專利名稱:利用葡萄皮渣和酒糟固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)木霉菌的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域：
。
技術(shù)背景葡萄酒生產(chǎn)過程中要產(chǎn)生大量葡萄皮渣，這些葡萄皮渣主要是由葡萄皮、葡萄籽以及梗、葉組成，如果不妥善處理會(huì)對(duì)環(huán)境帶來嚴(yán)重污染。近來的研究表明，葡萄籽可以用來生產(chǎn)葡萄籽油和抗氧化劑(原花青素)等附加值較高的產(chǎn)品，而葡萄皮、梗和葉等除了少量用來作飼料(需嚴(yán)格檢測農(nóng)藥殘留)外，大部分用堆肥的方法處理。而這些皮渣中含有較高含量的纖維素類物質(zhì)和少量葡萄糖、果糖、有機(jī)酸以及其他多糖類物質(zhì)，可以為微生物生長提供良好營養(yǎng)，是微生物資源開發(fā)比較理想的營養(yǎng)來源之一。
木霉菌(Trichoderma sp.)在自然界中分布廣泛，是一種重要的生防菌，對(duì)多種植物真菌病害均有較好的防治作用。木霉菌生防作用的生化機(jī)制主要包括代謝幾丁質(zhì)酶、β-1，3-葡聚糖酶、蛋白酶等多種胞外酶，強(qiáng)烈水解植物病原真菌的細(xì)胞壁，從而殺滅病原菌；降解真菌細(xì)胞壁釋放出誘導(dǎo)劑，激發(fā)植物的防御反應(yīng)；代謝產(chǎn)生戊酮、辛酮、萜類、氨基酸衍生物、木霉菌素、膠霉毒素、綠木霉素、抗菌肽等抗菌素類物質(zhì)，抑制病原菌的生長；產(chǎn)生植物防御反應(yīng)的激發(fā)子，誘導(dǎo)植物抗病性；增強(qiáng)植物組織過氧化物酶、超氧化物歧化酶與過氧化氫酶、多酚氧化酶活性，保護(hù)膜脂不被氧化；產(chǎn)生毒性蛋白，或以多種機(jī)制的協(xié)同拮抗作用，抑制病原菌生長與繁殖。
文獻(xiàn)報(bào)道的作為生防劑的木霉菌生產(chǎn)方法所采用的培養(yǎng)基以糧食為主。如中國專利(公開號(hào)CN 1554242A)中公開了一種木霉菌的生產(chǎn)方法，其培養(yǎng)基主要是顆粒直徑在1-5毫米之間的小米、稻米、玉米、大麥、小麥或高梁。中國專利(公開號(hào)CN 1422946A)中公開了一種木霉菌的生產(chǎn)方法，其生產(chǎn)原料主要是大麥、麩皮、莜麥等。而以葡萄皮渣和酒糟作為培養(yǎng)基來生產(chǎn)木霉菌生防劑的方法還未見報(bào)道。木霉菌可以代謝多種纖維素和半纖維素酶，能有效利用富含纖維素類生物質(zhì)，在葡萄皮渣上生長良好。酒糟中含有大量酵母細(xì)胞以及其它葡萄酒生產(chǎn)過程中剩余的養(yǎng)分，可以為木霉菌生長提供多種營養(yǎng)。因此，用葡萄酒生產(chǎn)過程產(chǎn)生的廢棄物來生產(chǎn)木霉菌生防劑不僅可以降低生產(chǎn)成本，而且可以有效處理廢棄物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種利用葡萄酒生產(chǎn)過程產(chǎn)生的廢棄物(葡萄皮渣和酒糟)來生產(chǎn)木霉菌生防劑方法。
本發(fā)明所述的木霉菌生防劑的生產(chǎn)方法如下1、葡萄皮渣預(yù)處理由于葡萄籽中含有豐富的油脂和抗氧化劑，因此需要將葡萄籽先從皮渣中篩分出來，用作生產(chǎn)高附加值產(chǎn)品的原料。用篩分機(jī)篩分后的去除葡萄籽的皮渣曬干或烘干到含水量10％以下保存?zhèn)溆谩?br> 2、酒糟預(yù)處理葡萄酒的酒糟中酒精含量8％左右，采用蒸餾方法處理，并回收酒精，處理后的酒糟酒精含量小于1％。
3、液體種子制備向處理后的酒糟中添加2-5倍的水，高壓滅菌，接種木霉菌孢子，于25-35℃，耗氧深層培養(yǎng)24-48小時(shí)，得到液體種子。木霉菌菌種為綠色木霉(Trichoderma viride)、哈茨木霉(Trichoderma harziamum)、黃綠木霉(Trichodermaauxeoviride)或康氏木霉(Trichoderma koningii)。
4、固態(tài)發(fā)酵向經(jīng)過預(yù)處理的葡萄皮渣中加入1-3倍重量的液體種子，或先加入經(jīng)過稀釋的酒糟1-3倍重量，然后接種木霉菌孢子或液體種子。于20-35℃，靜態(tài)培養(yǎng)5-15天。
5、后處理培養(yǎng)好的物料經(jīng)干燥處理后，添加穩(wěn)定劑和助劑，粉碎，包裝。
由本發(fā)明技術(shù)方案生產(chǎn)的木霉菌生防劑能夠高效防治多種真菌類植物病害，而且無公害，生產(chǎn)成本低。以下通過具體實(shí)施例詳細(xì)說明本發(fā)明的實(shí)施，目的在于幫助讀者更好地理解本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)，但不作為對(duì)本發(fā)明實(shí)施范圍的限定。
實(shí)施例1原料預(yù)處理將剛出廠的葡萄皮渣用篩分設(shè)備分離出葡萄籽，將去籽的葡萄皮渣盡快曬干或烘干，以免發(fā)霉變質(zhì)。采用蒸餾方法處理葡萄酒的酒糟，并回收酒精。
