一種通過組織培養(yǎng)獲得高含量白藜蘆醇的虎杖人工種植方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物技術領域，涉及植物種植領域，具體為一種通過組織培養(yǎng)獲得高 含量白藜蘆醇的虎杖人工種植方法。
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【背景技術】
[0003] 虎杖為寥科虎杖多年生草本，別名陰陽蓮、活血龍、酸桿等，產(chǎn)陜西南部、甘肅南 部、華東、華中、華南、四川、云南及貴州，朝鮮、日本也有。根狀莖供藥用，有活血、散瘀、通 經(jīng)、鎮(zhèn)咳等功效?；⒄雀o富含虎杖苷、白藜蘆醇、大黃素、大黃酚、大黃酸槲皮素、槲皮 素-3-阿拉伯糖甙、槲皮素-3-半乳糖甙等，其提取物廣泛用于醫(yī)藥、保健品、化妝品等范 圍，國際市場需求空間很大。其中虎杖中白藜蘆醇是一種生物性很強的天然多酚類物質(zhì)，又 稱為芪三酚，是腫瘤的化學預防劑，也是對降低血小板聚集，預防和治療動脈粥樣硬化、心 腦血管疾病的化學預防劑，被譽為"21世紀的抗癌新星"。目前虎杖野生資源日漸枯竭，雖 有人工種植，但虎杖主要靠根莖繁殖和種子繁殖，而根莖繁殖，易造成根的生長量和采挖量 降低；種子繁殖，據(jù)野外觀察虎杖種子很少成熟發(fā)芽成苗。因此需要對虎杖人工種植方法進 行改進，以獲得高含量白藜蘆醇。
[0004]

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供通過組織培養(yǎng)獲得高含量白藜蘆醇的人工種植方法，通過 組織培養(yǎng)技術，瓶外生根技術，人工種植技術，獲得高含量白藜蘆醇的虎杖苗的方法。以滿 足虎杖人工種植的需要。
[0006] 為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用以下技術方案： 一種通過組織培養(yǎng)獲得高含量白藜蘆醇的虎杖人工種植方法，該方法包括以下步驟： (1)選地整地： 選氣候溫暖、雨量較好或灌溉方便的環(huán)境條件；肥沃、土層深厚、腐殖質(zhì)含量豐富的沙 質(zhì)土壤為宜。栽前應深翻土壤40-50cm，去除雜草、樹根等雜質(zhì)，并按行距90cm*35cm*35cm 進行挖明穴，底層施入農(nóng)家肥，農(nóng)家肥為人畜糞和草木灰的混合物，以質(zhì)量比計，人畜糞：草 木灰=3:1，農(nóng)家肥的施入量為2500kg/畝，農(nóng)家肥在施入的時候與細土拌勻備用。
[0007] (2)虎杖組培苗瓶外生根： 選取與專利"201410526530. x"中記載的健壯、生長均一的虎杖組培繼代叢生芽，將切 好的單芽在濃度為50mg/L的NAA浸泡5分鐘后，扦插到用50%1000倍多菌靈滅好菌的基 質(zhì)中。待其苗高IOcm左右，真葉10-15片，根5-6條，根長4-5cm時進行移栽，每畝種植量 約2500株為宜。所述的基質(zhì)為蛭石、河沙和草炭土的混合物，以質(zhì)量計，蛭石：河沙：草炭 土 =1:1: 2。50%1000倍多菌靈是指采用質(zhì)量百分含量為50%的多菌靈可濕性粉劑進行稀釋 1000 倍。
[0008] (3)田間種植： 將步驟（2)中的虎杖苗進行種植，種植以春季3-5月為宜，田間按密度35-40cm栽植種 苗，種栽深度5-lOcm，覆土，壓實，耙平，注意將底層老土覆蓋于表面，以減少雜草生長。
