冬蟲夏草菌種孢子分離提純復(fù)壯方法
【專利摘要】本發(fā)明一種冬蟲夏草菌種孢子分離提純復(fù)壯方法，包括如下步驟：1)配制固體培養(yǎng)基：先將100-140g土豆煮熟，過濾，加入葡萄糖10-14g、牛肉膏4-6g、KH2PO40.4-0.6g、MgSO40.2-0.3g、瓊脂8-12g，加熱煮沸讓瓊脂完全融化，加蒸餾水，高壓蒸汽滅菌，裝制斜面；2)選擇孢子快成熟的冬蟲夏草菌種，用0.1％升汞液消毒，無菌水清洗；3)在試管塞下端錘入一個(gè)小鉤，無菌條件下切取菌種子座倒掛于小鉤上，將試管塞塞入斜面試管；4)將斜面試管避光22-24℃培養(yǎng)3-4天，再20-22℃培養(yǎng)4-5天，然后18～22℃自然光照培養(yǎng)24小時(shí)，選擇無雜菌，菌絲發(fā)達(dá)，顏色鮮黃的菌株，即得。
【專利說明】 冬蟲夏草菌種孢子分離提純復(fù)壯方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物領(lǐng)域，涉及一種冬蟲夏草菌種孢子分離提純復(fù)壯方法。

【背景技術(shù)】
[0002]冬蟲夏草是麥角科蟲草菌寄生于蝙蝠蛾幼蟲體上的子座與幼蟲體的復(fù)合物。有野生和人工培植兩種。對人體發(fā)揮作用的有效成分是蟲草素、蟲草酸、蟲草多糖、超氧化物歧化酶。有補(bǔ)腎益肺，止血化痰，抗癌，提高免疫力，抗疲勞，保護(hù)肺、腎、肝等多種功能。深受廣大人群歡迎，稱為保健品中的軟黃金。
[0003]冬蟲夏草野生菌的分離和人工培植蟲草幾代后品種容易出現(xiàn)退化，需進(jìn)行提純復(fù)壯，但是用子實(shí)體分離，消毒很困難，往往也將菌絲殺死或不能完全清除雜菌，用孢子分離又因孢子難以獲得，很難實(shí)現(xiàn)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種低成本、高產(chǎn)出、能夠培養(yǎng)出高活性的冬蟲夏草菌種孢子的分離提純復(fù)壯方法。
[0005]本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的:一種冬蟲夏草菌種孢子分離提純復(fù)壯方法，包括如下步驟:
[0006]2)配制固體培養(yǎng)基:配方為:土豆100_140g、葡萄糖10_14g、牛肉膏4_6g、ΚΗ2Ρ040.4-0.6g、MgS04 0.2-0.3g、瓊脂8_12g ;先將土豆煮熟，過濾，加入葡萄糖、牛肉膏、ΚΗ2Ρ04、MgS04、瓊脂，加熱煮沸讓瓊脂完全融化，加蒸餾水，高壓蒸汽滅菌，裝制斜面，待用；
[0007]2)選擇孢子快成熟的冬蟲夏草菌種，用0.1%升汞液對菌種蟲體部進(jìn)行表面消毒，然后連同子座用無菌水清洗；
[0008]3)在試管塞下端錘入一個(gè)小鉤，在無菌條件下切取冬蟲夏草菌種子座，在無菌條件下將子座下端倒掛于試管塞的小鉤上，使子座尖端部向下，將掛好子座的試管塞塞入步驟1中待用的斜面試管；
[0009]4)將步驟3中的斜面試管避光22-24°C培養(yǎng)3-4天，再在20_22°C培養(yǎng)4-5天，去除有雜菌生長的試管，然后在18?22°C自然光照培養(yǎng)24小時(shí)，選擇無雜菌，菌絲發(fā)達(dá)，顏色鮮黃的菌株，即得。
[0010]所述冬蟲夏草菌種為野生菌種或者人工培植蟲草。
[0011]所述蟲夏草野生菌種在西藏那曲或者青海玉樹采集。
[0012]本發(fā)明的有益效果是:提供了一種低成本、高產(chǎn)出、能夠培養(yǎng)出高活性的冬蟲夏草菌種孢子的分離提純復(fù)壯方法。得到的孢子大、活力高、抗雜菌力強(qiáng)，可用作擴(kuò)大生產(chǎn)菌種，成功地實(shí)現(xiàn)了冬蟲夏草菌種孢子分離提純復(fù)壯。

【具體實(shí)施方式】
[0013]實(shí)施例1對冬蟲夏草野生菌種孢子分離提純復(fù)壯
[0014]對冬蟲夏草野生菌種孢子分離提純復(fù)壯，按照如下步驟操作:
[0015]1)配制固體培養(yǎng)基:配方為:土豆120g、葡萄糖12g、牛肉膏5g、KH2P040.5g、MgS040.25g、瓊脂10g ;先將土豆煮熟，過濾，加入葡萄糖、牛肉膏、KH2P04、MgS04、瓊脂，加熱煮沸讓瓊脂完全融化，加蒸餾水至500ml，高壓蒸汽下菌120°C，30min，攪拌均勻裝制斜面，待用；