液體種子制備向處理后的酒糟中添加3倍的水，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)其pH值到6.0。于121℃，滅菌15分鐘，接種木霉菌孢子，于30℃，搖瓶200轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)24小時(shí)，得到液體種子。
發(fā)酵產(chǎn)品稱取去籽后，經(jīng)干燥處理的葡萄皮渣20公斤，加入5倍稀釋的酒糟(預(yù)先調(diào)節(jié)pH到中性)30公斤，然后接種木霉菌液體種子3升，充分?jǐn)嚢杈鶆?。?0℃，固態(tài)發(fā)酵反應(yīng)器中培養(yǎng)10天。培養(yǎng)好的物料經(jīng)干燥處理后，添加穩(wěn)定劑和助劑，粉碎，包裝。
實(shí)施例2液體種子制備向處理后的酒糟中添加3倍的水，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)其pH值到6.0。于121℃，滅菌15分鐘，接種木霉菌孢子，于30℃，攪拌式深層發(fā)酵反應(yīng)器中，耗氧培養(yǎng)24小時(shí)，得到液體種子。
發(fā)酵產(chǎn)品稱取去籽后，經(jīng)干燥處理的葡萄皮渣20公斤，加入木霉菌液體種子35升，充分?jǐn)嚢杈鶆?。?0℃，固態(tài)發(fā)酵反應(yīng)器中培養(yǎng)10天。培養(yǎng)好的物料經(jīng)干燥處理后，添加穩(wěn)定劑和助劑，粉碎，包裝。
實(shí)施例3稱取去籽后，經(jīng)干燥處理的葡萄皮渣20公斤，加入5倍稀釋的酒糟(預(yù)先調(diào)節(jié)pH到中性)35公斤，然后接種木霉菌固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物3公斤，充分?jǐn)嚢杈鶆?。?0℃，固態(tài)發(fā)酵反應(yīng)器中培養(yǎng)10天。培養(yǎng)好的物料經(jīng)干燥處理后，添加穩(wěn)定劑和助劑，粉碎，包裝。
權(quán)利要求
1.一種木霉菌生防劑的生產(chǎn)方法，其特征在于，該生產(chǎn)方法是以葡萄酒生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的廢物葡萄皮渣和酒糟為生產(chǎn)原料進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)木霉菌。
2.權(quán)利要求
1所述的木霉菌生防劑的生產(chǎn)方法，其特征在于，木霉菌菌種為綠色木霉(Trichoderma viride)、哈茨木霉(Trichoderma harziamum)、黃綠木霉(Trichodermaauxeoviride)、康氏木霉(Trichoderma koningii)。
3.權(quán)利要求
1所述的木霉菌生防劑的生產(chǎn)方法，其特征在于，其生產(chǎn)原料，葡萄皮渣先經(jīng)過篩分處理，回收葡萄籽；酒糟先經(jīng)過蒸餾處理，回收酒精。
4.權(quán)利要求
1所述的木霉菌生防劑的生產(chǎn)方法，其特征在于，液體種子制備是向蒸餾處理后的酒糟中添加2-5倍的水，高壓滅菌，接種木霉菌孢子，于25-35℃，耗氧深層培養(yǎng)24-48小時(shí)。
5.權(quán)利要求
1所述的木霉菌生防劑的生產(chǎn)方法，其特征在于，固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基是由去除籽的葡萄皮渣與蒸餾出酒精的酒糟和水混合制備而成。固態(tài)發(fā)酵是在20-35℃，靜態(tài)培養(yǎng)5-15天。
專利摘要
本發(fā)明涉及一種木霉菌生防劑的生產(chǎn)方法，屬于生物農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域：
。該方法主要是以葡萄酒生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的葡萄皮渣和酒糟為生產(chǎn)原料，采用固態(tài)發(fā)酵的方法生產(chǎn)木霉菌生防劑。生產(chǎn)工藝包括(1)葡萄皮渣經(jīng)篩分處理，回收葡萄籽；(2)酒糟經(jīng)蒸餾處理，回收酒精；(3)去除酒精的酒糟經(jīng)稀釋后與去除籽的葡萄皮渣混合配制固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基；(4)培養(yǎng)基經(jīng)滅菌后接種木霉菌種進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵；(5)發(fā)酵產(chǎn)物經(jīng)干燥處理后添加穩(wěn)定劑和助劑，粉碎、包裝。該工藝生產(chǎn)的木霉菌生防劑能有效防治多種植物真菌病害，并且產(chǎn)品生產(chǎn)成本低，還可以有效處理廢棄物，減少環(huán)境污染。
文檔編號(hào)A01N63/04GKCN1718724SQ200510085465
公開日2006年1月11日 申請(qǐng)日期2005年7月21日
發(fā)明者白志輝, 郝春博, 金波, 王曉誼, 張占營, 張洪勛 申請(qǐng)人:中國科學(xué)院生態(tài)環(huán)境研究中心導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan