一種花曲柳的離體快速繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物生物技術(shù)中植物組織培養(yǎng)的方法，具體地說，涉及一種花曲柳的離體快速繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002]花曲柳(/Zrarizw1S rhynchophylla Hance.)屬于木犀科白臘樹屬落葉大喬木,是我國重要的經(jīng)濟硬闊樹種。花曲柳抗逆性較強，耐高溫、耐水濕、耐干旱，耐鹽堿。花曲柳具有較強的觀賞性，其體形端正，自然整枝良好，樹干通直，枝繁葉茂，濃蔭大。同時，可吸收空氣中的有害氣體，抗煙塵。木材堅硬致密，有彈性，為環(huán)孔材，花紋美麗，可供高級家具、建筑、車輛、農(nóng)具、扁擔(dān)、工具柄等用材；枝條韌性強，耐磨，是最好的編織原料；樹皮為中藥“秦皮”，可清肝熱、止痢、明目、主治腸炎；種子可榨油，供制肥皂。
[0003]花曲柳木材材質(zhì)堅硬細密，具有重要的經(jīng)濟價值、藥用價值和綠化觀賞價值，但由于自身生物學(xué)和生態(tài)學(xué)特性決定，分布范圍小，更新速度慢，生長緩慢，資源逐年減少，面臨滅絕危險。目前主要通過種子播種方式育苗，但由于花曲柳幼齡期長，具有明顯的結(jié)實間隔期，且種子繁殖需要復(fù)雜的催芽過程，出苗情況不易掌握、實生苗栽植后初期生長緩慢，而且培育周期度，有時已結(jié)實的大樹也經(jīng)常有被盜伐的危險，嚴重影響了種子的生產(chǎn)與苗木的繁殖，使花曲柳的天然更新受到限制而且不能滿足市場需求。目前關(guān)于花曲柳的組培繁殖研究幾乎沒有，因此急需建立完整的花曲柳離體快繁技術(shù)體系，以實現(xiàn)花曲柳優(yōu)良遺傳資源的快速繁殖，為我國的經(jīng)濟建設(shè)提供更多更好的珍貴木材和林產(chǎn)品。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供出一種花曲柳的離體快速繁殖方法，本發(fā)明以花曲柳休眠芽為外植體，經(jīng)過誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根誘導(dǎo)、煉苗及移栽等過程建立了花曲柳組培快繁體系，從而實現(xiàn)了本發(fā)明的目的。
[0005]本發(fā)明的一種花曲柳的離體快速繁殖方法，包括以下的步驟:
(I)叢生芽誘導(dǎo):采取花曲柳休眠枝條后置于室內(nèi)水培萌至發(fā)芽。水培萌發(fā)抽出的嫩枝用軟毛刷蘸洗衣粉水輕輕刷洗，切成3.0?5.0cm長的帶有2?3個腋芽的節(jié)段于0.2%高錳酸鉀溶液中磁力攪拌20?40min，自來水沖洗I?3h后置于超凈工作臺中，先用75%乙醇消毒5?30s后用無菌水洗3?5次,再用0.1%升萊溶液消毒5?15min,用無菌水沖洗4?6次再用無菌濾紙擦干表面的水珠后剪成長2.0?3.0cm帶芽莖段并接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基進行誘導(dǎo)培養(yǎng)。接種后先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)I?5天，然后置于每天光照10?12小時，光照強度為1500?30001x，直至誘導(dǎo)形成叢生芽。
[0006](2)增殖培養(yǎng):將步驟(I)誘導(dǎo)培養(yǎng)得到的叢生芽切割成并接種于增殖培養(yǎng)基上進行繼代培養(yǎng)，接種后先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)I?3天，然后置于每天光照12?14小時，光照強度為2000?30001x，置于培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)，多次反復(fù)切割進行繼代培養(yǎng)，以得到更多的叢生芽。
[0007](3)生根培養(yǎng):將步驟(2)過程獲得的叢生芽切割成2.0?3.0cm帶芽莖段并接種到生根培養(yǎng)基上進行誘導(dǎo)培養(yǎng)，接種后先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)I?3天，然后置于每天光照12?15小時，光照強度為2000?30001x，培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)至生根。
[0008](4)煉苗移栽:將步驟(3)獲得的高3.0?4.0cm的根系發(fā)達且葉片展的健壯試管苗在培養(yǎng)室內(nèi)敞口煉苗3?5天，仔細洗凈在根系上附著的培養(yǎng)基，移栽到草炭土:蛭石:珍珠巖=5:4:1的混合基質(zhì)中，保持濕度90%以上，以塑料薄膜覆蓋5?10天后揭去，15天后統(tǒng)計成活率。
[0009]上述步驟(I)所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:改良B5+l?3mg/L6-BA+0.5?1.0mg/LNAA+15?30g/L蔗糖+3.5?6.0g/L瓊脂，pH為5.4?5.8，其中改良B5培養(yǎng)基實為將B5培養(yǎng)基中Mg、Mn、Fe離子的元素含量分別替換為DKW中相應(yīng)各元素的含量。
[0010]上述步驟(2)所述的增殖培養(yǎng)基為Β5+0.I?1.0mg/LIBA+2?8mg/L 6-BA+15?30g/L 鹿糖 +3.5 ?6.0g/L 瓊脂，pH 為 5.4 ?5.8。
[0011]上述步驟(3)所述的生根培養(yǎng)基為:l/2MS+0.5?1.5mg/L NAA+15?30g/L蔗糖+3.5 ?6.0g/L 瓊脂，pH 為 5.4 ?5.8。
[0012]本發(fā)明的優(yōu)點是:一種花曲柳的離體快速繁殖方法，涉及應(yīng)用植物細胞全能性，在短時期產(chǎn)生大量遺傳性一致的花曲柳(/7Tarizw1S rhynchophylla Hance.)種苗的技術(shù)，以克服傳統(tǒng)繁殖技術(shù)存在的周期長、效率低等問題。本發(fā)明以花曲柳休眠芽為外植體，經(jīng)過誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根誘導(dǎo)、煉苗及移栽等過程建立了花曲柳組培快繁體系，以實現(xiàn)花曲柳優(yōu)良遺傳資源的快速繁殖，為我國的經(jīng)濟建設(shè)提供更多更好的珍貴木材和林產(chǎn)品。
【具體實施方式】
[0013]以下實施例是對本發(fā)明的進一步說明，不是對本發(fā)明的限制。
[0014]實施例1:
(I)叢生芽誘導(dǎo):采取花曲柳休眠枝條后置于室內(nèi)水培萌至發(fā)芽。水培萌發(fā)抽出的嫩枝用軟毛刷蘸洗衣粉水輕輕刷洗，切成3.0?5.0cm長的帶有2?3個腋芽的節(jié)段于0.2%高錳酸鉀溶液中磁力攪拌20min，自來水沖洗Ih后置于超凈工作臺中，先用75%乙醇消毒5s后用無菌水洗3次，再用0.1%升汞溶液消毒5min，用無菌水沖洗4次再用無菌濾紙擦干表面的水珠后剪成長2.0?3.0cm帶芽莖段并接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基進行誘導(dǎo)培養(yǎng)。接種后先在25°C條件下全暗培養(yǎng)I天，然后置于每天光照10小時，光照強度為15001x條件直培養(yǎng)32天即可形成叢生芽，誘導(dǎo)率為87.4%。誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:改良B5+lmg/L6-BA+0.5mg/L NAA+15g/L蔗糖+3.5g/L瓊脂，pH為5.4，其中改良B5培養(yǎng)基實為將B5培養(yǎng)基中Mg、Mn、Fe離子的元素含量分別替換為DKW中相應(yīng)各元素的含量。
[0015](2)增殖培養(yǎng):將步驟(I)誘導(dǎo)培養(yǎng)得到的叢生芽切割成并接種于增殖培養(yǎng)基上進行繼代培養(yǎng)，接種后先在25°C條件下全暗培養(yǎng)I天，然后置于每天光照12小時，光照強度為20001x，置于培養(yǎng)溫度為25°C的條件下培養(yǎng)28天即可繼代一次，增殖系數(shù)為4.92。多次反復(fù)切割進行繼代培養(yǎng)，以得到更多的叢生芽。所述的增殖培養(yǎng)基為B5+0.lmg/LIBA+3mg/L 6-BA+25g/L 蔗糖 +3.5g/L 瓊脂，pH 為 5.4。
[0016](3)生根培養(yǎng)