本發(fā)明屬于生物農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種生物殺線劑組合物及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
植物根結(jié)線蟲(Meloidogyne spp.)是一類世界性分布的重要植物病原物，其寄生范圍廣，環(huán)境適應(yīng)性強，可危害蔬菜、糧食、煙草、花生、果樹、觀賞植物以及中草藥等2000多種植物，尤其以番茄、黃瓜等大棚蔬菜作物受損嚴(yán)重。目前，全世界已經(jīng)發(fā)現(xiàn)報道的根結(jié)線蟲有100多種，我國以南方根結(jié)線蟲(M.incognita)、爪哇根結(jié)線蟲(M.javanica)、象耳豆根結(jié)線蟲(M.enterolobii)、花生根結(jié)線蟲(M.arenaria)、北方根結(jié)線蟲(M.hapla)等發(fā)生危害較為嚴(yán)重，平均產(chǎn)量損失達20-30％，嚴(yán)重的可達70％，甚至絕產(chǎn)。作物根結(jié)線蟲已成為保護地蔬菜發(fā)展的主要限制因素。
植物根結(jié)線蟲危害日趨嚴(yán)重，但缺少合適的生防制劑。植物根結(jié)線蟲的主要生防因子有捕食性和寄生性生物兩大類,其中研究最多的是捕食線蟲真菌、內(nèi)寄生真菌以及內(nèi)寄生細菌。真菌或細菌的次生代謝產(chǎn)物作為第二代線蟲生防因子，具有作用快、環(huán)境相容性好、不易造成二次污染等優(yōu)點，已成為國內(nèi)外研究的熱門領(lǐng)域。盡管已經(jīng)報道的真菌或細菌殺線蟲活性代謝物很多，但作為生物農(nóng)藥登記、用于防治植物線蟲病害的極少，目前在生產(chǎn)上使用較多的有淡紫擬青霉、蠟樣芽孢桿菌等，但這些生物殺線蟲劑單獨使用時用量大、效果不佳，且對線蟲的防治效果受土壤環(huán)境因素影響較大。因此，需要開發(fā)作用效果穩(wěn)定、防治效果較好的生物防治制劑。
總狀共頭霉真菌(Syncephalastrum racemosum)Sr18是天津師范大學(xué)從土壤分離的線蟲生防真菌，其發(fā)酵液對植物根結(jié)線蟲、大豆孢囊線蟲和松材線蟲等均具有較好的防治效果，處理48小時后線蟲死亡率在85％以上，已在生產(chǎn)上應(yīng)用于防治黃瓜、番茄、芹菜、辣椒等作物根結(jié)線蟲，但單獨使用總狀共頭霉真菌Sr18發(fā)酵液防治根結(jié)線蟲時用量較大。
阿維菌素是由鏈霉菌中阿維鏈霉菌Streptomyces avermitilis發(fā)酵產(chǎn)生的一類十六元大環(huán)內(nèi)酯化合物，具有殺菌、殺蟲、殺螨、殺線蟲活性。在生產(chǎn)上用于防治線蟲的主要有阿維菌素乳油、阿維菌素顆粒劑等，也有阿維菌素與噻唑膦、毒死蜱等混用的產(chǎn)品，但未見阿維菌素與生防制劑混合使用的組合。長期單一使用阿維菌素防治線蟲，易使線蟲產(chǎn)生抗藥性。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明針對目前蔬菜、瓜果等作物中易發(fā)生根結(jié)線蟲危害、且難以治理的問題，提出一種生物殺線劑組合物。
本發(fā)明的目的還在于提供一種生物殺線劑組合物的應(yīng)用。
一種生物殺線劑，由總狀共頭霉Sr18發(fā)酵液和阿維菌素乳油混合而成，所述總狀共頭霉Sr18發(fā)酵液的干物質(zhì)含量為5.0-6.0g/L，阿維菌素乳油為1.5-2.0％阿維菌素乳油，所述總狀共頭霉Sr18發(fā)酵液與阿維菌素乳油的體積比為4:3～6:1。
所述總狀共頭霉Sr18的發(fā)酵培養(yǎng)基為30％馬鈴薯浸汁+2％蔗糖+0.2％進口麥芽精。
