一種殺二化螟金龜子綠僵菌制劑及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種金龜子綠僵菌菌株的新應(yīng)用，具體涉及一種殺二化螟金龜子綠僵 菌制劑及其應(yīng)用，屬于生物農(nóng)藥領(lǐng)域。 技術(shù)背景
[0002] 二化螟是水稻常發(fā)性蛀莖害蟲(chóng)，廣泛分布于全國(guó)各稻區(qū)。我國(guó)一般發(fā)生年份，二化 螟造成水稻減產(chǎn)5%~10%，嚴(yán)重時(shí)高達(dá)20%~30%，嚴(yán)重的威脅著我國(guó)糧食生產(chǎn)。目前，主要施 用廣譜性化學(xué)農(nóng)藥控制二化螟，不僅直接影響人體健康和水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的安全，而且由于二 化螟產(chǎn)生抗藥性和化學(xué)農(nóng)藥大量殺傷二化螟天敵，破壞稻田生態(tài)平衡，嚴(yán)重削弱田間自然 控制能力，容易導(dǎo)致二化螟的再猖獗、難以控制。故采用安全的微生物制劑替代化學(xué)農(nóng)藥成 為防治二化螟控制的重要發(fā)展方向。
[0003]昆蟲(chóng)病原真菌是最重要的殺蟲(chóng)微生物類群，在自然條件下約70%的昆蟲(chóng)病害是 真菌引起的。殺蟲(chóng)真菌具有較強(qiáng)的擴(kuò)散能力，容易形成流行病，有助于害蟲(chóng)的持續(xù)控制；是 唯一具有觸殺特性的病原微生物，其致病機(jī)制復(fù)雜，因而盡管它是最早應(yīng)用于害蟲(chóng)防治的 微生物，但是仍未發(fā)現(xiàn)有抗性害蟲(chóng)產(chǎn)生，對(duì)解決害蟲(chóng)的抗藥性問(wèn)題極具潛力。因此，真菌殺 蟲(chóng)劑作為重要的替代農(nóng)藥，近年來(lái)受到廣泛關(guān)注。綠僵菌（Metarhizium)是最早用于防治 害蟲(chóng)的昆蟲(chóng)病原真菌之一，能感染全世界約有200多種昆蟲(chóng)。利用它來(lái)防治害蟲(chóng)的研宄與 實(shí)踐己愈百年，主要應(yīng)用于防治蝗蟲(chóng)、地下害蟲(chóng)、天牛等，但利用真菌控制二化螟尚未見(jiàn)到 相關(guān)報(bào)道。金龜子綠僵菌CQMa421是一株從自然感染的稻縱卷葉螟僵蟲(chóng)上分離篩選出的 一株生產(chǎn)性狀好、對(duì)稻縱卷葉螟具有高毒力殺蟲(chóng)真菌，己在中國(guó)專利CN102212483中公開(kāi)， 該菌株于2011年02月25日，在北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)、中國(guó)科學(xué)院微生物研 宄所的中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心（CGMCC)保藏，保藏編號(hào)：CGMCC NO. 4609,分類命名：金龜子綠僵菌小抱變種Metarhizium anisopliae var.anisopliae?該 菌株及其制劑對(duì)二化螟的毒力與防治效果未見(jiàn)報(bào)道。
