼠應(yīng)激致高血壓心血管變異性影響的實驗方法，其特征在于，該針刺對大鼠應(yīng)激致高血壓心血管變異性影響的實驗方法得到應(yīng)激致高血壓的去卵巢大鼠經(jīng)過電針足三里穴可通過改善自主神經(jīng)功能和增加心血管系統(tǒng)對自主神經(jīng)調(diào)節(jié)的敏感性而發(fā)揮降壓作用。
5.如權(quán)利要求1所述的針刺對大鼠應(yīng)激致高血壓心血管變異性影響的實驗方法，其特征在于，該針刺對大鼠應(yīng)激致高血壓心血管變異性影響的實驗方法的結(jié)果為去卵巢組大鼠在接受應(yīng)激刺激兩周后血壓明顯升高，心率加快；心率變異性:總變異性降低；高頻波段降低；低頻成分、低頻成分/高頻波段升高；壓力反射敏感性降低。
【文檔編號】A61D1/00GK103876853SQ201410104327
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2014年3月20日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月20日
【發(fā)明者】沈志坤, 朱敏禮 申請人:湖州師范學(xué)院