一種漏斗泡囊草懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明研究了一種漏斗泡囊草懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的快速繁殖方法，包括無菌外植體的獲得、愈傷組織的誘導(dǎo)、懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)等步驟，本發(fā)明方法所制備的漏斗泡囊草愈傷組織穩(wěn)定、均一、分散性好，懸浮細(xì)胞生長良好、增殖速率快，為其藥用資源的開發(fā)和利用提供技術(shù)基礎(chǔ)。
【專利說明】 一種漏斗泡囊草懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的快速繁殖方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及漏斗泡囊草懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的快繁方法，屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002]漏斗泡囊草，PHysochlainain fundi bulari s Kuang,爺科，多年生草本，高20-60cm,根圓錐狀，肉質(zhì)，莖單一或分枝，被白色長柔毛，葉互生，草質(zhì)，心形、戟形，長5-9cm,寬4-9cm，葉柄長4-llcm。頂生傘房或聚傘花序；花萼筒狀鐘形；花冠漏斗狀，黃色。蒴果近球形，被漏斗狀的宿萼包圍；種子腎形，淡黃色，花期3-4月，果期4-6月。產(chǎn)陜西秦嶺中部到東部、河南西部和南部、山西南部，生于山谷或林下。提取莨菪烷類生物堿的資源植物，地上部分含莨菪堿，根含莨菪堿、東莨菪堿和山莨菪堿，漏斗泡囊草目前尚無人工栽培的研究。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是漏斗泡囊草懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的繁殖方法，本發(fā)明方法所制備的漏斗泡囊草愈傷組織穩(wěn)定、均一、分散性好，懸浮細(xì)胞生長良好、增殖速率快，為其藥用資源的開發(fā)和利用提供技術(shù)基礎(chǔ)。
[0004]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用下列技術(shù)方案:
取漏斗泡囊草的幼嫩葉片，干凈紗布清洗，在洗衣粉中浸泡2min，流水沖洗20min，超凈工作臺上0.2%氯化萊處理8min,流水沖洗5次,2mg/L泰樂菌素中浸泡1min,消毒處理過的葉片接入TR+IBA0.3mg/L+6-BA5mg/L培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，附加7g/L瓊脂，30g/L蔗糖，溫度25 0C，誘導(dǎo)出來的愈傷組織高溫50 °C熱處理5min，接入培養(yǎng)基TR+ZT0.1-0.15Mmol/L+酪蛋白水解氨基酸0.25-0.3g/L中，附加45g/L蔗糖進(jìn)行懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)，接種量為1:4，振幅4cm，震動頻率120r/min，光照45001x，光照時間13h/d，溫度250C，懸浮培養(yǎng)出來的愈傷組織放于液氮_196°C中保存。
[0005]采用本發(fā)明制備的漏斗泡囊草細(xì)胞增殖率高，周期短，產(chǎn)量大，污染小，利于大規(guī)模種植。
[0006]下面將結(jié)合【具體實施方式】對本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但本發(fā)明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。

【具體實施方式】
[0007]實施例1
取漏斗泡囊草的幼嫩葉片，干凈紗布清洗，在洗衣粉中浸泡2min，流水沖洗20min，超凈工作臺上0.2%氯化萊處理8min,流水沖洗5次,2mg/L泰樂菌素中浸泡1min,消毒處理過的葉片接入TR+IBA0.3mg/L+6-BA5mg/L培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，附加7g/L瓊脂，30g/L蔗糖，溫度25 0C，誘導(dǎo)出來的愈傷組織高溫50 °C熱處理5min，接入培養(yǎng)基TR+ZT0.lMmol/L+酪蛋白水解氨基酸0.25g/L中，附加45g/L蔗糖進(jìn)行懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)，接種量為1: 4，振幅4cm，震動頻率120r/min，光照45001x，光照時間13h/d，溫度25°C，懸浮培養(yǎng)出來的愈傷組織放于液氮_196°C中保存，懸浮細(xì)胞增長率55%。
[0008]實施例2
取漏斗泡囊草的幼嫩葉片，干凈紗布清洗，在洗衣粉中浸泡2min，流水沖洗20min，超凈工作臺上0.2%氯化萊處理8min,流水沖洗5次,2mg/L泰樂菌素中浸泡1min,消毒處理過的葉片接入TR+IBA0.3mg/L+6-BA5mg/L培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，附加7g/L瓊脂，30g/L蔗糖，溫度25 0C，誘導(dǎo)出來的愈傷組織高溫50 °C熱處理5min，接入培養(yǎng)基TR+ZT0.15Mmol/L+酪蛋白水解氨基酸0.3g/L中，附加45g/L蔗糖進(jìn)行懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)，接種量為1:4，振幅4cm，震動頻率120r/min，光照45001x，光照時間13h/d，溫度25°C，懸浮培養(yǎng)出來的愈傷組織放于液氮_196°C中保存，懸浮細(xì)胞增長率60%。
[0009]實施例3
取漏斗泡囊草的幼嫩葉片，干凈紗布清洗，在洗衣粉中浸泡2min，流水沖洗20min，超凈工作臺上0.2%氯化萊處理8min,流水沖洗5次,2mg/L泰樂菌素中浸泡1min,消毒處理過的葉片接入TR+IBA0.3mg/L+6-BA5mg/L培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，附加7g/L瓊脂，30g/L蔗糖，溫度25 0C，誘導(dǎo)出來的愈傷組織高溫50 °C熱處理5min，接入培養(yǎng)基TR+ZT0.15Mmol/L+酪蛋白水解氨基酸0.25g/L中，附加45g/L蔗糖進(jìn)行懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)，接種量為1:4，振幅4cm，震動頻率120r/min，光照45001x，光照時間13h/d，溫度25°C，懸浮培養(yǎng)出來的愈傷組織放于液氮_196°C中保存，懸浮細(xì)胞增長率62%。
【權(quán)利要求】
1.一種漏斗泡囊草懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的快速繁殖方法，包括無菌外植體的獲得、愈傷組織的誘導(dǎo)、懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)，其主要步驟如下: (1)取漏斗泡囊草的幼嫩葉片，進(jìn)行消毒處理； (2)取步驟(I)消毒處理過的葉片接入TR+IBA0.3mg/L+6-BA5mg/L培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，附加7g/L瓊脂，30g/L蔗糖，溫度25°C ； (3)取步驟(2)誘導(dǎo)出來的愈傷組織高溫50°C熱處理5min，接入培養(yǎng)基TR+ZT0.1-0.15Mmol/L+酪蛋白水解氨基酸0.25-0.3g/L中，附加45g/L蔗糖進(jìn)行懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)，接種量為1:4，振幅4cm，震動頻率120r/min，光照45001x，光照時間13h/d，溫度250C，懸浮培養(yǎng)出來的愈傷組織放于液氮_196°C中保存。
2.按照權(quán)利要求1所述的一種漏斗泡囊草懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(I)中所述漏斗泡囊草無菌葉片的獲得為，取漏斗泡囊草葉片，干凈紗布清洗，在洗衣粉中浸泡2min,流水沖洗20min,超凈工作臺上0.2%氯化萊處理8min,流水沖洗5次，2mg/L泰樂菌素中浸泡lOmin。
【文檔編號】A01H4/00GK104221869SQ201410540401
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年10月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月14日
【發(fā)明者】劉東鋒, 楊成東 申請人:南京帝道農(nóng)業(yè)科技有限公司