所述總狀共頭霉Sr18發(fā)酵液為濃縮水劑，其干物質(zhì)含量為5.4g/L，阿維菌素乳油為1.8％阿維菌素乳油，所述總狀共頭霉Sr18發(fā)酵液與阿維菌素乳油的體積比為4:3～5:2。
上述生物殺線劑防治作物根結(jié)線蟲中的應(yīng)用。
所述的線蟲為作物根結(jié)線蟲。
所述的作物為黃瓜、番茄、辣椒、馬鈴薯。
所述的應(yīng)用是將生物殺線劑噴施至作物土壤中。
上述生物殺線劑的用量為7ml/m2。
作物移栽前噴施，將土壤深翻20-30cm后起壟，移栽前2天，將生物殺線劑組合物用水稀釋20倍，均勻澆灌于壟上。
本申請的生物殺線劑組合可以達到以下效果：(1)組合物表現(xiàn)出較好的增效作用，組合物的殺線蟲效果比單劑均有明顯提高，同時降低了殺線劑的使用劑量，減少了對環(huán)境的不良影響；(2)本發(fā)明組合物能促進作物生長，增加作物產(chǎn)量。
具體實施方式：
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步的說明。
實施例1生物殺線劑的配置
1)、制備總狀共頭霉Sr18發(fā)酵液：Sr18菌種(可以對公眾發(fā)放)活化后，將孢子懸浮液(孢子濃度為107個/L)接入裝有22L培養(yǎng)基的種子罐中，26℃培養(yǎng)24h，作為一級種子。以4％接種量將一級種子接入裝有150L發(fā)酵培養(yǎng)基的200L發(fā)酵罐中進行發(fā)酵，發(fā)酵條件為：攪拌轉(zhuǎn)速198r/min，罐壓0.05MPa，通氣量以維持溶氧水平為20％為原則，發(fā)酵時間40h。所述的發(fā)酵培養(yǎng)基(w/w)為：30％馬鈴薯浸汁+2％蔗糖+0.2％進口麥芽精。發(fā)酵結(jié)束后，發(fā)酵醪液采用板框過濾去除菌體，所得濾液在70℃條件下進行真空濃縮，制備成8倍重量濃縮水劑。
2)、阿維菌素乳油，自北京中農(nóng)大生物技術(shù)股份有限公司購買，有效成分含量為1.8％，劑型為乳油。
3)、配置生物殺線劑組合。將總狀共頭霉Sr18發(fā)酵液與阿維菌素乳油兩種生物殺線劑按比例混勻，用清水稀釋20倍后備用。
實施例2生物殺線劑的應(yīng)用方法
按照以下步驟進行：
(1)將土壤深翻20-30cm后起壟；
(2)移栽前2天，將已經(jīng)用水稀釋20倍的生物殺線劑稀釋液，均勻澆灌于壟上。
(3)對長季節(jié)蔬菜，在種植中期，增加1次用藥，方法同上。
(4)用藥后45-60天，調(diào)查對線蟲的控制效果。
線蟲分離及危害程度評價方法為：
土壤根結(jié)線蟲分離，采用淺盤法；
根系中侵入線蟲數(shù)量觀察，采用酸性品紅染色法；
根系危害程度評價，采用根結(jié)指數(shù)法；
根結(jié)線蟲防治效果的計算方法：
土壤線蟲死亡率計算方法為：死亡率(％)＝(對照區(qū)線蟲增長率-處理區(qū)線蟲增長率)×100/(1-對照區(qū)線蟲增長率)。
根系中侵入線蟲的減退率計算方法為：減退率(％)＝(對照區(qū)侵入線蟲數(shù)-處理區(qū)侵入線蟲數(shù))×100/對照區(qū)侵入線蟲數(shù)。
根系危害程度評價計算方法為：
根結(jié)線蟲分級標(biāo)準(zhǔn)為：
0級，無根結(jié)，根系(塊莖)健康；
1級，僅有少量根結(jié),根結(jié)占全根系(塊莖)的10％以下；
3級，根結(jié)明顯，根結(jié)占全根系(塊莖)的11-25％
5級，根結(jié)特別明顯，根結(jié)占全根系(塊莖)的26-50％；
7級，根結(jié)數(shù)量很多，占全根系(塊莖)的51-75％；
9級，根結(jié)數(shù)量特多，占全根系(塊莖)的75％以上。
根結(jié)指數(shù)計算方法為：
防治效果計算方法為：
組合物田間防治試驗1
防治對象：黃瓜南方根結(jié)線蟲。試驗點：天津市寶坻區(qū)。在施藥前旋耕土壤，按照試驗小區(qū)面積劃分小區(qū)后起壟，按照使用劑量分裝藥劑(表1)，加適量清水稀釋20倍后，通過噴霧器均勻施藥，施藥后2天進行移栽。施藥后50天調(diào)查發(fā)現(xiàn)，組合物可降低土壤線蟲數(shù)量90.7％，減少根系中侵入線蟲數(shù)量86.7％，根結(jié)指數(shù)防治效果達74.3％，增加黃瓜產(chǎn)量44.1％，綜合評價，高于總狀共頭霉Sr18發(fā)酵液和阿維菌素乳油單獨使用時的效果，且可降低阿維菌素用量33.3％。
表1生物殺線劑組合物對黃瓜根結(jié)線蟲的防治效果
組合物田間防治試驗2
防治對象：番茄南方根結(jié)線蟲。試驗點：北京市大興區(qū)。在施藥前旋耕土壤，按照試驗小區(qū)面積劃分小區(qū)后起壟，按照使用劑量分裝藥劑(表2)，加適量清水稀釋20倍后，通過噴霧器均勻施藥，施藥后2天進行移栽。施藥后60天調(diào)查發(fā)現(xiàn)，組合物可降低土壤線蟲數(shù)量77.5％，減少根系中侵入線蟲數(shù)量73.7％，根結(jié)指數(shù)防治效果達68.1％，增加黃瓜產(chǎn)量33.9％，綜合評價，高于總狀共頭霉Sr18發(fā)酵液和阿維菌素乳油單獨使用時的效果，且可降低阿維菌素用量50％。
表2生物殺線劑組合物對番茄根結(jié)線蟲的防治效果
組合物田間防治試驗3
防治對象：辣椒象耳豆根結(jié)線蟲。試驗點：海南省海口市。在施藥前旋耕土壤，按照試驗小區(qū)面積劃分小區(qū)后起壟，按照使用劑量分裝藥劑(表3)，加適量清水稀釋20倍后，通過噴霧器均勻施藥，施藥后2天進行移栽。施藥后70天調(diào)查發(fā)現(xiàn)，組合物可降低土壤線蟲數(shù)量72.5％，減少根系中侵入線蟲數(shù)量48.2％，根結(jié)指數(shù)防治效果達57.3％，增加黃瓜產(chǎn)量31.3％，高于總狀共頭霉Sr18發(fā)酵液與阿維菌素單獨使用時的效果，且可降低阿維菌素用量16.7％。
表3生物殺線劑組合物對辣椒根結(jié)線蟲的防治效果
組合物田間防治試驗4
防治對象：馬鈴薯爪哇根結(jié)線蟲。試驗點：廣東省湛江市。在施藥前翻耕土壤，按照試驗小區(qū)面積劃分小區(qū)后起壟、覆膜，按照使用劑量分裝藥劑，加適量清水稀釋20倍后，通過手持式噴壺均勻澆灌，2天后進行移植。施藥后60天調(diào)查發(fā)現(xiàn)，組合物可降低土壤線蟲數(shù)量65.0％，減少塊莖中侵入線蟲數(shù)量56.9％，根結(jié)指數(shù)防治效果達65.2％，增加馬鈴薯產(chǎn)量27.8％，綜合評價，高于總狀共頭霉Sr18發(fā)酵液與阿維菌素乳油單獨使用時的效果，但可降低阿維菌素用量50％。
表4生物殺線劑組合物對馬鈴薯根結(jié)線蟲的防治效果
以上所有試驗表明：上述組合物有較好的增效作用，對番茄、黃瓜、辣椒、馬鈴薯根結(jié)線蟲均有很好的防治效果，且可以減少阿維菌素的用量，延緩線蟲抗藥性的產(chǎn)生。
以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施實例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則以內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
本發(fā)明得到國家自然科學(xué)基金項目資助(項目編號31272019，31272022) 。