新型雄性蠶蟲(chóng)草培育工藝及培養(yǎng)蠶蟲(chóng)草母種的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及蟲(chóng)草培育領(lǐng)域，具體涉及一種新型雄性蠶蟲(chóng)草培育工藝。
【背景技術(shù)】
[0002] 冬蟲(chóng)夏草是一種名貴的中草藥，具有滋肺補(bǔ)腎、止血化痰、抗氧化、抗炎癥、抗癌 等多種顯著藥用活性，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)分析認(rèn)為，蟲(chóng)草素、蟲(chóng)草多糖、腺苷、蟲(chóng)草酸是蟲(chóng)草的主要活 性成分，蟲(chóng)草素具有抗腫瘤、抗衰老、抗菌、抗病毒、免疫調(diào)節(jié)、改善新陳代謝、清除自由基等 多種藥理作用；蟲(chóng)草多糖可提高人體免疫功能，升高白細(xì)胞，臨床已用于治療惡性腫瘤；腺 苷具有擴(kuò)張冠脈血管，增加血流量的作用；蟲(chóng)草酸可預(yù)防與治療腦血栓、腦出血、心肌梗塞、 長(zhǎng)期衰竭。冬蟲(chóng)夏草的這些活性成分都具有良好的臨床應(yīng)用前景，市場(chǎng)需求極大。蟲(chóng)草素、 蟲(chóng)草多糖、腺苷、蟲(chóng)草酸含量的高低是衡量蟲(chóng)草質(zhì)量的主要標(biāo)準(zhǔn)之一，一般認(rèn)為蟲(chóng)草素、蟲(chóng) 草多糖、腺苷、蟲(chóng)草酸含量高的蟲(chóng)草的藥用價(jià)值高。
[0003] 然而由于受生態(tài)環(huán)境的限制及過(guò)度采挖的影響，這一珍稀資源逐漸枯竭，天然蟲(chóng) 草資源已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿(mǎn)足市場(chǎng)需求。采用工廠化培育人工蟲(chóng)草成為最佳的替代選擇。人工培 育的蟲(chóng)草已被國(guó)家衛(wèi)生部批準(zhǔn)為新資源食品。
[0004] 目前市場(chǎng)上人工栽培蟲(chóng)草主要是利用大米（小麥）和蠶蛹做寄主培養(yǎng)出來(lái)的，其 中蛹蟲(chóng)草是研宄最為廣泛的人工蟲(chóng)草。與冬蟲(chóng)夏草相比，蛹蟲(chóng)草對(duì)寄主的要求不嚴(yán)，主要 藥用成分與冬蟲(chóng)夏草相近，因此開(kāi)展蛹蟲(chóng)草的人工栽培可以為解決冬蟲(chóng)夏草資源緊缺開(kāi) 辟一條有效途徑。然而目前蟲(chóng)草人工培育技術(shù)中仍然存在以下幾個(gè)主要問(wèn)題：（1)菌種資 源退化，活性成分含量不穩(wěn)定；（2)人工培養(yǎng)條件苛刻難以實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)；（3)人工蟲(chóng)草 產(chǎn)品欠缺深度開(kāi)發(fā)。
[0005] 經(jīng)過(guò)本發(fā)明前期研宄表明，以家蠶作為寄主接種蟲(chóng)草菌培育得到的蠶蟲(chóng)草，其活 性成分蟲(chóng)草素、蟲(chóng)草多糖、腺苷、蟲(chóng)草酸的含量均高于蛹蟲(chóng)草和天然冬蟲(chóng)夏草，且蠶蟲(chóng)草形 態(tài)比蛹蟲(chóng)草更接近天然蟲(chóng)草，因此蠶蟲(chóng)草具有極為廣闊的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值。然而，蠶蟲(chóng)草的開(kāi) 發(fā)與利用上還存在菌種不穩(wěn)定、人工培養(yǎng)條件苛刻、難以實(shí)現(xiàn)規(guī)模化生產(chǎn)等問(wèn)題亟待解決。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問(wèn)題，本發(fā)明提出一種利用雄性家蠶接種北蟲(chóng)草 菌生產(chǎn)高營(yíng)養(yǎng)功能性產(chǎn)品的工藝方法，具體如下：
[0007] 一種新型雄性蠶蟲(chóng)草培育工藝，包括步驟：
[0008] 1)選擇蠶蟲(chóng)草菌種；
[0009] 2)培養(yǎng)蠶蟲(chóng)草母種，并制成菌液；
[0010] 3)雄性蠶蟲(chóng)草培育，步驟包括：
[0011] 3. 1)選擇大眠開(kāi)口 2-5天的雄性家蠶活蠶作寄主；
[0012] 3. 2)消毒準(zhǔn)備；
[0013] 3. 3)采用注射的方法進(jìn)行接種，注射量為每條蠶2±0. 2微升；
[0014] 3. 4)對(duì)接種后的宿主在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng)：
[0015] 3. 4.1)死亡僵化期：
[0016] a、清洗：
[0017] 感染5天左右，有部分家蠶已經(jīng)硬化，將它們檢出，單獨(dú)存放，干燥保護(hù)；感染9~ 10天，對(duì)其余的硬化家蠶去除蠶身上雜物，單獨(dú)存放，干燥保護(hù)；
[0018] 將已硬化的蠶用水淘洗干凈，再用凈水沖洗至無(wú)渾濁水，而后漂凈；
