3) 雄性蠶蟲草培育,步驟包括: 3. 1)選擇大眠開口 2-5天的雄性家蠶活蠶作寄主; 3. 2)消毒準備; 3. 3)采用注射的方法進行接種,注射量為每條蠶2±0. 2微升; 3. 4)對接種后的宿主在無菌環(huán)境下進行培養(yǎng): 3. 4. 1)死亡僵化期: a、 清洗: 感染5天左右,有部分家蠶已經硬化,將它們檢出,單獨存放,干燥保護;感染9~10 天,對其余的硬化家蠶去除蠶身上雜物,單獨存放,干燥保護; 將已硬化的蠶用水淘洗干凈,再用凈水沖洗至無渾濁水,而后漂凈; b、 晾干: 將洗凈硬化的蠶體攤平,在陰涼地方風干,干燥程度以手摸上去感覺不出濕滑,無明顯 水漬為準; 3. 4. 2)發(fā)菌期 將晾干的蠶平攤在盒子里,不得疊在一起;裝盒完成后,蓋上蓋子放入黑暗環(huán)境里進行 黑暗保護5~6天;其中環(huán)境的初始溫度為17~18°C,然后每隔1~2天加溫I°C,直到溫 度達到22~23°C,當蠶體長滿芝麻大小的白菌即可; 3. 4. 3)轉色期 a、 感光: 對蠶體全天、充分利用散射進行光照,光照期間必須在中午時分進行遮陰; 光照期間,光線不充足時必須以日光燈作為補充光源;需要注意觀察蠶體的菌絲生長 情況,先長白色菌絲,而后長出草; b、 補水: 注意觀察盒子里的水分情況,以蓋子上有細小水珠為宜,如無水珠,要進行補水;補水 采用無菌水噴灑; 3. 4. 4)出草期 a、 生長: 生長期的溫度控制在22~23 °C ; b、 成熟采摘: 從接種到收獲為30~40天,以不長出子囊孢子為宜;采摘期的溫度控制在22~23°C。2. 根據(jù)其權利要求1所述的新型雄性蠶蟲草培育工藝,其特征是所述步驟1)中,蠶蟲 草母種選用的菌種為麥角菌目,麥角菌科,蟲草屬,蠶蟲草菌。3. 根據(jù)其權利要求1所述的新型雄性蠶蟲草培育工藝,其特征是所述步驟3)中,選用 雄性家蠶活蠶作宿主;雄性家蠶活蠶是在家蠶的養(yǎng)殖階段,采用熒光處理方法,將雄性蠶卵 與雌性蠶卵分離,分別進行養(yǎng)殖; 對雄性家蠶活蠶是采用添食抗生素的方式來抵抗病毒和其它雜菌的感染; 抗生素:配置比例Ig選用氟苯尼考溶解于I. 5~2. 5千克斤水,噴施20千克桑葉,添 食雄性家蠶;如果第二天有零星死蠶,抗生素濃度增加一倍。4. 根據(jù)其權利要求1所述的新型雄性蠶蟲草培育工藝,其特征是所述步驟3. 1)大眠開 口是指蠶第四次眠期結束后,開始活動吃桑葉了,達到五齡蠶了;不需進行麻醉,直接將配 置好的蠶蟲草菌液對雄性家蠶蠶體進行注射。5. 根據(jù)其權利要求1所述的新型雄性蠶蟲草培育工藝,其特征是所述步驟3. 2)中,采 用的菌液均需在無菌操作臺的無菌環(huán)境下操作配置完成,只含有步驟1)得到的、且不含其 它雜菌的蠶蟲草菌一種菌;注射器注射前高壓高溫消毒過,并且每注射完針管,用酒精進行 一次消毒。6. 根據(jù)其權利要求1所述的新型雄性蠶蟲草培育工藝,其特征是所述步驟3. 3)中,注 射位置在蠶背側部第三個環(huán)節(jié)處,將針尖平勢插入蠶體的節(jié)間膜皮膚,刺入深度以確保家 蠶不會死亡為準;拔出時用手輕按壓一下傷口,防止體液流出。7. -種適用于權利要求1~6任一所述新型雄性蠶蟲草培育工藝的培養(yǎng)蠶蟲草母種的 方法,其特征是包括步驟: 1) 分離:將成熟的蠶蟲草子實體進行分離操作,在培養(yǎng)皿中培養(yǎng); 2) 移植:將培養(yǎng)皿中生長較好的蠶蟲草菌種移植到試管的斜面培養(yǎng)基上進行培養(yǎng); 3) 復壯:將試管中斜面培養(yǎng)基上的蠶蟲草菌種配制成菌液注射到蠶體,注射量是 2 ±0. 2微升/條蠶,促使菌種活性增強; 4) 將家蠶蠶體上生長的成熟的蠶蟲草子實體按照上述步驟1)~3)重新進行分離和移 植操作。8. 根據(jù)權利要求7所述的培養(yǎng)蠶蟲草母種的方法,其特征是所述蠶體為雄性家蠶的活 體;蠶體的生長期要求為第四次眠期結束成為五齡蠶后,開始活動吃桑葉。9. 根據(jù)權利要求7所述的培養(yǎng)蠶蟲草母種的方法,其特征是步驟1)中, a) 蠶蟲草菌種分離的操作步驟是: a_l)挑選生長旺盛的的蠶蟲草子實體進行分離; a_2)用鑷子和小剪刀剪下子實體放入無菌的培養(yǎng)皿中; a_3)先用70% -75%酒精浸泡剪下來的子實體進行消毒; a_4)再用0. 