[0004]可濕性粉劑是一種最基本的農(nóng)藥劑型，可制成懸濁液，進(jìn)行噴霧。殺蟲(chóng)真菌可濕性 粉劑是由真菌孢子粉中加入一定量的表面活性劑和填充料，通過(guò)過(guò)篩制成。由于真菌孢子 活性受潤(rùn)濕劑的影響，制劑中往往減少表面活性劑的用量，導(dǎo)致濕潤(rùn)分散效果差，同時(shí)產(chǎn)品 貯存期仍較短，很少超過(guò)12個(gè)月。 目前國(guó)內(nèi)外，分離得到能侵染二化螟的球抱白僵、黃綠綠僵菌菌株，但尚未報(bào)道侵染二 化螟的高毒力金龜子綠僵菌。因濕潤(rùn)分散特性、貯存穩(wěn)定性的問(wèn)題和田間防效受紫外照射 影響大，殺蟲(chóng)真菌可濕性粉劑雖有登記注冊(cè)，但一直沒(méi)有大量應(yīng)用。因此，篩選馴化高毒力 菌株和研制濕潤(rùn)分散特性良好、防效穩(wěn)定的真菌殺蟲(chóng)劑可濕性粉劑，延長(zhǎng)其貯存穩(wěn)定性，從 而促進(jìn)真菌殺蟲(chóng)劑在防治二化螟中的應(yīng)用，有利于減少水稻生產(chǎn)中化學(xué)農(nóng)藥的用量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的第一目的在于提供一種金龜子綠僵菌菌株在防治二化螟中的應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明第二目的在于提供一種金龜子綠僵菌制劑，該制劑耐紫外照射、保存期長(zhǎng)、 防效好。
[0007] 本發(fā)明第三目的在于提供一種增強(qiáng)金龜子綠僵菌毒力的方法。
[0008] 本發(fā)明目的是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的： 金龜子綠僵菌CQMa421菌株在制備防治二化螟的藥劑中的應(yīng)用，該菌株對(duì)二化螟具有 侵染作用，致死率可達(dá)到46. 5%。
[0009] 不同的綠僵菌菌株具有特定的寄主，如公開(kāi)報(bào)道：金龜子綠僵菌FI-1045菌株能 侵染甘鹿賂螬（Anoplophora glabripennis)，金龜子綠僵菌A ESALQ818菌株能侵染埃及 斑蚊（Aedes aegypti)，金龜子綠僵菌EAMb 09/01-Su菌株能侵染地中海果實(shí)幡，金龜子 綠僵菌TORL526菌株能侵染蘿卜蚜（Lipaphis erysimi)，金龜子綠僵菌M2菌株能侵染螺 旋粉虱（Aleurodicus dispersus Russell)，金龜子綠僵菌ICIPE-30菌株能侵染岡比亞按 蚊（anopheles gambiae)，金龜子綠僵菌ESC 1菌株能侵染白蟻，金龜子綠僵菌ATCC62176 能侵染甜菜根蛆（sugarbeet root maggot)，金龜子綠僵菌M105菌株能侵染幢蟲(chóng)，金龜子 綠僵菌廣譜菌株F-52能侵染賂螬（Anoplophora glabripennis)、核桃象甲、光滑足距小蠹 (Xylosandrus germanus)，金龜子綠僵菌廣譜菌株549能侵染煙草天蛾（Manduca sexta)、 埃及斑蚊（Aedes aegypti)，羅伯茨綠僵菌廣譜菌株ARSEF 23能侵染蝗蟲(chóng)、鱗翅目幼蟲(chóng)、甲 蟲(chóng)等。
[0010] 優(yōu)選地，上述防治二化螟的藥劑由綠僵菌CQMa421干孢子粉44-60%、硅藻土 30-40%、納米硅0.5-1%、羧甲基纖維素鈉3-5%、吐溫-80 3-5%和0P-10 3-5%組成，均以重 量百分比。
[0011] -種金龜子綠僵菌制劑，其特征在于：它是由娃藻土 30-40%、納米娃0. 5-1%、羧甲 基纖維素鈉3-5%、吐溫-80 3-5%、0P-10 3-5%和綠僵菌CQMa421干孢子粉44-60%組成，均 以重量百分比。
[0012] 上述各組分均為本領(lǐng)域明確的組分，吐溫-80為聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯、 簡(jiǎn)稱聚山梨酯-80, 0P-10為烷基酚聚氧乙烯醚，綠僵菌CQMa421在中國(guó)專利CN102212483 中公開(kāi)、該菌株于2011年02月25日在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心 (CGMCC)保藏、保藏編號(hào)：CGMCC NO. 4609 ;納米硅為粒徑為納米級(jí)的硅等。
[0013] 上述吐溫-80和0P-10優(yōu)選純度>95%的吐溫-80和0P-10;上述羧甲基纖維素鈉 (CMC)優(yōu)選純度大于95% ;上述硅藻土優(yōu)選為白色至淺褐色疏松粉末，純度大于85%，含水量 小于1% ;上述納米硅優(yōu)選為粒徑小于50nm。上述綠僵菌CQMa421干孢子粉為純孢子粉，含 孢量多150億孢子/克，含水量< 5%;以上均以質(zhì)量百分含量計(jì)。
[0014] 上述金龜子綠僵菌制劑中納米硅為惰性材料，能夠附著在真菌孢子表面，有效阻 隔了制劑中高濃度（3-5wt%)吐溫-80和0P-10的不良影響，有效保證了孢子的生物活性。
[0015] 進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明金龜子綠僵菌制劑，其特征在于：它是由娃藻土 35-40%、納 米硅0. 5-0. 8%、羧甲基纖維素鈉3-5%、吐溫-80 3-5%、0P-10 3-5%和綠僵菌CQMa421干孢 子粉45-55%組成，均以重量百分比。
[0016] 上述綠僵菌CQMa421干孢子粉優(yōu)選采用強(qiáng)毒力金龜子綠僵菌CQMa421孢子粉，所 述強(qiáng)毒力金龜子綠僵菌CQMa421孢子粉由以下方法得到：將金龜子綠僵菌CQMa421接種于 3-4齡二化螟幼蟲(chóng)，接種后在28°C、濕度50-70%的條件下飼養(yǎng)，將最先感病死亡的二化螟僵 蟲(chóng)，放入28°C、濕度為50-70%培養(yǎng)箱中保濕培養(yǎng)3-5天，使其昆蟲(chóng)表面生長(zhǎng)出新鮮孢子，如 上所述循環(huán)接種14次得到馴化后的金龜子綠僵菌CQMa421新鮮孢子；在無(wú)菌條件下，用接 種環(huán)挑取馴化后新鮮孢子在含有100微克/毫升氨芐青霉素的1/4SDA培養(yǎng)基平板上劃線， 將劃線好的培養(yǎng)皿翻轉(zhuǎn)放置于28°C恒溫箱中培養(yǎng)；3- 4日后挑選長(zhǎng)出的典型而無(wú)雜菌的 菌落，在菌落邊緣用移菌針挑取帶有菌絲的培養(yǎng)基一小塊，轉(zhuǎn)入試管斜面培養(yǎng)基中央，28°C 恒溫培養(yǎng)10-15天得到強(qiáng)毒力的金龜子綠僵菌CQMa421母種，將CQMa421菌株母種接種在 1/4SDA平板上，28°C培養(yǎng)15天，收集成熟分生孢子制得綠僵菌CQMa421干孢子粉。
[0017] 上述金龜子綠僵菌制劑的制備方法，是先將綠僵菌CQMa421干孢子粉和納米硅在 混合機(jī)中混勻，再依次加入硅藻土、羧甲基纖維素鈉、吐溫-80和0P-10,邊加入邊攪拌，直 至各組分完全混合均勻制得。
[0018] 一種增強(qiáng)金龜子綠僵菌毒力的方法，其特征在于：將金龜子綠僵菌CQMa421接種 于3-4齡二化螟幼蟲(chóng)，接種后在28°C、濕度50-70%的條件下飼養(yǎng)，將最先感病死亡的二化 螟僵蟲(chóng)，放入28°C、濕度為50-70%培養(yǎng)箱中保濕培養(yǎng)3-5天，使其昆蟲(chóng)表面生長(zhǎng)出新鮮孢 子，如上所述循環(huán)接種14次得到馴化后的金龜子綠僵菌CQMa421新鮮孢子；在無(wú)菌條件下， 用接種環(huán)挑取馴化后新鮮孢子在含有100微克/毫升氨節(jié)青霉素的1/4SDA培養(yǎng)基平板上 劃線，將劃線好的培