用植物組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù) 對這些個(gè)體進(jìn)行擴(kuò)繁獲得后代，選擇一個(gè)以上地區(qū)進(jìn)行抗熱鐵皮石斛穩(wěn)定性試驗(yàn)，選出優(yōu) 良后代培育成新品系。 IV.運(yùn)用植物組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行鐵皮石斛優(yōu)良種苗的擴(kuò)繁 運(yùn)用植物組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)將步驟III中所得的新品系快速繁殖，得到抗熱穩(wěn)定且有 效成分含量測定高的鐵皮石斛優(yōu)良種苗。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的三清山抗熱鐵皮石斛種苗培育方法，其特征在于具體步驟如 下： I :鐵皮石斛雜交育種 i. 收集三清山野生鐵皮石斛30份種質(zhì)，同時(shí)收集云南鐵皮石斛36份種質(zhì)； ii. 以三清山野生鐵皮石斛粗壯植株為母本，以云南鐵皮石斛粗壯植株為父本，進(jìn)行雜 交，得到蒴果，實(shí)施例1中，經(jīng)對所收集鐵皮石斛種質(zhì)進(jìn)行培育，經(jīng)植株間比較，選出整體表 現(xiàn)較好、有效成分含量高的植株作為新的母本和父本進(jìn)行雜交，選擇整體表現(xiàn)較好的標(biāo)準(zhǔn) 為：株高、莖桿形狀和粗壯度、節(jié)間縱紋顏色、葉片顏色這類外觀指標(biāo)；有效成分含量高的 標(biāo)準(zhǔn)是：含鐵皮石斛多糖即以含葡萄糖計(jì)不得少于25. 0%，含甘露糖為13. 0-38. 0%，實(shí)施 例1中的雜交是指在花期采用人工授粉的形式進(jìn)行； II :鐵皮石斛群體改良 i.將I(i)得到的蒴果播種在植物組織細(xì)胞培養(yǎng)基上萌發(fā)、培養(yǎng)，得到鐵皮石斛植株， 即為基礎(chǔ)群體，鐵皮石斛蒴果的標(biāo)準(zhǔn)為10-11月份選取外表發(fā)黃但未開裂、飽滿的蒴果， 操作方法為：把果實(shí)放入干凈的消毒容器中，加入75%酒精浸泡消毒果實(shí)，30秒后，將酒 精倒出，再加入0. 1 %生汞進(jìn)行果實(shí)表現(xiàn)消毒，輕搖容器，使果實(shí)滅菌徹底，然后倒出生汞 液體，再用無菌水沖洗4?5次，采用MS培養(yǎng)基+香蕉汁30g/L+0. 5mg/L NAA+白糖30g/ L+花寶3g/L為基質(zhì)，培養(yǎng)溫度30±2°C，相對濕度60-80%，每天光照8-12h，光照強(qiáng)度 1000-2000LX，待種子萌發(fā)后，再轉(zhuǎn)接至1/2MS+香蕉汁30g/L+白糖30g/L+花寶3g/L培養(yǎng)基 上進(jìn)行原球莖誘導(dǎo)增殖，然后轉(zhuǎn)接至MS+ 土豆汁30g/L+白糖30g/L+花寶3g/L+NAA0. 2mg/ L的培養(yǎng)基上進(jìn)行分化成苗，最后轉(zhuǎn)接至MS+0. 2mg/LNAA+30g/L土豆汁的培養(yǎng)基上進(jìn)行壯 苗生根，經(jīng)煉苗后即可作為大田用苗使用； ii. 將基礎(chǔ)群體置入人工模擬氣候箱中進(jìn)行培養(yǎng)，調(diào)節(jié)溫度控制，使氣候箱中的溫度保 持在30°C以上，根據(jù)基礎(chǔ)群體在人工氣候箱中的長勢和有效成分含量由高到低的順序選出 優(yōu)良單株50個(gè)； iii. 以ii中選出的優(yōu)良單株50個(gè)的蒴果（內(nèi)含種子）進(jìn)行植物組織細(xì)胞培養(yǎng)擴(kuò)繁， 獲得50個(gè)單株的優(yōu)良后代個(gè)體，進(jìn)行擴(kuò)繁所用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件同ii: iv. 選擇玉山、德興、婺源3個(gè)環(huán)繞三清山的種植區(qū)進(jìn)行鐵皮石斛單株優(yōu)良后代的比較 試驗(yàn)，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，從50個(gè)后代系中選擇出整體表現(xiàn)較好、有效成分含量高的的優(yōu)良后 代16個(gè)，除去未中選的所有鐵皮石斛植株，并將中選的16個(gè)優(yōu)良后代分別疏去部分植株， 并進(jìn)行相間移植，使其獲得充分受粉，種子成熟后混收種子，即為改良群體； III:運(yùn)用植物組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行鐵皮石斛優(yōu)良品系選育 在群體改良的第四個(gè)步驟中，選擇所需要的優(yōu)良個(gè)體，并利用植物組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù) 以蒴果（內(nèi)含種子）為材料對這些個(gè)體進(jìn)行擴(kuò)繁獲得后代，然后選擇3個(gè)不同種植地區(qū)進(jìn) 行抗熱鐵皮石斛穩(wěn)定性試驗(yàn)，選出抗熱且抗熱穩(wěn)定的優(yōu)良后代培育成新品系； IV.運(yùn)用植物組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行鐵皮石斛優(yōu)良種苗的擴(kuò)繁 運(yùn)用植物組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)根據(jù)II(i)的方法與條件以蒴果（內(nèi)含種子）進(jìn)行新品系 快速繁殖，得到抗熱穩(wěn)定且有效成分含量測定高的鐵皮石斛優(yōu)良種苗。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三清山抗熱鐵皮石斛種苗培育方法，其特征在于具體步驟如 下： I :鐵皮石斛雜交育種 i. 收集三清山野生鐵皮石斛30份種質(zhì)，同時(shí)收集云南鐵皮石斛36份種質(zhì)。 ii. 以三清山野生鐵皮石斛粗壯植株為母本，以云南鐵皮石斛粗壯植株為父本，進(jìn)行雜 交，得到蒴果，實(shí)施例2中，經(jīng)對所收集鐵皮石斛種進(jìn)行培育，經(jīng)植株間比較，選出整體表現(xiàn) 較好、有效成分含量高的植株作為新本進(jìn)行雜交，選擇整體表現(xiàn)較好的標(biāo)準(zhǔn)為：株高、莖桿 形狀和粗壯度、節(jié)間縱紋顏色、葉片顏色這類外觀指標(biāo)；有效成分含量高的標(biāo)準(zhǔn)是：含鐵皮 石斛多糖即以含葡萄糖計(jì)不得少于25. 0 %，含甘露糖為13. 0?38. 0 %，實(shí)施例2中的雜交 是指在花期采用人工授粉的形式進(jìn)行； II :鐵皮石斛群體改良 i.將I(i)得到的蒴果播種在植物組織細(xì)胞培養(yǎng)基上萌發(fā)、培養(yǎng)，得到鐵皮石斛植株， 即為基礎(chǔ)群體，鐵皮石斛蒴果的標(biāo)準(zhǔn)為10-11月份選取外表發(fā)黃但未開裂、飽滿的蒴果， 操作方法為：把果實(shí)放入干凈的消毒容器中，加入75%酒精浸泡消毒果實(shí)，30秒后，將酒 精倒出，再加入0. 1 %生汞進(jìn)行果實(shí)表現(xiàn)消毒，輕搖容器，使果實(shí)滅菌徹底，然后倒出生汞 液體，再用無菌水沖洗4?5次，采用MS培養(yǎng)基+香蕉汁30g/L+0. 5mg/LNAA+白糖30g/ L+花寶3g/L為基質(zhì)，培養(yǎng)溫度30±2°C，相對濕度60-80%，每天光照8-12h，光照強(qiáng)度 1000-2000LX，待種子萌發(fā)后，再轉(zhuǎn)接至1/2MS+香蕉汁30g/L+白糖30g/L+花寶3g/L培養(yǎng)基 上進(jìn)行原球莖誘導(dǎo)增殖，然后轉(zhuǎn)接至MS+ 土豆汁30g/L+白糖30g/L+花寶3g/L+NAA0. 2mg/L的培養(yǎng)基上進(jìn)行分化成苗，最后轉(zhuǎn)接至MS+O. 2mg/LNAA+30g/L土豆汁的培養(yǎng)基上進(jìn)行壯 苗生根，經(jīng)煉苗后即可作為大田用苗使用； ii. 將基礎(chǔ)群體置人工模擬氣候箱中進(jìn)行培養(yǎng)，調(diào)節(jié)溫度控制，使氣候箱中的溫度保持 在30°C以上，根據(jù)基礎(chǔ)群體在人工氣候箱中的長勢和有效成分含量由高到低的順序選出優(yōu) 良單株70個(gè)； iii. 以ii中選出的優(yōu)良單株70個(gè)的莖段或者根莖進(jìn)行植物組織細(xì)胞培養(yǎng)擴(kuò)繁，獲得 70個(gè)單株的優(yōu)良后代個(gè)體，進(jìn)行擴(kuò)繁所用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件同ii; iv. 選擇玉山、德興、婺源3個(gè)環(huán)繞三清山的種植區(qū)進(jìn)行鐵皮石斛單株優(yōu)良后代的比較 試驗(yàn)，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，從70個(gè)后代系中選擇出整體表現(xiàn)較好、有效成分含量高的的優(yōu)良后 代20個(gè)，除去未中選的所有鐵皮石斛植株，并將中選的20個(gè)優(yōu)良后代分別疏去部分植株， 并進(jìn)行相間移植，使其獲得充分受粉，種子成熟后混收種子，即為改良群體； III:運(yùn)用植物組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行鐵皮石斛優(yōu)良品系選育 在群體改良的第四個(gè)步驟中，選擇所需要的優(yōu)良個(gè)體，并利用植物組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù) 以莖段或根莖為材料對這些個(gè)體進(jìn)行擴(kuò)繁獲得后代，然后選擇3個(gè)不同種植地區(qū)進(jìn)行抗熱 鐵皮石斛穩(wěn)定性試驗(yàn)，選出抗熱且抗熱穩(wěn)定的優(yōu)良后代培育成新品系； IV.運(yùn)用植物組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行鐵皮石斛優(yōu)良種苗的擴(kuò)繁 運(yùn)用植物組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)根據(jù)II(i)的方法與條件以莖段或根莖為材料進(jìn)行新品 系快速繁殖，得到抗熱穩(wěn)定且有效成分含量測定高的鐵皮石斛優(yōu)良種苗。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種三清山抗熱鐵皮石斛種苗培育方法，通過鐵皮石斛雜交育種→鐵皮石斛群體改良→鐵皮石斛優(yōu)良品系選育→鐵皮石斛優(yōu)良種苗的擴(kuò)繁，本發(fā)明提高了鐵皮石斛優(yōu)良種苗選育的準(zhǔn)確性，加快雜交育種的速度，大大提高了鐵皮石斛育種效率；快速地為鐵皮石斛大田生產(chǎn)提供能夠保證鐵皮石斛質(zhì)量且抗熱穩(wěn)定的優(yōu)良種苗。
【IPC分類】A01H4-00
【公開號】CN104542293
【申請?zhí)枴緾N201510008369
【發(fā)明人】劉慧芬
【申請人】江西瀚野農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2015年1月1日