[0016]2)選擇孢子快成熟的冬蟲夏草野生菌種，冬蟲夏草野生菌種采集應(yīng)在5月左右，優(yōu)選西藏那曲、青海玉樹等地采集，選擇子座粗壯發(fā)達(dá)，快形成孢子的新鮮野生種；用0.1%升汞液對菌種蟲體部進(jìn)行表面消毒，然后連同子座用無菌水清洗；
[0017]3)在試管塞子下端中央錘入一個(gè)不銹鋼小魚鉤，露出小鉤。在無菌條件下切取冬蟲夏草菌種子座，在無菌條件下將子座下端倒掛于試管塞的小鉤上，使子座尖端部向下，將掛好子座的試管塞塞入步驟1中待用的斜面試管；使子座尖端部向下，將掛好子座的塞子塞入試管或三角瓶，子座不要與玻璃接觸，子座尖部對準(zhǔn)試管里培養(yǎng)基斜面中部為好。
[0018]4)將步驟3中的斜面試管避光24°C培養(yǎng)4天，再在20°C培養(yǎng)4天，去除有雜菌生長的試管，然后在18?22°C自然光照培養(yǎng)24小時(shí)，選擇無雜菌，菌絲發(fā)達(dá)，顏色鮮黃的菌株，即得。
[0019]實(shí)施例2對人工培植的冬蟲夏草菌種孢子分離提純復(fù)壯
[0020]對人工培植的冬蟲夏草菌種孢子分離提純復(fù)壯，按照如下步驟操作:
[0021]1)配制固體培養(yǎng)基:配方為:土豆130g、葡萄糖13g、牛肉膏6g、KH2P040.6g、MgS040.3g、瓊脂llg ;先將土豆煮熟，過濾，加入葡萄糖、牛肉膏、KH2P04、MgS04、瓊脂，加熱煮沸讓瓊脂完全融化，加蒸餾水至500ml，高壓蒸汽下菌120°C，30min，攪拌均勻裝制斜面，待用；
[0022]2)選擇子座密集、粗壯發(fā)達(dá)、尖端快膨大，顏色鮮艷孢子快成熟的人工培植的冬蟲夏草菌種，用0.1%升汞液對菌種蟲體部進(jìn)行表面消毒，然后連同子座用無菌水清洗；
[0023]3)在試管塞子下端中央錘入一個(gè)不銹鋼小魚鉤，露出小鉤。在無菌條件下切取冬蟲夏草菌種子座，在無菌條件下將子座下端倒掛于試管塞的小鉤上，使子座尖端部向下，將掛好子座的試管塞塞入步驟1中待用的斜面試管；使子座尖端部向下，將掛好子座的塞子塞入試管或三角瓶，子座不要與玻璃接觸，子座尖部對準(zhǔn)試管里培養(yǎng)基斜面中部為好。
[0024]4)將步驟3中的斜面試管避光24°C培養(yǎng)3天，再在22°C培養(yǎng)5天，去除有雜菌生長的試管，然后在18?22°C自然光照培養(yǎng)24小時(shí)，選擇無雜菌，菌絲發(fā)達(dá)，顏色鮮黃的菌株，即得。
【權(quán)利要求】
1.一種冬蟲夏草菌種孢子分離提純復(fù)壯方法，其特征在于，包括如下步驟: 1)配制固體培養(yǎng)基:配方為:土豆100-140g、葡萄糖10-14g、牛肉膏4-6g、KH2PO40.4-0.6g、MgSO4 0.2-0.3g、瓊脂8_12g ;先將土豆煮熟，過濾，加入葡萄糖、牛肉膏、KH2PO4,MgSO4、瓊脂，加熱煮沸讓瓊脂完全融化，加蒸餾水，高壓蒸汽滅菌，裝制斜面，待用； 2)選擇孢子快成熟的冬蟲夏草菌種，用0.1 %升汞液對菌種蟲體部進(jìn)行表面消毒，然后連同子座用無菌水清洗； 3)在試管塞下端錘入一個(gè)小鉤，在無菌條件下切取冬蟲夏草菌種子座、將子座下端倒掛于試管塞的小鉤上，使子座尖端部向下，將掛好子座的試管塞塞入步驟I中待用的斜面試管； 4)將步驟3中的斜面試管避光22-24°C培養(yǎng)3-4天，再在20_22°C培養(yǎng)4_5天，去除有雜菌生長的試管，然后在18?22°C自然光照培養(yǎng)24小時(shí)，選擇無雜菌，菌絲發(fā)達(dá)，顏色鮮黃的菌株，即得。
2.如權(quán)利要求1所述的冬蟲夏草菌種孢子分離提純復(fù)壯方法，其特征在于，所述冬蟲夏草菌種為野生菌種或者人工培植蟲草。
3.如權(quán)利要求1所述的冬蟲夏草菌種孢子分離提純復(fù)壯方法，其特征在于，所述蟲夏草野生菌種在西藏那曲或者青海玉樹采集。
【文檔編號】A01G1/04GK104396572SQ201410777023
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年12月15日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月15日
【發(fā)明者】梁金權(quán) 申請人:重慶綜藝制藥有限公司