[0009] (4)田間管理： ①中耕除草：第一年，春季種植雜草易生，應及時除草，除草時以手工拔草為宜，若用鋤 頭等農(nóng)具時要淺拔，不要傷到虎杖的根，一般6-7天除草一次。第二年植株生長旺盛，可酌 情減少除草次數(shù)，一般春季為半個月為宜，夏秋季節(jié)一個月為宜，應盡量保持田間無雜草。
[0010] ②水分管理：移栽時澆少量定根水，遇久晴天或墑情不好，可以連續(xù)澆水3-5天， 少量多次為好?；⒄认矟駶櫍谟酌缟L期、干旱期、或施肥后應及時澆水，經(jīng)常保持土壤濕 潤，但在多雨季節(jié)或土壤積水時，尤其是在高溫高濕季節(jié)，要注意及時排水，加強通風，以保 證植株對水分的要求，提高虎杖的產(chǎn)量和質(zhì)量。
[0011] ③合理施肥：虎杖生物量較大，是喜肥植物，應多施土雜肥，家畜肥等有機肥。種植 前土壤施農(nóng)家肥2500kg/畝做基肥；生長季節(jié)，追施農(nóng)家肥1000 kg/畝，以覆蓋虎杖苗周圍 為主。第二年根莖生長快，是產(chǎn)量形成的關鍵時期，為了增產(chǎn)，可以配合施入農(nóng)家肥，或草木 灰，以提高產(chǎn)量。為了防止虎杖地上部分徒長，可以施濃度為〇. 1-0. 3%的磷酸二氫鉀，葉面 噴施為主，少量多次，4-5天/次，連續(xù)3-4次。噴施鉀肥的作用是抑制莖葉徒長，促進根部 膨大，達到增產(chǎn)的目的。
[0012] (5)病蟲害防治： 虎杖以蚜蟲為主要危害，在5月上旬至落葉前均有發(fā)生，可利用瓢蟲、草蛉等天敵防 治；蛾類，可利用赤眼蜂等天敵進行生物防治；金龜子等可利用金龜子也加的趨光性進行 黑光燈誘捕殺滅。
[0013] (6)采收加工： 以組織培養(yǎng)方式獲得虎杖植株一般2年為采收期，虎杖以根莖入藥，春秋季采挖為宜， 采挖后的根莖除去蘆頭、須根、尾梢，洗凈后切段或切片曬干，用麻袋或編織袋貯藏，注意防 霉，防蟲蛀。
[0014] 本發(fā)明的積極效果體現(xiàn)在： (一）本發(fā)明使用瓶外生根技術進行生根直接種植，而不需要經(jīng)過瓶內(nèi)生根及馴化煉苗 階段，縮短了育苗周期5-10天，降低了生產(chǎn)成本，培育優(yōu)質(zhì)健壯苗木。
[0015](二）采用植物組織培養(yǎng)技術獲得虎杖苗整齊、育苗質(zhì)量好、遺傳性質(zhì)穩(wěn)定等。
[0016](三）整個生長周期施肥全用農(nóng)家肥，病蟲害防治全部生物防治，整個過程幾乎無 農(nóng)藥及重金屬殘留，有效的保證了虎杖的質(zhì)量。
[0017](四）通過本發(fā)明獲得的白藜蘆醇含量可達0? 464-0. 532%，虎杖苷含量可達 2.651%- 2.853%，明顯比野外及普通人工種植高，畝產(chǎn)可達2000公斤，目前人工種植畝產(chǎn) 為1500公斤左右。已產(chǎn)優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的虎杖苗。
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【具體實施方式】： 為了使本發(fā)明的目的、技術方案及優(yōu)點更加清楚明白，下面結(jié)合【具體實施方式】對本發(fā) 明作進一步的詳細描述，但不應將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于下述實施例。
[0019] 實施例1: (1)選地整地： 選氣候溫暖、雨量較好或灌溉方便的環(huán)境條件；肥沃、土層深厚、腐殖質(zhì)含量豐富的沙 質(zhì)土壤為宜。栽前應深翻土壤40cm，去除雜草、樹根等雜質(zhì)，并按行距90cm*35cm*35cm進行 挖明穴，底層施入農(nóng)家肥(人畜糞：草木灰=3:1) 2500kg/畝與細土拌勻。備用。
[0020] (2)虎杖組培苗瓶外生根： 選取專利"201410526530. x"中健壯、生長均一的虎杖組培繼代叢生芽，將切好的單芽 在濃度為50mg/L的NAA浸泡5分鐘后，扦插到用50% 1000倍多菌靈滅好菌的基質(zhì)（輕石： 河沙：草炭土 =1:1:2)中。待其苗高5cm左右，真葉10-15片，根5-6條，根長4-5cm時進行 移栽，每畝種植量約2500株為宜。
[0021] (3)田間種植： 種植以春季3-5月為宜。將步驟（2)中獲得的虎杖苗田間按密度40cm栽植種苗，種栽 深度5cm，覆土，壓實，耙平，注意將底層老土覆蓋于表面，以減少雜草生長。
[0022] (1)田間管理： A、中耕除草：第一年，春季種植雜草易生，應及時除草，除草時以手工拔草為宜，若用鋤 頭等農(nóng)具時要淺拔，不要傷到虎杖的根，一般6-7天除草一次。第二年植株生長旺盛，可酌 情減少除草次數(shù)，一般春季為半個月為宜，夏秋季節(jié)一個月為宜，應盡量保持田間無雜草。
[0023] B、水分管理：移栽時澆少量定根水，遇久晴天或墑情不好，可以連續(xù)澆水3-5天， 少量多次為好?；⒄认矟駶?，在幼苗生長期、干旱期、或施肥后應及時澆水，經(jīng)常保持土壤濕 潤，但在多雨季節(jié)或土壤積水時，尤其是在高溫高濕季節(jié)，要注意及時排水，加強通風，以保 證植株對水分的要求，提高虎杖的產(chǎn)量和質(zhì)量。
[0024] C、合理施肥：虎杖生物量較大，是喜肥植物，應多施土雜肥，家畜肥等有機肥。種植 前土壤施農(nóng)家肥2500kg/畝做基肥；生長季節(jié)，追施農(nóng)家肥1000 kg/畝，以覆蓋虎杖苗周圍 為主。第二年根莖生長快，是產(chǎn)量形成的關鍵時期，為了增產(chǎn)，可以配合施入農(nóng)家肥，或草木 灰，以提高產(chǎn)量。為了防止虎杖地上部分徒長，可以施濃度為〇. 1%的磷酸二氫鉀，葉面噴施 為主，少量多次，4-5天/次，連續(xù)3-4次。噴施鉀肥的作用是抑制莖葉徒長，促進根部膨大， 達到增產(chǎn)的目的。
[0025] (5)病蟲害防治： 虎杖以蚜蟲為主要危害，在5月上旬至落葉前均有發(fā)生，可利用瓢蟲、草蛉等天敵防 治；蛾類，可利用赤眼蜂等天敵進行生物防治；金龜子等可利用金龜子也加的趨光性進行 黑光燈誘捕殺滅。
[0026] (6)采收加工： 以組織培養(yǎng)方式獲得虎杖植株一般2年為采收期，虎杖以根莖入藥，春秋季采挖為宜， 采挖后的根莖除去蘆頭、須根、尾梢，洗凈后切段或切片曬干，用麻袋或編織袋貯藏，注意防 霉，防蟲蛀。
[0027] 實施例2 : (1)選地整地： 選氣候溫暖、雨量較好或灌溉方便的環(huán)境條件；肥沃、土層深厚、腐殖質(zhì)含量豐富的沙 質(zhì)土壤為宜。栽前應深翻土壤40cm，去除雜草、樹根等雜質(zhì)，并按行距90cm*35cm*35cm進行 挖明穴，底層施入農(nóng)家肥(人畜糞：草木灰=3:1) 2500kg/畝與細土拌勻。備用。
[0028] (2)虎杖組培苗瓶外生根： 選取專利"201410526530. x"中健壯、生長均一的虎杖組培繼代叢生芽，將切好的單芽 在濃度為l〇〇mg/L的NAA浸泡8分鐘后，扦插到用50% 1000倍多菌靈滅好菌的基質(zhì)（輕石： 河沙：草炭土 =1:1