1 %升汞浸泡消毒,升汞可回收重復利用; a_5)消毒完成后用無菌水沖洗三遍,使消毒劑不殘留; a_6)將剪下來的一小段子實體從中間再分開,分為三小?。?a_7) -個培養(yǎng)皿中放三個小丁,呈三角分布放置剪下的菌種; a_8)蓋上培養(yǎng)皿,寫上菌種編號和日期,用密封條封好裝入保鮮袋; a_9)將培養(yǎng)皿連同保鮮袋一起放入生化培養(yǎng)箱進行培養(yǎng),溫度設定為23°C,濕度因為 是在密封的培養(yǎng)皿中所以不進行控制。一般2天時間菌絲可以長出來,4-5天白色菌絲長 成,呈小的圓形菌群,直徑在5mm左右是正常的; b) 在培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基采用的是固體培養(yǎng)基,配方為: b-1) 200g 土豆加水煮20分鐘得到的過濾液; b-2)葡萄糖20g ; b_3)瓊脂 20g ; b_4)蛋白胨2g ; b_5)磷酸二氫鉀Ig ; b_6)硫酸鎂0? 3g ; b_7)加水定容于1000 ml ; 步驟2)中,移植的操作步驟為: 2-1)將移植器在酒精燈上消毒,手拿的手柄也要進行消毒。 2-2)去掉培養(yǎng)皿上的封口條,選擇生長好的菌群進行移植; 2-3)打開培養(yǎng)皿用消過毒的移植器在選擇的生長較好的菌群上刮一下,移植器上就帶 上菌種; 2-4)將移植器伸入試管內,在斜面培養(yǎng)基上由內向外呈"Z"字型均勻涂抹完整; 2-5)移植完成后將試管口和試管塞在酒精燈上過一下,消毒; 2-6)將試管塞塞上,外面用報紙包好并用線扎好;寫明菌種編號和移植的日期; 2-7)放入生化培養(yǎng)箱進行培養(yǎng),約5~7天試管內的斜面培養(yǎng)基上長滿菌絲: 2-8)再過9~11天,菌絲就長得厚實了 : 2-9)放入5°C冰箱,冷藏20~25天,然后才能用于復壯接種使用; 本步驟的培養(yǎng)基與步驟1)的培養(yǎng)基相同; 步驟3)中,菌液的制備方法為: 1) 對研缽進行消毒滅菌; 2) 對藥匙及其手柄進行消毒; 3) 將藥匙手柄伸入試管內將菌種刮干凈; 4) 將菌種刮到研缽內研磨,然后加入無菌水,再研磨一下; 5) 取濾紙放在菌液液面上,用滴管吸取菌液,置于無菌瓶中; 6) 最后,倒水在試管中,將試管中的碎菌種沖洗下來,研磨后再吸取; 7) 加水一一研磨一一吸取重復操作,期間應將絮狀物過濾干凈; 8) 最后按照濃度要求補充無菌水到無菌瓶中; 9) 吸取無菌瓶中的菌液置入離心管中,菌液制作完成可以使用。10.根據(jù)權利要求7所述的培養(yǎng)蠶蟲草母種的方法,其特征是步驟3)中,菌液的保存溫 度為4±0. 5°C ;菌液的濃度為:蠶蟲草菌種的質量占9~12%。
【專利摘要】一種新型雄性蠶蟲草培育工藝,包括步驟:1)選擇蠶蟲草菌種;2)培養(yǎng)蠶蟲草母種,并制成菌液;3)雄性蠶蟲草培育。一種適用于所述新型雄性蠶蟲草培育工藝的培養(yǎng)蠶蟲草母種的方法,包括步驟:1)分離:將成熟的蠶蟲草子實體進行分離操作,在培養(yǎng)皿中培養(yǎng);2)移植:將培養(yǎng)皿中生長較好的蠶蟲草菌種移植到試管的斜面培養(yǎng)基上進行培養(yǎng);3)復壯:將試管中斜面培養(yǎng)基上的蠶蟲草菌種配制成菌液注射到蠶體,促使菌種活性增強;4)將家蠶蠶體上生長的成熟的蠶蟲草子實體按照上述步驟1)~3)重新進行分離和移植操作。本發(fā)明以雄性家蠶幼蟲為寄主人工栽培蠶蟲草,利用雄性家蠶幼蟲栽培蟲草較蠶蛹所需工時短、節(jié)省勞動力、成本低。
【IPC分類】A01G1/04
【公開號】CN104982225
【申請?zhí)枴緾N201510383370
【發(fā)明人】宗興, 周全珍, 周煜, 史亞江, 楊清, 朱衛(wèi)軍, 楊統(tǒng)一, 夏安扣
【申請人】溧陽市天目湖農業(yè)發(fā)展有限公司
【公開日】2015年10月21日
【申請日】2015年7月2日