[0019] b、晾干：
[0020] 將洗凈硬化的蠶體攤平，在陰涼地方風(fēng)干，干燥程度以手摸上去感覺(jué)不出濕滑，無(wú) 明顯水漬為準(zhǔn)；
[0021] 3. 4. 2)發(fā)菌期（自接種開(kāi)始的第10~16天）
[0022] 將晾干的蠶平攤在盒子里，不得疊在一起；裝盒完成后，蓋上蓋子放入黑暗環(huán)境里 進(jìn)行黑暗保護(hù)5~6天；其中環(huán)境的初始溫度為17~18°C，然后每隔1~2天加溫I°C，直 到溫度達(dá)到22~23°C，當(dāng)蠶體長(zhǎng)滿(mǎn)芝麻大小的白菌即可；
[0023] 3. 4. 3)轉(zhuǎn)色期（自接種開(kāi)始的第17~21天）
[0024] a、感光：
[0025] 對(duì)蠶體全天、充分利用散射進(jìn)行光照，光照期間必須在中午時(shí)分進(jìn)行遮陰；
[0026] 光照期間，光線(xiàn)不充足時(shí)必須以日光燈作為補(bǔ)充光源；需要注意觀察蠶體的菌絲 生長(zhǎng)情況，先長(zhǎng)白色菌絲，而后長(zhǎng)出草；
[0027] b、補(bǔ)水：
[0028] 注意觀察盒子里的水分情況，以蓋子上有細(xì)小水珠為宜，如無(wú)水珠，要進(jìn)行補(bǔ)水； 補(bǔ)水采用無(wú)菌水噴灑；
[0029] 3.4.4)出草期
[0030] a、生長(zhǎng)：（自接種開(kāi)始的第22~30天）
[0031] 生長(zhǎng)期的溫度控制在22~23°C ;
[0032] b、成熟采摘：
[0033] 從接種到收獲為30~40天，以不長(zhǎng)出子囊孢子為宜；采摘期的溫度控制在22~ 23。。。
[0034] 所述步驟1)中，蠶蟲(chóng)草母種選用的菌種為麥角菌目，麥角菌科，蟲(chóng)草屬，蠶蟲(chóng)草 菌。
[0035] 所述步驟3)中，選用雄性家蠶活蠶作宿主；雄性家蠶活蠶是在家蠶的養(yǎng)殖階段， 采用熒光處理方法，將雄性蠶卵與雌性蠶卵分離，分別進(jìn)行養(yǎng)殖；
[0036] 對(duì)雄性家蠶活蠶是采用添食抗生素的方式來(lái)抵抗病毒和其它雜菌的感染；
[0037] 抗生素：配置比例Ig選用氟苯尼考溶解于1. 5~2. 5千克斤水，噴施20千克桑 葉，添食雄性家蠶；如果第二天有零星死蠶，抗生素濃度增加一倍。
[0038] 所述步驟3. 1)大眠開(kāi)口是指第四次眠期結(jié)束成為五齡蠶后（第四次蛻皮結(jié)束 后），并開(kāi)始活動(dòng)吃桑葉了；不需進(jìn)行麻醉，直接將配置好的蠶蟲(chóng)草菌液對(duì)雄性家蠶蠶體進(jìn) 行注射。
[0039] 所述步驟3. 2)中，采用的菌液需要在無(wú)菌操作臺(tái)的無(wú)菌環(huán)境下操作配置完成，只 含有步驟1)得到的蠶蟲(chóng)草菌一種菌；注射器注射前高壓高溫消毒過(guò)，并且每注射完針管， 用酒精進(jìn)行一次消毒。
[0040] 所述步驟3. 3)中，注射位置在蠶背側(cè)部第三個(gè)環(huán)節(jié)處，將針尖平勢(shì)插入蠶體的節(jié) 間膜皮膚，刺入深度以確保家蠶不會(huì)死亡為準(zhǔn)；拔出時(shí)用手輕按壓一下傷口，防止體液流 出。
[0041] 一種適用于所述新型雄性蠶蟲(chóng)草培育工藝的培養(yǎng)蠶蟲(chóng)草母種的方法，包括步驟：
[0042] 1)分離：將成熟的蠶蟲(chóng)草子實(shí)體進(jìn)行分離操作，在培養(yǎng)皿中培養(yǎng)；
[0043] 培養(yǎng)基采用的是固體培養(yǎng)基，配方為：
[0044] I、200g 土豆加水煮20分鐘得到的過(guò)濾液；
[0045] 2、葡萄糖 20g;
[0046] 3、瓊脂 20g ;
[0047] 4、蛋白胨 2g;
[0048] 5、磷酸二氫鉀Ig ;
[0049] 6、硫酸鎂0.38;
[0050] 7、加水定容于1000ml，
[0051] 蠶蟲(chóng)草菌種分離的操作步驟是：1、挑選生長(zhǎng)旺盛的、較長(zhǎng)較粗的菌種較多的蠶蟲(chóng) 草子實(shí)體進(jìn)行分離
[0052] 2、用鑷子和小剪刀剪下子實(shí)體放入無(wú)菌的培養(yǎng)皿中
[0053] 3、先用70% -75%酒精浸泡剪下來(lái)的子實(shí)體進(jìn)行消毒
[0054] 4、再用0. 1 %升汞浸泡消毒，升汞可回收重復(fù)利用
[0055] 5、消毒完成后用無(wú)菌水沖洗三遍，使消毒劑不殘留
[0056] 6、將剪下來(lái)的一小段子實(shí)體從中間再分開(kāi)，分為三小丁
[0057] 7、一個(gè)培養(yǎng)皿中放三個(gè)小丁，呈三角分布放置剪下的菌種
[0058] 8、蓋上培養(yǎng)皿，寫(xiě)上菌種編號(hào)和日期，用密封條封好裝入保鮮袋
[0059] 9、將培養(yǎng)皿連同保鮮袋一起放入生化培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)，溫度設(shè)定為23°C，濕度因 為是在密封的培養(yǎng)皿中所以不進(jìn)行控制。一般2天時(shí)間菌絲可